• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    適用于黃酒生物酸化浸米的乳酸菌篩選

    2013-11-09 00:45:16周高峰謝廣發(fā)
    食品與生物技術(shù)學(xué)報 2013年10期
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)酸總酸黃酒

    程 斐 , 周高峰 , 謝廣發(fā) , 陸 健 , 曹 鈺 *

    (1.江南大學(xué) 工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室,江蘇 無錫 214122;2.江南大學(xué) 生物工程學(xué)院,江蘇 無錫214122;3.浙江古越龍山紹興酒股份有限公司,浙江 紹興 312000;4.江南大學(xué) 糧食發(fā)酵工藝及技術(shù)國家工程實驗室,江蘇 無錫 214122)

    黃酒具有6 000多年的釀造歷史,它含有21種氨基酸和多種維生素成份以及許多種人體必需的微量元素,是一種具有很高營養(yǎng)價值的低酒精度飲料酒[1]。在黃酒釀造中,浸米是一個重要環(huán)節(jié),它不僅能使原料大米充分吸水膨脹便于蒸煮,更可以使米酸化,以調(diào)節(jié)發(fā)酵醪液的酸度,保障發(fā)酵的安全進(jìn)行。傳統(tǒng)黃酒釀造,浸米時間長,如傳統(tǒng)攤飯法釀酒,浸米時間長達(dá)16~20 d。在機(jī)械化黃酒生產(chǎn)工藝中采用較高溫度條件保溫浸漬,浸米時間縮短,但仍然需要4~5 d[2]。浸米過程不當(dāng)是引起黃酒發(fā)酵醪酸敗的主要原因之一。而浸米的質(zhì)量隨米質(zhì)、浸米環(huán)境等波動較大,這就導(dǎo)致了浸米環(huán)節(jié)的穩(wěn)定性較差[3]。目前對于黃酒生產(chǎn)中浸米環(huán)節(jié)的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于其他釀造環(huán)節(jié),主要集中于浸米水中微生物的認(rèn)識,浸米控制經(jīng)驗的總結(jié)以及不同品種米浸米特性的研究[4-7]。

    生物胺是生物體內(nèi)產(chǎn)生的一類低相對分子質(zhì)量含氮有機(jī)化合物的總稱。過量外源生物胺的攝入會引起血管、動脈和微血管的擴(kuò)大,導(dǎo)致生物體的不良反應(yīng)。酒生產(chǎn)過程中,乳酸菌分泌的氨基酸脫羧酶作用于氨基酸會產(chǎn)生生物胺[8]。而使用既無氨基酸脫羧酶活性,又能產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的生產(chǎn)菌株,能達(dá)到控制生物胺含量的目的[9-10]。

    作者采用乳酸菌的快速篩選方法,從黃酒釀造環(huán)節(jié)的樣品中分離篩選出能在浸米水中快速產(chǎn)酸,具有較廣的抑菌作用,且生物胺反應(yīng)陰性的菌株,來實現(xiàn)生物酸化浸米,快速提高米漿水的酸度,縮短浸米時間,并抑制雜菌的生長,提高浸米過程的穩(wěn)定性,且有效的降低米漿水中生物胺含量。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 樣品 糯米:購于無錫小三里橋糧油市場;浸米水:紹興古越龍山酒廠機(jī)械化釀造工藝和傳統(tǒng)釀造工藝不同浸米時間的浸米水樣品;酒藥和酒曲:古越龍山酒廠提供。

    1.1.2 培養(yǎng)基 MRS培養(yǎng)基,LB培養(yǎng)基[11],高錳酸鉀-溴化鉀平板[12],生物胺菌株活化培養(yǎng)基,液體脫羧酶培養(yǎng)基[13]。

    1.2 方法

    1.2.1 乳酸菌的分離 取不同來源的糯米,以料液比 1 kg∶1.5 L 于 30 ℃浸漬 24、48、72 h。 通過稀釋分離培養(yǎng)的方法,涂布于MRS平板上,30℃恒溫厭氧培養(yǎng)36 h,覆蓋上KMnO4-KBr瓊脂,30℃放置6 h,選取透明圈直徑與菌落直徑比較大的菌落[12],進(jìn)行革蘭氏染色、接觸酶反應(yīng)和葡萄糖產(chǎn)氣實驗[11],選取革蘭氏陽性,接觸酶反應(yīng)陰性,葡萄糖產(chǎn)氣陰性的菌株進(jìn)行保藏,進(jìn)行下步實驗。

