蜂王漿凍干粉對荷瘤小鼠營養(yǎng)狀況的影響

金鳳妹，邢志光

(上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院，上海 200032)

營養(yǎng)不良和進行性體質量減輕是晚期腫瘤患者的普遍現(xiàn)象。因此，進行有效的營養(yǎng)狀況評價和改善，對預防和治療中晚期惡性腫瘤患者的營養(yǎng)不良具有重要意義［1］。蜂王漿是蜜蜂巢中培育幼蟲的青年工蜂咽頭腺的分泌物，是供給將要變成蜂王的幼蟲的食物。它主要含有雌激素、蛋白質、人體必需的8種氨基酸以及豐富的維生素和礦物元素，對調節(jié)機體生理功能、增強機體抵抗力、抗癌等有重要作用。2011年5～6月，我們觀察了蜂王漿凍干粉對荷瘤小鼠營養(yǎng)狀況的影響?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性 BALB/c-nu/nu小鼠30只，10～12周齡，體質量(30.4±1.9)g，購自上海斯萊克實驗動物有限公司，許可證號:SCXK(滬)2007-0005。人乳腺癌MCF-7(ER+)細胞購自上海中科院生物研究所細胞庫。蜂王漿凍干粉購自上海森蜂園蜂業(yè)公司。DMEM培養(yǎng)基(高糖型)為美國Gibco公司產品;新生胎牛血清(NBS)購自杭州四季青生物工程公司;胰蛋白酶購白Gibco公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 將人乳腺癌MCF-7細胞接種于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、青霉素100 U/mL和鏈霉素100 U/mL)，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱，相對飽和濕度的條件下培養(yǎng)，細胞呈貼壁生長，每3～5 d傳代1次。當細胞長滿時，用0.25%胰蛋白酶消化，收集細胞，1000 r/min離心5 min，棄上清，取離心管底部細胞，傳代。取對數(shù)生長期MCF-7細胞用于實驗。

1.2.2 動物分組及MCF-7細胞小鼠皮下移植瘤模型建立 將BALB/c-nu/nu小鼠適應性喂養(yǎng)1周，隨機分成荷瘤對照組、空白對照組及蜂王漿組各10只，每5只飼養(yǎng)于一籠，飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境，恒溫22～25℃，濕度50% ～65%，飲用水、飼料及實驗用品均經滅菌消毒處理，實驗操作遵守無菌原則。取人乳腺癌MCF-7細胞，用0.25%胰酶常規(guī)消化，用含血清的培養(yǎng)基終止消化，用彎頭吸管吹打成細胞懸液，1000 r/min離心5 min，PBS稀釋，制成細胞懸液，細胞密度為2×107/mL。分別向2組小鼠右側肩胛部注射0.2 mL，注射后6～8 d可見到小鼠陸續(xù)長出明顯結節(jié)，并逐漸增大，可認定為成瘤［2］。

1.2.3 實驗干預方案 干預前基礎飼料喂養(yǎng)。飼料由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，營養(yǎng)保證值:粗蛋白質 20.0%、脂肪4.5%、粗纖維 5.0%和粗灰分8.0%。3組小鼠自由進食。分別從蜂王漿組和荷瘤對照組中挑選最先出現(xiàn)瘤體且瘤體組織較大的6只小鼠，分飼2籠，以這2籠和1籠空白對照組的小鼠為實驗對象，繼續(xù)實驗。從成瘤開始，蜂王漿組上午0.4 mL生理鹽水灌胃，下午將0.25 g蜂王漿凍干粉(含能量 1.08 kcal、蛋白質 0.16 g、脂肪0.04 g、碳水化合物 0.02 g)溶于 0.4 mL 生理鹽水灌胃。荷瘤對照組和空白對照組每次灌胃0.4 mL生理鹽水，2次/d。3組分別于每天 9:00、15:00灌胃，連續(xù)灌胃20 d。

1.2.4 觀察指標 每日灌胃前稱小鼠質量及攝食量，并觀察小鼠精神、飲水、活動、糞、尿等情況，每2 d游標卡尺測量腫瘤結節(jié)的最大長度(a)和寬度(b)，按公式:v=(a×b2)×0.52計算腫瘤體積(cm3)。灌胃20 d后，暴露小鼠胸腔，心臟取血。采用全自動生化分析儀(Modular DP)，酶比色法分別測定TC、TG，溴甲酚綠法和雙縮脲法測定白蛋白(Alb)和總蛋白(TP)，免疫透射比濁方法測定前白蛋白(PA);采用迪瑞B(yǎng)CG-3000B全自動血球計數(shù)儀測定白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、淋巴細胞(LY)和血紅蛋白(Hb)。

1.2.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，結果比較采用單因素方差分析或t檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組總攝食量、總能量及體質量比較 蜂王漿組、荷瘤對照組小鼠活動逐漸遲緩，飲水逐漸減少，毛發(fā)干枯，光澤度差。3組總攝食量、總能量及體質量比較見表1。

