竹節(jié)參總皂苷的抗腫瘤作用和毒性研究

鄧旭坤，米 雪，蔡 儉，尹文仲，李 游，趙碧群，蔣 捷，蔡 爽，吳 非

(1中南民族大學(xué)藥學(xué)院，武漢430074;2湖北民族學(xué)院附屬醫(yī)院，恩施445000)

竹節(jié)參，又名竹節(jié)三七、竹節(jié)人參、白三七，系五加科(Araliaceae)人參屬植物竹節(jié)參 Panax japonicus C.A.May.的干燥根，為常用中藥，味甘、微苦、性溫，具有散瘀止血、消腫止痛，祛痰止咳、補(bǔ)虛強(qiáng)壯的功效.用于癆嗽咯血、跌撲損傷、咳嗽痰多、病后虛弱等癥［1，2］.現(xiàn)代研究表明，竹節(jié)參主要的活性成分為皂苷類，尚含少量揮發(fā)油、多糖和氨基酸［3］，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)具有廣泛的藥理作用［4-7］.肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，在世界腫瘤相關(guān)的死亡中排名第三，嚴(yán)重威脅人類生命健康［8］.切除和移植肝臟是傳統(tǒng)的肝癌治愈方法，但復(fù)發(fā)率較高［9］，且約有80%患者確診時(shí)已無法手術(shù)，均大大降低了患者的生存率［10］.目前抗腫瘤藥物中化學(xué)藥品研發(fā)費(fèi)用昂貴，副作用較大，患者較難耐受;而中草藥中的活性化學(xué)成分來源廣泛，毒副作用較小，備受學(xué)者們關(guān)注.基于對(duì)竹節(jié)參總皂苷體內(nèi)抗腫瘤藥理研究較少，本研究觀察了竹節(jié)參總皂苷對(duì)移植性H22荷瘤小鼠的腫瘤抑制和毒性作用.

1 材料與方法

1.1 藥品、細(xì)胞和動(dòng)物

竹節(jié)參采自湖北省宜昌市五峰縣種植基地，經(jīng)湖北省宜昌市藥檢所鑒定.5-氟尿嘧啶(阿拉丁，批號(hào)5402)，氯化鈉注射液(武漢濱湖雙核藥業(yè)有限責(zé)任公司)，其他為市售分析純?cè)噭?SPF級(jí)昆明種雄性小鼠(18-22 g，湖北省疾病預(yù)防控制中心，4200400081).H22肝癌細(xì)胞購于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心.

1.2 樣品制備

總皂苷的提取:稱取竹節(jié)參藥材粉末，置圓底燒瓶中，加10倍量的60%乙醇于80℃加熱回流2 h，共提取3次.回收乙醇至無醇味，加水稀釋至0.2 g/mL待用.稱取500 g D101大孔樹脂用95%乙醇浸泡2 h后裝柱，用超純水沖洗大孔樹脂2 BV至無醇味.將生藥0.2 g/mL的竹節(jié)參提取液緩慢加入大孔樹脂中吸附2 h.用超純水沖柱2 BV至無醇味，以3 BV 70%乙醇洗脫，收集液體，回收溶劑，得總皂苷粉末［11-13］.用生理鹽水溶解，配制濃度依次為 2，4，8 mg/mL，一次性濾膜過濾后分裝于潔凈試管，4℃保存.

1.3 移植性H22荷瘤小鼠模型的建立

取生長旺盛無潰破的荷H22腹水瘤小鼠，頸椎脫臼處死，在超凈工作臺(tái)上從腹腔抽取乳白色瘤液，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后，用無菌氯化鈉注射液稀釋為1×106/mL的細(xì)胞懸液.于小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2 mL.

1.4 動(dòng)物分組與給藥

接種后將小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只.分別為模型對(duì)照組(NS，ip)，陽性組(5-FU，20mg/kg，ip)，竹節(jié)參劑量組(40，80，160mg/kg，ip).接種瘤液24 h后按0.02 mL/g給藥，每天1次，連續(xù)12 d，觀察記錄各組小鼠生存狀況并稱重.