    古越龍山酒廠取樣浸米水,按上述步驟分離。

    取酒藥和酒曲于添加有20 mg/L制霉菌素的MRS液體培養(yǎng)基中富集培養(yǎng)后,按上述步驟分離。

    1.2.2 生長和產(chǎn)酸實驗 菌株以5%的接種量接入液體MRS培養(yǎng)基中,30℃培養(yǎng),測培養(yǎng)24 h時的pH值、總酸和A600nm,每株菌3個平行。

    1.2.3 浸米水產(chǎn)酸實驗 種子液的制備:將活化的乳酸菌以5%的接種量接入MRS培養(yǎng)基中,30℃靜置培養(yǎng)16 h,8 000 r/min離心10 min,棄上清,加入無菌水重懸菌種;浸米:取糯米于250 mL錐形瓶中,以料液比1 kg∶1.5 L加入水,以體積分?jǐn)?shù)1%的接種量接入乳酸菌種子液,28℃培養(yǎng)48 h,過濾后測量浸米水的pH值和總酸,每株菌3個平行。

    1.2.4 乳酸菌的抑菌實驗[14-15]乳酸菌發(fā)酵液的制備:將活化的乳酸菌接入加有質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%CaCO3的MRS培養(yǎng)基中,30℃靜置培養(yǎng)48 h。發(fā)酵液以10 000 r/min離心10 min,取上清。

    指示菌菌懸液制備:接種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌于LB液體培養(yǎng)基,37℃過夜培養(yǎng)。用無菌水稀釋成105個/mL菌懸液,4℃保存待用。

    抑菌試驗:取指示菌菌懸液涂布于LB平板上,放置牛津杯于平板上,在牛津杯里加入200 μL菌株發(fā)酵液,置于4℃冰箱中12 h,37℃靜置培養(yǎng)16 h,觀察抑菌圈的大小。

    1.2.5 乳酸菌產(chǎn)生物胺能力實驗 將菌株在菌株活化培養(yǎng)基中活化4次。然后接種于液體脫羧酶培養(yǎng)基,30℃培養(yǎng)4 d后,觀察顏色變化。做3組平行,以空白培養(yǎng)基對照。

    1.2.6 16S rRNA分子生物學(xué)鑒定 提取DNA后,進(jìn)行16S rRNA擴(kuò)增[16],PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析。由上海生物工程有限公司進(jìn)行序列測定。根據(jù)測序所得的16S rRNA全序列在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行Blast比對后,選取GenBank中同源乳酸菌菌株序列,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

    1.2.7 菌株生理特性研究 活化后的菌種以體積分?jǐn)?shù)5%的接種量接入液體MRS培養(yǎng)基中,30℃培養(yǎng),每隔3 h取樣,測定pH值、總酸和A600nm,繪制產(chǎn)酸曲線和生長曲線,每組3個平行。

    1.2.8 生物酸化浸米 取糯米于錐形瓶中,以料液比1 kg∶1.5 L加入水,以體積分?jǐn)?shù)1%的接種量接入乳酸菌種子液 (與不接種的進(jìn)行對照),28℃培養(yǎng)48 h,觀察浸米的品質(zhì)和浸米水的狀態(tài)。過濾,取浸米水,測pH值和總酸以及生物胺含量[17-18]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 乳酸菌的分離

    MRS平板上覆蓋KMnO4-KBr瓊脂后,選取(D透明圈/D菌落)數(shù)值大的菌株,純化后得到160株乳酸菌疑似菌株。其中革蘭氏陽性,接觸酶反應(yīng)陰性,葡萄糖產(chǎn)氣陰性的菌株78株。

    2.2 生長和產(chǎn)酸實驗

    測上述78株菌30℃培養(yǎng)24 h后的pH值、總酸以及A600nm值,選取酸度在18 g/L以上,A600nm值5.0以上,pH值低于3.5的菌株,共得到10株菌。

