馬桑提取物促進(jìn)大鼠燒傷創(chuàng)面愈合的作用和機(jī)制*

黃德彬， 胡澤華， 余昭芬， 劉可云

燒傷是最常見(jiàn)的損傷性疾病之一［1］。當(dāng)今對(duì)于Ⅱ°燒傷創(chuàng)面治愈最有價(jià)值的治療方法就是用藥物等方法控制感染和促進(jìn)上皮再生，如最流行的治療燒傷的10%磺胺脒隆軟膏、1%磺胺嘧啶銀霜以及聚維酮碘乳膏等［2］。馬桑提取物(Coriaria sinica Maxim extract，CSME)是馬?？?Coriariaceae)植物的水提取物，其主要成分為馬桑毒素(coriamyrtin)、羥基馬桑毒素(tutin)、馬桑寧(corianin)等［3］。馬桑水提取物有抗驚厥、抗感染、殺蟲(chóng)、清熱解毒和生肌等功效，在我國(guó)民間常作為草藥用于治療精神分裂癥、風(fēng)濕麻木、牛皮癬、燒傷以及經(jīng)久不愈的皮膚潰瘍等［3-4］。而目前對(duì)于馬桑提取物治療燒傷創(chuàng)面愈合效果的研究未見(jiàn)報(bào)道，因此，我們研究了其對(duì)大鼠皮膚Ⅱ°燒傷模型的治療效果和初步機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

材料和方法

1 材料

1.1 材料與試劑 馬桑原生植物，九月采伐兩年生枝條，經(jīng)過(guò)植物學(xué)家鑒別?；前粪奏ゃy軟膏(silver sulfadiazine，SSD;山東健康藥業(yè)有限公司);硫化鈉和白凡士林(white petroleum jelly，WPJ;杭州恒潤(rùn)有限公司);苦味酸、甲醛溶液、鹽酸、乙酸、生理鹽水和乙醇(購(gòu)于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司);鹽酸替來(lái)他明和鹽酸唑拉西泮(山東中亞藥業(yè)有限公司);丙二醛(malondialdehyde，MDA)放射免疫試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所，No.20101020);大鼠超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)ELISA定量試劑盒購(gòu)于上海源碩生物技術(shù)有限公司，Sigma產(chǎn)品;Trizol試劑(100 mL/瓶，Dako);RT-PCR 試劑盒(Roche)。

1.2 儀器 EG1150-H石蠟包埋機(jī)、RM2245切片機(jī)和DM2000顯微鏡(德國(guó)徠卡);Pharmacia Gene Quant II型RNA/DNA檢測(cè)儀(Pharmacia Gene Quant Pro);S-450D超聲波細(xì)胞破碎儀(美國(guó)PhD國(guó)際科技有限公司);TP600型PCR基因擴(kuò)增儀(TaKaRa);3K30型低溫高速離心機(jī)(Sigma);F200酶標(biāo)儀(瑞士帝肯);DHV-1201-X恒溫箱、精密移液器、一次性吸頭和YLS-5Q燙傷儀(天津科技發(fā)展有限公司);乙二胺四乙酸管 (BD Vacutaine，Becton Dickinson Inc.)。

1.3 cDNA合成引物 Ⅰ型前膠原蛋白cDNA上游引物5'-AGGGACACAGAGGTTTCAGTG-3'，下游引物5'-ACCATTGGCACCTTTAGC-3'，擴(kuò)增片段 420 bp;βactin上游引物5'-CCCATCACCATCTTCCAGGAGCG-3'，下游引物 5'-GGCAGGGATGATGTTCTGGAGAGCC-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度 410 bp［5］。

2 方法

2.1 馬桑提取物軟膏的制備 取1 kg馬桑枝條粉碎成粉末，作為提取樣品，將樣品用1 000 mL蒸餾水浸泡30 min后，煎煮90 min分別提取3次，將3次提取物合并、過(guò)濾和濃縮至100%的馬桑提取浸膏，1 mL浸膏相當(dāng)于10 g生藥。隨后，按CSME與普通醫(yī)用白凡士林10∶2比例混合成外用燒傷軟膏。