1.5 指標(biāo)檢測

小鼠于末次給藥后禁食不禁水12 h以上，次日處死，剝離瘤塊、胸腺和脾臟，分別稱重，根據(jù)下式計(jì)算抑瘤率和胸腺、脾臟指數(shù).

抑制率(%)=(平均瘤重模型對(duì)照組－平均 瘤重實(shí)驗(yàn)組)/平均瘤重模型對(duì)照組×100%，

胸腺指數(shù)=10×胸腺重量(mg)/實(shí)驗(yàn)后體重(g)，

脾臟指數(shù)=10×脾臟重量(mg)/實(shí)驗(yàn)后體重(g).

1.6 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 竹節(jié)參總皂苷對(duì)移植性H22荷瘤小鼠腫瘤抑制作用

竹節(jié)參總皂苷對(duì)H22荷瘤小鼠抑制作用見表1.由表1可見，竹節(jié)參總皂苷對(duì)荷瘤小鼠表現(xiàn)出明顯的抑瘤作用，可使其瘤重明顯減輕:與模型對(duì)照組相比，竹節(jié)參總皂苷在40～160 mg/kg劑量范圍內(nèi)對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤生長抑制差異有顯著性(P＜0.01)，在160mg/kg時(shí)的抑瘤效果最好達(dá)48%.

表1 竹節(jié)參總皂苷對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤生長抑制作用Tab.1 The inhibitory effect of total saponins of Panax japonicus on growth of H22 tumor transplanted in mice

2.2 竹節(jié)參總皂苷對(duì)H22荷瘤小鼠免疫器官的重量及其指數(shù)的影響

竹節(jié)參總皂苷對(duì)H22荷瘤小鼠免疫器官的重量及其指數(shù)的影響結(jié)果見表2.由表2可見，空白組及竹節(jié)參總皂苷各劑量組荷瘤小鼠體重增加較為明顯，而5-FU組小鼠體重增加較少，說明竹節(jié)參總皂苷在40～160 mg/kg劑量范圍內(nèi)對(duì)小鼠的毒性作用較小.

就竹節(jié)參總皂苷對(duì)荷瘤小鼠的免疫器官影響而言，與模型空白組相比，5-FU組小鼠的胸腺、脾臟及指數(shù)顯著低于生理鹽水組小鼠(P＜0.01)，顯示5-FU和其他化療藥物一樣，對(duì)動(dòng)物的免疫系統(tǒng)具有抑制作用.而竹節(jié)參總皂苷三個(gè)劑量組小鼠的胸腺、脾臟及其指數(shù)均有明顯增加作用.說明竹節(jié)參對(duì)小鼠的毒性作用較小.

表2 竹節(jié)參總皂苷對(duì)H22荷瘤小鼠免疫器官重量及指數(shù)的影響Tab.2 The effect of total saponins of Panax japonicus on immune organ weight and immune indix of H22 mice

3 結(jié)語

竹節(jié)參含有多種化學(xué)成分，主要的活性成分為皂苷類，粗皂苷含量約為23.6%［14］.研究表明諸多皂苷類成分如人參皂苷、重樓皂苷、黃芪皂苷、九節(jié)龍?jiān)碥铡}藤子皂苷［15］等，對(duì)腫瘤生長有抑制作用，并能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡.為評(píng)價(jià)竹節(jié)參的抗腫瘤作用，本實(shí)驗(yàn)從整體的角度觀察了竹節(jié)參總皂苷對(duì)移植性H22荷瘤小鼠腫瘤生長的作用，結(jié)果表明竹節(jié)參總皂苷能顯著的抑制H22荷瘤小鼠腫瘤的生長，具有顯著的體內(nèi)抗腫瘤作用，且沒有常見化療藥所特有的副作用如明顯的體重減輕，抑制免疫系統(tǒng)等，這對(duì)腫瘤的治療具有重要的意義，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步的研究.

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