    2.3 浸米水產(chǎn)酸實驗

    將10株菌進(jìn)行生物酸化浸米實驗,測浸米48 h的pH和總酸,結(jié)果見圖1。

    比較接種10株菌浸米48 h后浸米水的pH值和酸度,pH值均在3.4左右,差異性很小。酸度達(dá)到10 g/L 的有 B131、B94、B99、B142、B125、B101。

    2.4 抑菌試驗

    采用牛津杯瓊脂擴(kuò)散法做抑菌試驗,測量不同受試菌上抑菌圈的直徑(結(jié)果為3次平行實驗的平均值),結(jié)果如表1。

    表1 乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)物的抑菌效果Table 1 Inhibitory effect of lactic acid bacteria fermentation product

    由于發(fā)酵培養(yǎng)基中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%CaCO3,能充分中和乳酸,測離心后發(fā)酵液上清的pH值,均在5.0以上,可以排除乳酸對受試菌株的抑制作用,抑菌圈大小能較好的反映出菌體產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的能力。B94和B101的發(fā)酵液對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的生長均有較好的抑制作用,B125對3種受試菌株都沒有抑制作用,B99、B131和B142對部分受試菌株有一定的抑制作用。

    2.5 乳酸菌產(chǎn)生物胺能力試驗

    觀察液體脫羧酶培養(yǎng)基顏色變化:菌株不產(chǎn)生生物胺,則培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色,為陰性結(jié)果。菌株產(chǎn)生生物胺,培養(yǎng)基呈現(xiàn)紫色或者紫紅色,為陽性結(jié)果。從表2中可以看出,B101在加入組氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸的液體脫羧酶培養(yǎng)基中不產(chǎn)生物胺,其他幾株菌均有生物胺產(chǎn)生。

    表2 測試菌產(chǎn)生物胺情況Table 2 Strains activity of producing BA

    綜合浸米水產(chǎn)酸、抑菌試驗和生物胺產(chǎn)生試驗,B101是一株適合生物酸化浸米菌株。

    2.6 序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

    以通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,經(jīng)體積分?jǐn)?shù)1%瓊脂糖凝膠電泳,得到約1 500 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物(圖2)。將B101菌株的16S rRNA序列結(jié)果輸入GenBank用Blast軟件進(jìn)行序列同源性比較,用MEGA5軟件對測序結(jié)果與同源種屬代表菌株的的16S rRNA采用Neighbour-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 (圖3),B101與Lactobacillus plantarum subsp.plantarum strain ST-Ⅲ親緣關(guān)系最近,可初步確定B101號菌株為Lactobacillus plantarum。

    圖2 B101的16S rRNA的PCR產(chǎn)物電泳圖Fig.2 Electrophoresis of PCR products of 16S rRNA of B101

    圖3 B101的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹Fig.3 Phylogenetic tree based on the complete 16S rRNA sequence of strain B101

    2.7 菌株生理特性研究

    將B101以體積分?jǐn)?shù)5%的接種量接入MRS培養(yǎng)基中,每隔3 h取樣,測其pH值、A600nm和總酸,繪制產(chǎn)酸曲線和生長曲線,結(jié)果見圖4。

    從圖4中可以看出pH值在0~12 h迅速下降,12~21 h下降速度緩慢,21 h后保持穩(wěn)定在3.6左右;0~12 h產(chǎn)酸速度較快,之后酸度增加較慢,到33 h后基本保持不變。B101的菌體量在培養(yǎng)了12 h后達(dá)到最大值,12~18 h菌體量基本不變,18h后略微降低。

    圖4 L.plantarum B101的pH變化、生長、產(chǎn)酸曲線Fig.4 Growth curves、ability of producing acid and pH changes of L.plantarum B101

    生長初期,培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分豐富,生長條件適宜,菌體迅速生長,產(chǎn)酸速度也較快。隨著菌體的生長,營養(yǎng)物質(zhì)被消耗,乳酸的產(chǎn)生,降低了生長環(huán)境的pH值,菌體的生長受到抑制,產(chǎn)酸速度也減緩。18 h時發(fā)酵液中的pH降低到3.7左右,受pH的影響,乳酸菌出現(xiàn)菌體的自溶,菌濃降低,產(chǎn)酸速度緩慢。