表1 3組總攝食量、總能量及體質量比較

2.2 各組血生化檢查結果比較 見表2。

2.3 成瘤組瘤體體積變化 接種MCF-7細胞后7～9 d就長出了結節(jié)，經剝離取結節(jié)組織，送病理檢查，確定為腫瘤組織。在小鼠成瘤后的第7天，兩組瘤體平均體積都達到了最大，但兩組比較差異無統(tǒng)計學意義;成瘤第15天蜂王漿組小鼠瘤體平均體積稍大于荷瘤對照組，但亦無統(tǒng)計學差異。見圖1。

表2 3組血生化檢查結果比較()

表2 3組血生化檢查結果比較()

注:與空白對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與荷瘤對照組比較，#P ＜0.05，##P ＜0.01

蜂王漿組 6 3.4 ±0.7 48.7 ±15.0 8.4 ±0.7# 119.7 ±13.9# 0.9 ±0.4 1.0 ±0.6 72.0 ±10.8 32.8 ±7.6 96.9 ±12.4荷瘤對照組 6 3.2 ±0.7 35.7 ± 5.3* 7.4 ±0.6＊＊ 102.8 ±11.5＊＊0.8 ±0.3 1.3 ±0.9 69.1 ± 9.1 29.9 ±7.0 77.5 ±10.7＊＊空白對照組 6 4.2 ±0.8 48.4 ± 9.8 8.8 ±0.5 128.5 ± 7.3 0.8 ±0.91.2 ±0.9 77.5 ±10.7 31.7 ±8.5 104.7 ± 6.7

圖1 兩組荷瘤小鼠瘤體體積變化

3 討論

晚期惡性腫瘤患者，由于原發(fā)和轉移的腫瘤病灶迅速生長、機體營養(yǎng)不良、代謝紊亂，易出現(xiàn)貧血、厭食、極度消瘦、乏力等惡病質表現(xiàn)，進而引起機體抵抗力下降、系統(tǒng)感染、多器官功能衰竭等并發(fā)癥，最終導致患者死亡［3］。營養(yǎng)狀況是提示疾病好壞的重要指標之一，故營養(yǎng)支持治療在腫瘤的全面治療過程中占有很重要的地位。

蜂王漿含有天然雌激素及多種營養(yǎng)成分，對人體具有抗疲勞、抗菌消炎、抗腫瘤、降血壓、促生長等方面的營養(yǎng)保健作用。雌激素在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展過程中起著非常重要的作用［4］，蜂王漿中含有3種人類生殖激素，分別是雌二醇、睪酮和孕酮。據測定，每克鮮蜂王漿中含雌二醇 0.4167 μg、睪酮0.1082 μg、孕酮 0.1167 μg。研究證實，蜂王漿中所含的這些雌激素比例合適、數(shù)量極微，無任何不良影響。

荷瘤小鼠體質量和血清生化指標的改變可認為小鼠存在營養(yǎng)不良和代謝紊亂。本研究中，成瘤后荷瘤小鼠動物體質量顯著減輕，后期(成瘤第15天)體質量顯著低于前期，且其總攝食量和總熱能攝入亦低于空白對照組，說明本次荷瘤模型造模成功。而荷瘤小鼠的RBC、Hb及PA顯著低于空白對照組，TP、Alb低于空白對照組，TG高于空白對照組，進一步說明本次荷瘤小鼠存在營養(yǎng)不良和代謝紊亂。