2.2 藥物敷料的制備 藥物敷料包括馬桑提取物軟膏敷料(CSME-dressing)、磺胺嘧啶銀軟膏敷料(SSD-dressing)和白凡士林軟膏敷料(WPJ-dressing)。CSME-dressing和 WPJ-dressing就是將 CSME和WPJ分別用平板電爐加熱滅菌后，均勻涂抹于1塊無(wú)菌敷料上而制得。同樣地，不用加熱直接制得SSD-dressing。所有藥物敷料分別含相應(yīng)藥物大約0.5 g/cm2。

2.3 燒傷動(dòng)物模型制造與治療 SD雄性大鼠(6周，180～220 g)來(lái)源于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(中國(guó)重慶，No.41110252)，在溫度(24 ±3)℃和濕度(50±5)%狀態(tài)下，自由適應(yīng)12 h陽(yáng)光與陰影的晝夜節(jié)律1周。隨機(jī)將動(dòng)物分成對(duì)照組(NS)、白凡士林組(WPL)、磺胺嘧啶銀組(SSD)、馬桑提取物組(CSME)，每組10只。常規(guī)配方飼料喂養(yǎng)和自來(lái)水飲水。所有動(dòng)物都保持在晝夜周期(12 h光照，12 h黑暗)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室條件下的動(dòng)物房?jī)?nèi)，溫度為(24±3)℃。自由攝取食物和水。動(dòng)物治療嚴(yán)格按照國(guó)家衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南進(jìn)行。在學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)的監(jiān)督下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將大鼠腹腔注射2 mL/kg替來(lái)他明－唑拉西泮麻醉(Zoletil?，替來(lái)他明125 mg/5 mL+唑拉西泮125 mg/5 mL)。檢查動(dòng)物狀況后，用電剪剪去背部毛約4 cm ×4 cm范圍，而后將剪毛區(qū)域用8%硫化鈉脫毛，且用75%乙醇消毒。用恒溫恒壓燙傷儀加500 g壓力燙傷脫毛區(qū)15 s(2.5 cm × 2.5 cm，90℃)。24 h后取創(chuàng)面組織切片，經(jīng)HE染色證實(shí)為深Ⅱ度燙傷，燙傷動(dòng)物模型制成備用。之后，各組動(dòng)物創(chuàng)面分別用NS敷料、WPJ敷料、SSD敷料和CSME敷料覆蓋治療，每天更換藥物敷料2次?？偣仓委?1 d。

2.4 觀察內(nèi)容 在第1 d、3 d、7 d 、14 d、21 d 觀察各組動(dòng)物臨床癥狀和創(chuàng)面狀況，如創(chuàng)面色澤、大小、滲出物、結(jié)痂及被毛等。此外，測(cè)量創(chuàng)面上皮化率(epithelization rate，ER)，包括原始創(chuàng)面面積(primordial area，PA)和未愈創(chuàng)面面積(no healing area，NHA)。計(jì)算方法是:ER(%)=(PA-NHA)/PA×100%。

2.5 組織學(xué)研究 分別于燒傷后第1 d、3 d、7 d、14 d和21 d取出創(chuàng)緣3、6、9和12時(shí)點(diǎn)的創(chuàng)基組織(頭尾方向分別為12和6時(shí)點(diǎn)，包括部分正常組織)，一部分放入液氮中用于細(xì)胞因子檢測(cè)，另一部分用10%甲醛溶液固定，薄片組織石蠟包埋，切片，HE染色，鏡下觀察，評(píng)價(jià)組織改變情況。

2.6 MDA含量與SOD活性測(cè)定 先用勻漿機(jī)將創(chuàng)基組織勻漿，取上清液樣品，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)MDA和SOD活性，在波長(zhǎng)586 nm檢測(cè)吸光度(A)。