    2.8 生物酸化浸米

    使用B101進(jìn)行生物酸化浸米。如圖5所示,左為自然浸米,右為接種的生物酸化浸米。自然浸米的浸米水氣味不宜,表面出現(xiàn)了較多的泡沫,而且出現(xiàn)了“白花”狀物質(zhì),顯微鏡下觀察“白花”為絲狀真菌;生物酸化浸米的浸米水品質(zhì)比較均一,無泡沫和“白花”出現(xiàn),而且氣味比較宜人。

    圖5 自然浸米與生物酸化浸米的比較Fig.5 Comparison of natural soaking and biological acidification soaking with LAB

    由表3可以看出,生物酸化浸米浸米水pH值明顯低于自然浸米,酸度明顯高于自然浸米;通過平行樣品中的誤差分析可以看出,生物酸化浸米,各個平行間波動小,穩(wěn)定性良好,而自然發(fā)酵浸米過程控制相同的發(fā)酵條件,穩(wěn)定性較差。添加乳酸菌進(jìn)行生物酸化浸米可以加快米漿水升酸速度,且在一定程度上解決自然發(fā)酵浸米過程中穩(wěn)定性差的問題。

    由表4可以看出,使用生物酸化浸米,浸米水中腐胺和尸胺的質(zhì)量濃度明顯降低,總的生物胺質(zhì)量濃度降低了52.7%。

    表3 浸米水總酸質(zhì)量濃度和pH值Table 3 pH and acidity of seriflux

    表4 浸米水中生物胺質(zhì)量濃度Table 4 Mass concentration AB in seriflux(mg/L)

    3 結(jié)語

    從黃酒釀造環(huán)節(jié)的樣品中分離篩選得到優(yōu)良乳酸菌B101,經(jīng)16S rRNA寡核苷酸堿基序列分析鑒定菌株為植物乳酸菌。此菌具有較廣的抑菌作用,且生物胺反應(yīng)陰性,其在生物酸化浸米過程中可以快速提高米漿水的酸度,縮短浸米時間,并抑制雜菌的生長,提高浸米過程的穩(wěn)定性,且有效的降低米漿水中生物胺質(zhì)量濃度,是一株極具工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用價值的生物酸化菌株。

    [1]方心芳.中國酒文化和中國名酒[M].北京:中國食品出版社,1989.

    [2]謝廣發(fā).黃酒釀造技術(shù)[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,2010.

    [3]毛青鐘,俞關(guān)松.黃酒生產(chǎn)中不同品種米浸米特性的研究[J].釀酒,2010,37(4):70-73.MAO Qing-zhong,YU Guang-song.Different varieties of Chinese rice wine production characteristics of rice-dip-meter[J].Liquor Making,2010,37(4):70-73.(in Chinese)

    [4]汪建國,汪陸翔.大米品種和品質(zhì)與黃酒釀造關(guān)系的探討[J].中國釀造,2006,9:60-63.WANG Jian-guo,WANG Lu-xiang.Discussion on the relationship between rice and rice wine brewing[J].China Brewing,2006,9:60-63.(in Chinese)

    [5]毛青鐘.黃酒浸米漿水及其微生物變化和作用[J].釀酒科技,2004,3:73-76.MAO Qing-zhong.Seriflux of yellow rice wine and its microbe change and functions[J].Liquor-making Science and Technology,2004,3:73-76.(in Chinese)

    [6]楊百榮.紹興黃酒生產(chǎn)中米漿酸的控制[J].釀酒科技,2001,6:110-113.YANG Bai-rong.Control of serous acid in the production of Shaoxing yellow rice wine[J].Liquor-making Science and Technology,2001,6:110-113.(in Chinese)

    [7]毛青鐘,陳細(xì)丹.黃酒浸米漿水表面微生物的研究[J].江蘇調(diào)味副食品,2009,26(3):19-21.MAO Qing-zhong,HEN Xi-dan.Research on the surfacem icroorganism in the seriflux of yellow rice wine[J].Jiangsu Condiment and Subsidiary Food,2009,26(3):19-21.(in Chinese)

    [8]SIMT A Y,DU TOIT W J,DU TOIT M.Biogenic amines in wine:understanding the headache[J].South African Journal for Enology and Viticulture,2008,29(2):109-127.