本研究中，兩組荷瘤小鼠在長出瘤體后活動逐漸遲緩，攝食量、飲水逐漸減少，毛發(fā)干枯，光澤度差，與國內的報道相一致［5］。兩組荷瘤小鼠實驗期間的總攝食量和總能量遠低于空白對照組，說明荷瘤小鼠存在食欲低下的情況，厭食是多數(shù)進展期腫瘤患者的共性表現(xiàn)［6］。蜂王漿組沒有提高荷瘤小鼠的食欲，可能因為荷瘤動物腦組織中的神經傳遞物—血清素(5-羥色胺)代謝異常、癌性疼痛、恐懼等造成荷瘤狀態(tài)下的神經性厭食。營養(yǎng)不良的癌癥患者攝食減少的程度與營養(yǎng)不良的程度不符，甚至肌肉和脂肪丟失出現(xiàn)在進食下降之前［7］。蜂王漿組經過連續(xù)蜂王漿凍干粉灌胃15 d后，體質量比前一段時間增加明顯，原因可能是蜂王漿含有大量的維生素、蛋白質、氨基酸、微量元素和酶類等活性物質，有調節(jié)人體各種生理功能和增加營養(yǎng)的作用，同時含有豐富的碳水化合物，對各種營養(yǎng)不良癥有良好的治療作用。蜂王漿組RBC、Hb均顯著高于荷瘤對照組，這可能因為蜂王漿中的鐵和銅等物質是合成血紅蛋白的原料，蜂王漿中的B族維生素復合體促進了這一作用的發(fā)生。有研究報道，鮮王漿對荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)有促進作用，提高免疫力［8，9］;也有研究報道，鮮王漿蜂膠混合物能預防X線輻射造成的WBC數(shù)量減少，促進造血干細胞的分化和增殖，表明鮮王漿蜂膠混合物對造血和免疫系統(tǒng)有保護作用［10］。而本研究中，蜂王漿組WBC比其他兩組略高，LY比荷瘤對照組高，但都沒有明顯差異。惡性腫瘤患者在體質量下降前就已存在游離脂肪酸活動增加的現(xiàn)象，體質量下降的惡性腫瘤患者體內甘油和脂肪酸的轉化升高，空腹血TG濃度升高，脂肪分解加快［11］。研究報道，蜂王漿具有調節(jié)血脂的作用［12］。本次實驗中，蜂王漿組TG高于空白組，而TC較低，可能與本次實驗劑量小、時間短有關。荷瘤對照組TP、Alb低于空白對照組，PA甚至更低。原因是腫瘤引起的蛋白代謝異常，即內臟蛋白的分解增加和合成減少，最后表現(xiàn)為內臟蛋白的丟失。PA在惡性腫瘤中的降低遠比血清中Alb敏感，它因半衰期短和色氨酸含量高一直被認為是評價蛋白質和熱能缺乏的靈敏指標［13］。蜂王漿組的蛋白質含量低于空白對照組，但高于荷瘤組，說明蜂王漿含有的蛋白質能改善荷瘤小鼠的營養(yǎng)不良。蜂王漿荷瘤組小鼠的瘤體體積與荷瘤組比無明顯差異，說明每天服用0.25 g的蜂王漿凍干粉不會使乳腺癌瘤體產生影響。值得注意的是，兩組荷瘤小鼠瘤體分別于第7天平均體積最大，此后逐漸變小，其可能原因是本研究選用的細胞為雌激素受體陽性的MCF-7乳腺癌細胞，BALB/c-nu/nu雄性小鼠為移植性乳腺癌動物模型，腫瘤細胞因缺乏雌激素的持續(xù)刺激而出現(xiàn)周期性凋亡。

目前還沒有充分證據表明，營養(yǎng)治療能夠促進腫瘤的生長，但有證據表明，營養(yǎng)不良能降低宿主免疫力，導致腫瘤快速發(fā)展，甚至惡病質。蜂王漿凍干粉用于動物腫瘤模型中晚期中能改善其營養(yǎng)不良，但用于臨床患者，尚有待進一步研究。

［1］李宇清，江素華，周濤.中晚期腫瘤患者的營養(yǎng)狀況研究［J］.腫瘤防治雜志，2000，7(4):340-342.

［2］劉建中，谷俊朝，俞巍.MCF-7細胞系乳腺癌裸鼠模型病理學特點及生物學性狀的研究［J］.國際外科學雜志，2010，37(3):165-167.

［3］薛鵬，吳晴.腫瘤惡病質發(fā)病機制及治療策略研究進展［J］.腫瘤學雜志，2007，13(5):415-418.

［4］楊潔，韓為東，趙亞力.雌激素與乳腺癌［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2007，15(3):431-433.

［5］周偉，江志偉，姜軍，等.一種癌性惡病質動物模型的建立［J］.中華實驗外科雜志，2004，21(4):490-491.

［6］曹偉新.惡性腫瘤患者的營養(yǎng)不良風險和干預［J］.上海交通大學學報(醫(yī)學版)，2007，27(5):499-502.

［7］陳克能，徐光煒.癌性惡病質［J］.中華普通外科雜志，2001，16(9):556-559.

［8］戴關海，楊鋒，任佩天.皇漿蜂膠膠囊對S180肉瘤小鼠免疫功能的影響［J］.浙江中醫(yī)雜志，2006，41(2):104-105.

［9］周愛萍，余倩，裴曉方，等.蜂王漿對小鼠免疫功能增強作用的研究［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2006，33(1):23-38.

［10］陳玉滿，傅劍云.鮮皇漿蜂膠混合物抗輻射作用的實驗觀察［J］.浙江預防醫(yī)學，2002，14(12):78.

［11］黃鐘琳，張波，吳國豪.鋅-a2-糖蛋白在腫瘤惡病質脂肪代謝中的作用［J］.中華臨床營養(yǎng)雜志，2010，18(6):375-380.

［12］王聯(lián)慶，趙會元.蜂王漿凍干粉銀杏膠囊對105例甘油三酯、膽固醇患者的干預作用［J］.陜西中醫(yī)，2010，31(2):169-170.

［13］吳志浩，魏祥松，湯匯明，等.血清前白蛋白測定在惡性腫瘤中的臨床應用［J］.國外醫(yī)學·臨床生物化學與檢驗學分冊，2005，26(10):759-760.