2.7 創(chuàng)面組織表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor，bFGF)蛋白水平的檢測(cè) 分別稱(chēng)取各組創(chuàng)基組織置于玻璃勻漿器內(nèi)，按每1 mg組織加1 mL蛋白提取液稀釋后，用勻漿機(jī)勻漿200次，將勻漿液置于40℃恒溫箱30 min后，吸取勻漿液置于離心管中12 000 r/min離心20 min。取上清液分析細(xì)胞因子的表達(dá)，如EGF和bFGF，相應(yīng)地按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行分析。在波長(zhǎng)450 nm檢測(cè)吸光度(A)，檢測(cè)上限分別是80 ng/L和100 ng/L。

2.8 創(chuàng)面Ⅰ型或Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的檢測(cè) 用PCR級(jí)器械留取創(chuàng)基組織樣品，迅速保存在－80℃冰箱內(nèi)備用。分別將樣品用DNA/RNA測(cè)定儀測(cè)定波長(zhǎng)為A260/A280吸光度值(在1.8～2.0范圍內(nèi))與RNA濃度。用RT-PCR一步法完成mRNA擴(kuò)增和檢測(cè)。將蛋白cDNA引物上、下游設(shè)計(jì)跨2個(gè)外顯子。為保證mRNA擴(kuò)增的穩(wěn)定性和特異性，以500 bp擴(kuò)增片段作為推薦長(zhǎng)度。設(shè)置陰性對(duì)照和內(nèi)對(duì)照組，以便排除RNA非特異性擴(kuò)增和降解所導(dǎo)致的誤差。為確定各待測(cè)模板樣品指數(shù)增長(zhǎng)期的起始拷貝數(shù)，設(shè)置3個(gè)數(shù)量級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定mRNA的表達(dá)值。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 11.0軟件。數(shù)據(jù)用均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，均數(shù)比較采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 CSME對(duì)燒傷大鼠創(chuàng)面愈合的影響

燒傷后第1 d和3 d，各組創(chuàng)面臨床癥狀和ER相當(dāng)，無(wú)顯著差異(P＞0.05);在第3 d，CSME組中少數(shù)動(dòng)物創(chuàng)面中央顏色暗紅。第7 d，各組創(chuàng)面ER相當(dāng)，無(wú)顯著差異(P＞0.05)，NS和WPJ組創(chuàng)面濕潤(rùn)呈暗紅色結(jié)痂，少數(shù)動(dòng)物創(chuàng)面有微量滲出液。但CSME和SSD組創(chuàng)面干燥呈褐色結(jié)痂，無(wú)滲出液，在CSME組中少數(shù)動(dòng)物創(chuàng)緣有脫痂之趨勢(shì)。

第14 d，各組創(chuàng)面干燥呈褐色或黑色結(jié)痂，創(chuàng)面開(kāi)始縮小;SSD組創(chuàng)緣開(kāi)始脫痂，創(chuàng)緣新生上皮生長(zhǎng)活躍，有少量新生被毛生長(zhǎng)，創(chuàng)面中央滲液少，其ER明顯高于NS和WPJ組(P＜0.05);CSME組創(chuàng)緣明顯有脫痂，新生上皮生長(zhǎng)高度活躍，有大量新生被毛生長(zhǎng)，創(chuàng)面中央滲液少，其ER明顯高于SSD組(P＜0.05);NS和 WPJ組無(wú)脫痂之勢(shì)，ER相當(dāng) (P＞0.05)，創(chuàng)面中央滲液明顯多于SSD和CSME組。