    [9]JOOSTEN H,NUNEZ M.Prevention of histamine formation in cheese by bacteriocin-producing lactic acid bacteria[J].Applied and Environmental Microbiology,1996,62(4):1178-1181.

    [10]HERRERO-FRESNO A,MATINEZ N,SANCHEZ-LLANA E,et al.Lactobacillus casei strains isolated from cheese reduce biogenic amine accumulation in an experimental model[J].International Journal of Food Microbiology,2012,157(2):297-304.

    [11]張剛.乳酸細(xì)菌:基礎(chǔ)、技術(shù)和應(yīng)用[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2007:450-451.

    [12]蔣雪薇,盛燦梅,周倩,等.瓊脂塊法快速平板初篩米根霉L-乳酸高產(chǎn)菌[J].食品與機(jī)械,2010,26(3):8-10.JIANG Xue-wei,SHENG Can-mei,ZHOU Qian et al.A rapid plate selection method for L-lactic acid producing strain of rhizopus oryzae with agar block[J].Food and Machinery,2010,26(3):8-10.(in Chinese)

    [13]孟甜.乳酸菌產(chǎn)生物胺的鑒定及食品中生物胺的檢測[D].無錫:江南大學(xué),2009.

    [14]CASLA D,REQUENA T,GOMEZ R.Antimicrobial activity of lactic acid bacteria isolated from goats,milk and artisanal cheeses:characteristics of a bacteriocin produced by Lactobacillus curvatus IFPL105[J].Journal of Applied Microbiology,1996,81(1):35-41.

    [15]GAO Y,JIA S,GAO Q,et al.Novel bacteriocin with a broad inhibitory spectrum produced by Lactobacillus sake C2,isolated from traditional Chinese fermented cabbage[J].Food Control,2010,21(1):76-81.

    [16]張中華,管政兵,梁小剛,等.PCR-DGGE分析紹興黃酒麥曲中細(xì)菌群落方法的建立[J].食品工業(yè)科技,2012,33(14):206-213.ZHANG Zhong-hua,GUAN Zheng-bing,LIANG Xiao-gang,et al.Establishment of PCR-DGGE for analysing the bacterial community of Shaoxing rice wine wheat Qu[J].Science and Technology of Food Industry,2012,33 (14):206-213. (in Chinese)

    [17]PINEDA A,CARRASCO J,PENA-FARFAL C,et al.Preliminary evaluation of biogenic amines content in Chilean young varietal wines by HPLC[J].Food Control,2012,23(1):251-257.

    [18]趙慶喜,薛長湖,徐杰,等.反相高效液相色譜-柱后衍生法分析檢測魷魚中的生物胺[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報,2007,26(3):14-19.ZHAO Qing-xi,XUE Chang-hu,XU Jie,et al.Determination of biogenic amines in squid by reversed phase high-performance liquid chromatography and post-column derivatization[J].Jounal of Food Science and Biotechnology,2007,26(3):14-19.(in Chinese)