第21 d，NS和WPJ組創(chuàng)面中央尚有少許未脫落的黑色結(jié)痂［(0.42 ±0.08)cm2和 (0.47 ±0.06)cm2］，ER 為83.14% ±2.33%和 81.09% ±3.12%，創(chuàng)面周?chē)蟛糠直恍律掀じ采w，有大量被毛生長(zhǎng);SSD與CSME組創(chuàng)面完全愈合，ER為98.67% 和100%。其中，SSD組創(chuàng)面中央新生被毛稀疏而細(xì)小，而CSME組創(chuàng)面中央被毛密集，大部分被毛接近正常，見(jiàn)圖1。

Figure 1.Effects of CSME on ER of burn wounds in rats.Mean±SD.n=10.*P ＜0.05 vs SSD group.△P ＜0.05 vs NS or WPJ group.圖1 CSME對(duì)大鼠燒傷創(chuàng)面ER的影響

2 CSME對(duì)燒傷創(chuàng)面組織學(xué)的影響

第1 d和3 d，各組病理學(xué)觀察相當(dāng)。傷后第7 d，各組創(chuàng)面組織學(xué)檢查結(jié)果稍有不同。在NS和WPJ組中，病理學(xué)觀察相當(dāng);其真皮層充血、水腫明顯，纖維中有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);膠原纖維顯著腫脹、融合，原纖維結(jié)構(gòu)消失;表皮細(xì)胞缺如，組織生長(zhǎng)不明顯;大量組織細(xì)胞變性壞死，絕大多數(shù)細(xì)胞漿濃縮，細(xì)胞核固縮。在SSD組中，可見(jiàn)真皮層充血、水腫較輕，纖維中有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);膠原纖維腫脹，離散與融合交替，原纖維結(jié)構(gòu)少量殘存;表皮細(xì)胞缺如，組織生長(zhǎng)不活躍，中等量的組織細(xì)胞變性壞死，半數(shù)細(xì)胞漿濃縮，細(xì)胞核固縮。在CSME組中，可見(jiàn)真皮層充血、水腫輕微，纖維中有少數(shù)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);所有膠原纖維輕微腫脹，無(wú)融合，原纖維結(jié)構(gòu)殘存較多;有少數(shù)表皮細(xì)胞，組織生長(zhǎng)較活躍，有少數(shù)組織細(xì)胞變性壞死，少數(shù)細(xì)胞漿濃縮，細(xì)胞核固縮。

第14 d，各組創(chuàng)面組織學(xué)檢查結(jié)果明顯不同。NS組與WPJ組大致相當(dāng):外圍有小范圍壞死組織溶脫，少數(shù)肉芽組織裸露;可見(jiàn)真皮層輕度充血、水腫，纖維中有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);少數(shù)膠原纖維輕度腫脹、融合，原纖維結(jié)構(gòu)完整;創(chuàng)面外圍表皮細(xì)胞有限覆蓋，上皮組織生長(zhǎng)活躍，少數(shù)組織細(xì)胞變性壞死，無(wú)細(xì)胞漿濃縮和細(xì)胞核固縮。在SSD組中，創(chuàng)面外圍有部分壞死組織溶脫以及肉芽組織裸露;真皮層無(wú)充血、水腫，有少量白細(xì)胞浸潤(rùn);膠原纖維無(wú)融合，原纖維結(jié)構(gòu)完整;外圍表皮細(xì)胞廣泛覆蓋，上皮組織生長(zhǎng)活躍，有少數(shù)組織細(xì)胞變性壞死，無(wú)細(xì)胞漿濃縮與細(xì)胞核固縮。在CSME組中，創(chuàng)面外圍普遍壞死組織溶脫，肉芽組織裸露;真皮層有個(gè)別白細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)充血、水腫;膠原纖維結(jié)構(gòu)完整，無(wú)腫脹，無(wú)融合;外圍表皮細(xì)胞廣泛覆蓋，上皮細(xì)胞生長(zhǎng)極其活躍，無(wú)細(xì)胞變性壞死、細(xì)胞漿濃縮和細(xì)胞核固縮。

第21 d，各組創(chuàng)面組織學(xué)檢查結(jié)果有顯著差異。在NS和WPJ組中，創(chuàng)面近愈合，中央?yún)^(qū)域上皮分化差，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，組織結(jié)構(gòu)不清淅;在SSD和CSME組中，所有創(chuàng)面完全愈合;其中，SSD組創(chuàng)面中央?yún)^(qū)域被分化良好的單層上皮細(xì)胞覆蓋;大量膠原纖維增生，不規(guī)則排列，組織結(jié)構(gòu)模糊，皮脂腺和毛囊增生活躍;而CSME組鏡下可見(jiàn)全部被多層上皮細(xì)胞覆蓋，新生膠原纖維充分分化，排列整齊，組織結(jié)構(gòu)明朗，皮脂腺和毛囊增生極其活躍等，見(jiàn)圖2。

3 CSME對(duì)燒傷大鼠創(chuàng)面MDA含量和SOD活性的影響

各組大鼠在燒傷后，從第1 d到21 d，MAD含量逐漸降低，NS、WPJ和SSD組相當(dāng)，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在第3 d、7 d、14 d 和21 d，CSME 組的 MDA含量均低于其它各組(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

從第1 d到21 d，各組大鼠在燒傷后，SOD活性隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)，NS、WPJ和SSD組相當(dāng)，無(wú)顯著差異(P ＞0.05)。在第3 d、7 d、14 d和21 d，CSME 組的SOD活性均強(qiáng)于其它各組(P＜0.01)，見(jiàn)表2。

Figure 2.Effects of CSME on pathological changes of burn wounds in rats on the 21st day(HE staining).圖2 CSME對(duì)大鼠燒傷第21 d創(chuàng)面病理變化的影響

表1 CSME對(duì)燒傷大鼠創(chuàng)面MAD含量的影響Table 1.Effects of CSME on MDA content of burn wounds in rats(mean±SD.n=10)

表2 CSME燒傷大鼠創(chuàng)面SOD活性的影響Table 2.Effects of CSME on SOD activity of burn wounds in rats(mean±SD.n=10)

4 CSME對(duì)燒傷大鼠創(chuàng)面EGF和bFGF蛋白水平的影響

燒傷后從第1 d到21 d，各組大鼠EGF蛋白水平為先升高后降低，在第3 d和7 d達(dá)最高峰，遠(yuǎn)高于其它時(shí)點(diǎn)(P ＜0.05 或 P ＜0.01)。其中，NS、WPJ和SSD組的EGF水平相當(dāng)，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。但CSME組在第3 d和7 d的EGF蛋白水平顯著高于其它各組，在第14 d和21 d迅速下降，低于其它組(P ＜0.05 or P ＜0.01)，見(jiàn)圖 3。

Figure 3.Effects of CSME on protein level of EGF of burn wounds in rats.Mean ± SD.n=10.*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs other groups.圖3 CSME對(duì)大鼠燒傷創(chuàng)面EGF蛋白水平的影響

第3 d，CSME組的bFGF蛋白表達(dá)顯著高于其它各組，在第7 d、14 d和21 d迅速下降，顯著低于其它組(P ＜0.05或 P ＜0.01)，見(jiàn)圖4。

Figure 4.Effects of CSME on protein level of bFGF of burn wounds in rats.Mean ±SD.n=10.*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs other groups.圖4 CSME對(duì)大鼠燒傷創(chuàng)面bFGF蛋白水平的影響

5 CSME對(duì)大鼠燒傷創(chuàng)面Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的影響

第14 d，大鼠正常組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的總含量均顯著低于其它組燒傷創(chuàng)面組織(P＜0.05)。對(duì)于Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)，SSD組顯著高于其它各組，CSME組顯著高于正常組織而低于NS和WPJ組，但Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)則相反。SSD組Ⅰ型與Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的比值顯著高于其它各組和正常組織，CSME組顯著低于其它各組和正常組織(P＜0.05)，而正常組織、NS組和WPJ組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。這表明CSME在抑制燒傷創(chuàng)面Ⅰ型膠原和增強(qiáng)Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)方面起著重要作用，見(jiàn)圖5、表3。