    猜你喜歡
    產(chǎn)酸總酸黃酒
    十堰地區(qū)六個油橄欖品種果實外觀和品質(zhì)性狀分析
    葡萄皮渣醋制作工藝優(yōu)化及抗氧化活性研究
    黃酒為引更助藥力
    薄荷復(fù)方煎液對齲病及牙周病常見致病菌生理活性的抑制作用
    初探影響液態(tài)法米酒總酸總酯的因素
    產(chǎn)酸沼渣再利用稻秸兩級聯(lián)合產(chǎn)酸工藝研究
    IC厭氧反應(yīng)器+A/O工藝在黃酒廢水處理中的應(yīng)用
    滴定法測定食醋中總酸含量及其不確定度評定
    芍藥總多糖抑齲作用的體外研究
    Shaoxing Wine Goes International
    文化交流(2016年1期)2016-03-25 09:16:32
    av有码第一页| 成人国产av品久久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 少妇的丰满在线观看| 男女免费视频国产| videos熟女内射| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 天天添夜夜摸| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产视频一区二区在线看| 国产1区2区3区精品| 亚洲国产欧美在线一区| 成人手机av| 久久中文看片网| 久久人人97超碰香蕉20202| 精品一区二区三区av网在线观看 | 久久久久国内视频| 啦啦啦免费观看视频1| 中文字幕精品免费在线观看视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 黄色视频不卡| 亚洲第一av免费看| 少妇 在线观看| 一级毛片女人18水好多| 国产单亲对白刺激| 欧美日韩成人在线一区二区| 天堂中文最新版在线下载| 在线永久观看黄色视频| 18禁观看日本| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久热在线av| 久久九九热精品免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 深夜精品福利| 亚洲第一av免费看| 丝袜在线中文字幕| 免费在线观看日本一区| 99精品久久久久人妻精品| 国产在线免费精品| 悠悠久久av| 亚洲国产欧美网| av天堂久久9| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99在线人妻在线中文字幕 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一级片免费观看大全| 老司机影院毛片| 亚洲,欧美精品.| 少妇精品久久久久久久| 午夜激情av网站| 国产av国产精品国产| 国产精品亚洲av一区麻豆| 电影成人av| 最新的欧美精品一区二区| 老司机影院毛片| 国产一卡二卡三卡精品| av线在线观看网站| 久久久精品区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 国产片内射在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品国产一区二区久久| 国产色视频综合| 视频在线观看一区二区三区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 午夜福利一区二区在线看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一级黄色大片毛片| 午夜福利影视在线免费观看| 一级毛片精品| 搡老乐熟女国产| 成人三级做爰电影| 国产精品亚洲av一区麻豆| 一进一出抽搐动态| 欧美日韩视频精品一区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产一区二区激情短视频| 高清视频免费观看一区二区| tube8黄色片| 午夜福利影视在线免费观看| 精品欧美一区二区三区在线| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产精品偷伦视频观看了| 天天添夜夜摸| 午夜福利在线免费观看网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产精品久久久av美女十八| 欧美成人午夜精品| 中亚洲国语对白在线视频| 国产欧美亚洲国产| 欧美黑人精品巨大| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩一区二区三区影片| 国产亚洲精品一区二区www | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产黄色免费在线视频| 国产免费现黄频在线看| 亚洲,欧美精品.| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久久久久久国产电影| 激情视频va一区二区三区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产精品久久电影中文字幕 | 最新美女视频免费是黄的| 久久久久久久久免费视频了| 91精品三级在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日本av手机在线免费观看| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲av国产av综合av卡| a级毛片在线看网站| 人成视频在线观看免费观看| 日韩欧美免费精品| 在线天堂中文资源库| 1024香蕉在线观看| 天天影视国产精品| 国产精品免费视频内射| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 91大片在线观看| 国产单亲对白刺激| 免费观看a级毛片全部| 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美成人午夜精品| 黑人操中国人逼视频| 亚洲情色 制服丝袜| 夫妻午夜视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 精品国产乱子伦一区二区三区| 9色porny在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 一级毛片精品| 久久久久久久久免费视频了| 大片电影免费在线观看免费| 99热网站在线观看| av福利片在线| a在线观看视频网站| av网站免费在线观看视频| 国产伦人伦偷精品视频| 男女之事视频高清在线观看| 国产在线免费精品| 亚洲av电影在线进入| 午夜福利免费观看在线| 久久中文字幕人妻熟女| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产欧美亚洲国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲熟妇熟女久久| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产在线视频一区二区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| videosex国产| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 免费在线观看日本一区| 国产精品欧美亚洲77777| 成人18禁在线播放| 亚洲免费av在线视频| 久久久国产成人免费| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 青草久久国产| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲国产av新网站| 视频区图区小说| 欧美成狂野欧美在线观看| 午夜福利在线观看吧| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 精品福利永久在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产亚洲精品第一综合不卡| 乱人伦中国视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲美女黄片视频| 久热这里只有精品99| 国产高清激情床上av| 99在线人妻在线中文字幕 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 亚洲美女黄片视频| 日韩视频在线欧美| 亚洲第一av免费看| 国产一区有黄有色的免费视频| 99久久人妻综合| 午夜福利视频在线观看免费| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品一品国产午夜福利视频| 久久久精品免费免费高清| 国产91精品成人一区二区三区 | 日韩有码中文字幕| 亚洲天堂av无毛| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲国产av影院在线观看| 桃花免费在线播放| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 午夜免费鲁丝| 色视频在线一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 久久国产亚洲av麻豆专区| 免费在线观看日本一区| 在线观看舔阴道视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产免费av片在线观看野外av| 一进一出好大好爽视频| 黄色视频不卡| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧美成狂野欧美在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品国产一区二区精华液| √禁漫天堂资源中文www| 9色porny在线观看| 国产1区2区3区精品| 在线 av 中文字幕| 亚洲三区欧美一区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产欧美亚洲国产| 99国产综合亚洲精品| 老鸭窝网址在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 99热网站在线观看| 高清在线国产一区| 黄色怎么调成土黄色| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产亚洲一区二区精品| 丁香六月天网| 涩涩av久久男人的天堂| 久热这里只有精品99| 亚洲精品粉嫩美女一区| 夜夜爽天天搞| 99久久国产精品久久久| av一本久久久久| 黄色丝袜av网址大全| 日日夜夜操网爽| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品亚洲一级av第二区| 一级a爱视频在线免费观看| 成人特级黄色片久久久久久久 | 国产亚洲一区二区精品| 97人妻天天添夜夜摸| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 老熟女久久久| 久久亚洲精品不卡| 国产在线免费精品| 男女边摸边吃奶| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久久国产一级毛片高清牌| 搡老乐熟女国产| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲精品国产区一区二| www.自偷自拍.com| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 香蕉丝袜av| 最黄视频免费看| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产精品免费视频内射| 999久久久国产精品视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产成人精品无人区| 中国美女看黄片| 无人区码免费观看不卡 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 色94色欧美一区二区| 亚洲五月婷婷丁香| 欧美一级毛片孕妇| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产日韩欧美视频二区| 精品亚洲成国产av| 国产91精品成人一区二区三区 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 午夜福利视频在线观看免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 香蕉丝袜av| 99久久国产精品久久久| 国产成人av激情在线播放| 757午夜福利合集在线观看| 99久久人妻综合| 男女床上黄色一级片免费看| 国产成人精品久久二区二区91| 日本wwww免费看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产人伦9x9x在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 成人免费观看视频高清| 中文字幕人妻丝袜制服| 最黄视频免费看| 国产在线精品亚洲第一网站| 在线观看免费高清a一片| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产一区二区三区视频了| 国产不卡av网站在线观看| 老司机影院毛片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 操美女的视频在线观看| 搡老乐熟女国产| 国产精品98久久久久久宅男小说| 少妇粗大呻吟视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲九九香蕉| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费在线观看日本一区| 亚洲成人免费电影在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产一区二区三区视频了| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美在线一区亚洲| 久久青草综合色| 国产在线一区二区三区精| 高清视频免费观看一区二区| 人成视频在线观看免费观看| e午夜精品久久久久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 不卡一级毛片| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 99精品久久久久人妻精品| av福利片在线| 两个人看的免费小视频| 少妇 在线观看| 丝袜喷水一区| 亚洲九九香蕉| 成人国产av品久久久| 另类精品久久| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜福利在线观看吧| 久久久精品94久久精品| 热99国产精品久久久久久7| 涩涩av久久男人的天堂| 女人久久www免费人成看片| 久9热在线精品视频| 欧美中文综合在线视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩免费av在线播放| 五月开心婷婷网| 日本一区二区免费在线视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美 日韩 精品 国产| kizo精华| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 国产欧美日韩一区二区精品| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 黄色成人免费大全| 国产不卡av网站在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲 国产 在线| 黄色视频,在线免费观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 一本久久精品| 男女午夜视频在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 露出奶头的视频| 久久久久国内视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 黑人猛操日本美女一级片| 国产精品98久久久久久宅男小说| kizo精华| 香蕉国产在线看| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一级毛片电影观看| 欧美成人午夜精品| 在线天堂中文资源库| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲成人手机| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产高清视频在线播放一区| 另类亚洲欧美激情| 高清毛片免费观看视频网站 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产国语露脸激情在线看| 