Figure 5.The mRNA expression of typeⅠ andⅢ collagen in normal and scar tissues on the 14th day after burn in rats.圖5 大鼠燒傷后第14 d正常和疤痕組織Ⅰ和Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)

表3 第14 d CSME對(duì)大鼠燒傷創(chuàng)面Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的影響Table 3.Effects of CSME on mRNA expression of typeⅠandⅢcollagen in burn wounds on the 14th day after burn in rats(mean±SD.n=10)

討 論

目前控制燒傷創(chuàng)面感染、促進(jìn)創(chuàng)面愈合和抑制病理性瘢痕增生是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的一大難題［6-8］。臨床常用的磺胺嘧啶銀只能用以控制創(chuàng)面感染，不能促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合和抑制創(chuàng)面病理性疤痕增生［9-10］。在中國(guó)民間，馬桑水提取物被用作治療經(jīng)久不愈的皮膚潰瘍和燒傷創(chuàng)面愈合［11］。有報(bào)道，其對(duì)燒傷創(chuàng)面常見(jiàn)感染耐藥菌有顯著抑制作用［12］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CSME有促進(jìn)大鼠燒傷創(chuàng)面愈合作用。燒傷后第14 d，CSME組新生上皮生長(zhǎng)高度活躍，有大量新生被毛生長(zhǎng)，燒傷后第21 d，CSME組創(chuàng)面中央被毛密集，大部分被毛接近正常，創(chuàng)面上皮化速率明顯高于SSD組，差異顯著(P＜0.05)。

1 CSME影響SOD活性和MDA含量，維護(hù)燒傷創(chuàng)面組織細(xì)胞的代謝與功能，阻止細(xì)胞凋亡

燒傷后，機(jī)體通過(guò)非酶系統(tǒng)與酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，產(chǎn)生的氧自由基可破壞生物膜的多不飽和脂肪酸，誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)［13-14］。這種脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)可將活性氧轉(zhuǎn)化為非自由基性的脂質(zhì)產(chǎn)物，通過(guò)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)放大活性氧作用，產(chǎn)生MDA、羥基、酮基、羰基、氫過(guò)氧基等多種脂質(zhì)過(guò)氧化物［15］。其中，MDA能引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合而導(dǎo)致細(xì)胞毒性作用，伴隨細(xì)胞代謝紊亂與功能障礙，甚至凋亡［16］。因此，MDA含量可反映燒傷創(chuàng)面組織脂質(zhì)過(guò)氧化的程度而間接體現(xiàn)細(xì)胞損傷的程度。SOD能通過(guò)清除氧自由基而阻止其誘發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。SOD是機(jī)體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化酶之一，其活性強(qiáng)弱可直接反映機(jī)體清除氧自由基的能力［17］。本研究發(fā)現(xiàn)，在第3 d、7 d、14 d和21 d，CSME 組的 MDA 含量低于其它各組，但SOD活性高于其它各組(P＜0.05，P＜0.01)。因此，CSME促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合作用與增強(qiáng)SOD活性和抑制MDA的生成、以維護(hù)燒傷創(chuàng)面組織細(xì)胞的代謝與功能有關(guān)。