丝袜美足系列| 亚洲成人免费av在线播放| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久青草综合色| 色在线成人网| 老鸭窝网址在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 18禁美女被吸乳视频| 搡老乐熟女国产| 国产深夜福利视频在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美一级毛片孕妇| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产精品九九99| 欧美成人免费av一区二区三区 | 人妻久久中文字幕网| 在线观看免费视频日本深夜| 大香蕉久久网| 欧美成人免费av一区二区三区 | 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产野战对白在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 黄片播放在线免费| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲人成电影观看| 精品高清国产在线一区| 久久狼人影院| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩免费高清中文字幕av| 一进一出好大好爽视频| 日本一区二区免费在线视频| 久久久久网色| 日本黄色日本黄色录像| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 美女午夜性视频免费| 大香蕉久久成人网| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| 久久久久国内视频| 色综合婷婷激情| 国产av一区二区精品久久| 成人黄色视频免费在线看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久欧美国产精品| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲午夜理论影院| 欧美午夜高清在线| 最黄视频免费看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久亚洲精品不卡| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 曰老女人黄片| 五月开心婷婷网| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产亚洲一区二区精品| 国产成人精品在线电影| 免费av中文字幕在线| av线在线观看网站| 十八禁人妻一区二区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 午夜福利一区二区在线看| 免费在线观看黄色视频的| 欧美精品啪啪一区二区三区| 91精品三级在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲国产成人一精品久久久| 男女之事视频高清在线观看| 久久影院123| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品国产高清国产av | 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲人成电影免费在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 高清av免费在线| 嫩草影视91久久| 夜夜爽天天搞| 91九色精品人成在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 免费在线观看黄色视频的| 午夜激情av网站| 成在线人永久免费视频| 久久热在线av| 免费少妇av软件| 日韩有码中文字幕| av有码第一页| 男女之事视频高清在线观看| 人人澡人人妻人| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 麻豆成人av在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 热99久久久久精品小说推荐| 国产精品亚洲av一区麻豆| 老熟妇仑乱视频hdxx| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产精品九九99| 黑人欧美特级aaaaaa片| avwww免费| 欧美黄色淫秽网站| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 夜夜爽天天搞| 高清欧美精品videossex| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产亚洲欧美精品永久| 成人国产一区最新在线观看| 国产色视频综合| 在线观看66精品国产| 久久中文字幕人妻熟女| 99国产精品99久久久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 多毛熟女@视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久这里只有精品19| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品自拍成人| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲一区中文字幕在线| 国产男女超爽视频在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 一进一出好大好爽视频| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩欧美国产一区二区入口| tocl精华| 一边摸一边做爽爽视频免费| 夜夜爽天天搞| 老司机亚洲免费影院| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美老熟妇乱子伦牲交| www.熟女人妻精品国产| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日韩大片免费观看网站| 午夜免费成人在线视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久性视频一级片| 午夜两性在线视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 精品福利观看| 亚洲黑人精品在线| 五月天丁香电影| 天堂中文最新版在线下载| 色播在线永久视频| 十八禁网站免费在线| 久久久久久久久免费视频了| 宅男免费午夜| 高清在线国产一区| 久久久精品免费免费高清| www.精华液| 人妻 亚洲 视频| 成人18禁在线播放| h视频一区二区三区| 欧美成人免费av一区二区三区 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美日本中文国产一区发布| 99国产精品99久久久久| 老司机影院毛片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久中文字幕一级| 午夜日韩欧美国产| 精品久久久久久久毛片微露脸| 精品卡一卡二卡四卡免费| videosex国产| 亚洲午夜理论影院| 大陆偷拍与自拍| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲九九香蕉| 不卡av一区二区三区| 大型av网站在线播放| 国产精品国产高清国产av | 免费高清在线观看日韩| 午夜91福利影院| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产老妇伦熟女老妇高清| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久人妻熟女aⅴ| 色老头精品视频在线观看| 久久亚洲真实| 久久国产精品影院| 最新的欧美精品一区二区| 一区二区三区激情视频| 久久午夜亚洲精品久久| 韩国精品一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品 欧美亚洲| 欧美午夜高清在线| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 黑人操中国人逼视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 欧美激情久久久久久爽电影 | a在线观看视频网站|