2 CSME調(diào)控?zé)齻麆?chuàng)面EGF和bFGF蛋白水平，縮短創(chuàng)面修復(fù)進(jìn)程和阻止創(chuàng)面疤痕形成

EGF是人體皮膚內(nèi)與生俱來(lái)的物質(zhì)，其通過(guò)多種細(xì)胞因子的磷酸化，將生物信息轉(zhuǎn)導(dǎo)至胞內(nèi)［18］。EGF可增強(qiáng)糖的酵解，通過(guò)激活RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)與DNA的合成，而促進(jìn)表皮細(xì)胞的增殖分化［15］。有報(bào)道，EGF還可增強(qiáng)細(xì)胞凋亡抑制基因bcl-2的功能，防止細(xì)胞內(nèi)DNA的斷裂，避免細(xì)胞變異與凋亡［12］。這說(shuō)明，燒傷創(chuàng)面組織的EGF含量，能直接體現(xiàn)燒傷創(chuàng)面修復(fù)的活躍程度。單拷貝基因bFGF編碼155個(gè)氨基酸，位于第5對(duì)染色體上，是促有絲分裂的陽(yáng)離子多肽［16］。bFGF與受體結(jié)合后，一方面，激活腺苷酸環(huán)化酶和鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，最終激活蛋白激酶C，同時(shí)增加Ca2+內(nèi)流而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng);另一方面，在細(xì)胞核內(nèi)激活RNA聚合酶Ⅰ，增加核蛋白體基因轉(zhuǎn)錄，增強(qiáng)DNA合成，繼而促進(jìn)細(xì)胞由G0期向G1期，最終轉(zhuǎn)向S期，增強(qiáng)細(xì)胞的有絲分裂［17］，促進(jìn)組織再生修復(fù)、加快創(chuàng)傷愈合，還參與神經(jīng)再生以及充當(dāng)血管生長(zhǎng)因子等［13］。因此，bFGF在促進(jìn)燒傷創(chuàng)面修復(fù)的同時(shí)，對(duì)于創(chuàng)面疤痕形成也起著重要作用［18］。本研究顯示，燒傷后從第 1 d到 21 d，CSME早期EGF和bFGF表達(dá)顯著高于其它各組，后期迅速下降，低于其它組(P＜0.05或 P＜0.01)。因此，CSME促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合作用，與早期增強(qiáng)EGF和bFGF水平有關(guān)，而創(chuàng)面愈合后，在瘢痕形成期則阻止其含量增加，減少瘢痕形成。

3 CSME調(diào)控?zé)齻麆?chuàng)面Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)，在促進(jìn)創(chuàng)面愈合的同時(shí)，抑制病理性瘢痕增生

存在于皮膚中的膠原纖維主要為Ⅰ型和Ⅲ型。其中，Ⅰ型膠原纖維粗大，位于真皮淺層，是燒傷創(chuàng)面瘢痕組織纖維化的物質(zhì)基礎(chǔ)。有研究發(fā)現(xiàn)，在質(zhì)地堅(jiān)硬而無(wú)彈性的瘢痕組織中，可見(jiàn)大量Ⅰ型膠原纖維沉著［11］。Ⅲ型膠原纖維細(xì)小，主要位于真皮的深層［16］。有報(bào)道，在胎兒無(wú)瘢痕愈合的多種影響因素中，Ⅰ型膠原纖維含量很低，Ⅲ型膠原纖維含量很高［15］。因此，Ⅰ型和Ⅲ型膠原纖維含量比與燒傷創(chuàng)面無(wú)瘢痕愈合呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)［17］。燒傷愈合過(guò)程中，一般在第14 d膠原纖維表達(dá)最為活躍，與疤痕形成密切相關(guān)［12］。本研究發(fā)現(xiàn)，在第14 d，創(chuàng)面組織學(xué)研究證實(shí)，與SSD組相比，CSME組膠原纖維相對(duì)細(xì)小，分化良好，排列整齊;大鼠正常組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的總含量均顯著低于其它組燒傷創(chuàng)面組織(P＜0.05);在Ⅰ型與Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)的比值方面，SSD組顯著高于其它各組和正常組織，CSME組顯著低于其它各組和正常組織(P＜0.05)，而正常組織、NS組和WPJ組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。這表明CSME在抑制燒傷創(chuàng)面Ⅰ型膠原而增強(qiáng)Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)方面起著重要作用，其在促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合的同時(shí)，也通過(guò)調(diào)控Ⅰ型與Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)比值而阻止病理性瘢痕的過(guò)度增生。

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