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    血清抗衰老因子klotho 水平與急性心肌梗死發(fā)生的關系

    2013-08-10 09:37:32劉威康林曹貴方
    中國介入心臟病學雜志 2013年3期
    關鍵詞:一氧化氮心肌梗死冠心病

    劉威 康林 曹貴方

    急性心肌梗死作為冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)的常見類型,病死率較高,存活患者的生活質(zhì)量普遍下降。它的發(fā)生與動脈粥樣硬化有關,常見于中年以后,兒童和青少年發(fā)病率極低,因此,急性心肌梗死與衰老存在一定關聯(lián)。Klotho 是近年發(fā)現(xiàn)的抗衰老因子,klotho 基因缺陷的小鼠可以表現(xiàn)出早衰,如動脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松及癡呆[1],而過度表達klotho 的小鼠壽命可以顯著延長[2]。有研究報道,klotho 基因與冠心病的發(fā)生可能有關[3],其主要通過蛋白表達發(fā)揮抗衰老作用。Klotho 蛋白的表達與年齡和腎疾病有關[4-5],關于klotho 蛋白表達與急性心肌梗死發(fā)生的關聯(lián),目前尚未見報道。因此,我們通過檢測并比較急性心肌梗死患者和正常對照組血清klotho 表達水平,探討兩者之間的關系。

    對象與方法

    1. 研究對象:病例組納入2009 年1 月至2010年10 月在清華大學第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科住院的患者92 例,臨床上符合急性心肌梗死診斷標準:檢測到心肌壞死的生化標志物[肌鈣蛋白T(TnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]升高超過參考值上限(URL)99 百分位值并有動態(tài)變化;同時伴有以下一項心肌缺血的證據(jù):缺血性癥狀、心電圖提示新發(fā)的缺血性改變(新發(fā)的ST段變化或左束支傳導阻滯)、心電圖提示病理性Q 波形成或影像學證據(jù)提示新發(fā)的節(jié)段性室壁運動異?;虼婊钚募G失。對照組為年齡和性別匹配的健康體檢者,臨床無心慌、胸悶、呼吸困難及胸痛等表現(xiàn),且心電圖、心臟彩超等檢查均無缺血性心臟病表現(xiàn)。由于klotho 蛋白表達受到腎疾病的影響,排除有明確腎疾病史或生化檢查提示存在腎功能不全的患者。

    表1 病例組和對照組各種因素的比較

    2. 方法

    (1)臨床資料:調(diào)查所有患者與急性心肌梗死有關的危險因素,包括性別、年齡、吸煙、飲酒、高血壓、高脂血癥、糖尿病及家族史等,完善血常規(guī)、凝血、血糖、血脂、肝腎功能、C-反應蛋白、心電圖、心臟彩超、頸動脈超聲等檢查。

    (2)klotho 測定:所有患者于住院次日(發(fā)病48 h內(nèi))清晨空腹采集靜脈血,采用EDTA 抗凝,離心后提取血清,保留在-80℃冰箱內(nèi)備用。Klotho 試劑盒購自美國Ever systems biology laboratory inc,編號ESBL 2275,檢測波長為450 nm,最小檢測濃度為7.8 pg/ml。按照供應商提供的實驗條件采用ELISA 法檢測血清klotho 的濃度。

    (3)統(tǒng)計學分析:計量資料如果符合正態(tài)分布,則采用 珋x ±s 表示,采用成組t 檢驗,如果不符合正態(tài)分布,則采用中位數(shù)(最小值,最大值)表示,采用mann-whitney 秩和檢驗,對于計數(shù)資料則采用χ2檢驗,以P <0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。為研究klotho與急性心肌梗死的關系,除外高血壓、吸煙等傳統(tǒng)危險因素的干擾,通過多因素Logistic 回歸分析,以中位數(shù)為分界線,高于中位數(shù)視為血清klotho 升高,賦值為1,否則賦值為0,計算高血清klotho 對于急性心肌梗死的OR 值。

    結(jié) 果

    1. 基本情況:病例組92 例中,男性57 例,女性35 例,平均年齡(58.69 ±8.42)歲。對照組114 例,其中男性69 例,女性45 例,平均年齡(59.50 ±8.30)歲,兩組性別、年齡、冠心病家族史及飲酒比例差異無統(tǒng)計學意義(P >0.05)。病例組吸煙、高血壓、高脂血癥、糖尿病、C 反應蛋白水平及頸動脈斑塊的發(fā)生率均高于對照組(P <0.05);血清klotho 水平病例組低于對照組(P <0.001)。見表1。

    2. 以klotho 血清值的中位數(shù)37 pg/ml 作為分界值,大于37 pg/ml 則視為高血清klotho。采用Logistic 回歸分析,吸煙、高血壓、糖尿病、頸動脈斑塊及高血清klotho 進入回歸方程,其中高血清klotho 對于急性心肌梗死OR 值為0.345(95% CI:0.171 ~0.693,P <0.05),有統(tǒng)計學意義(表2)。

    表2 多因素Logistic 回歸分析

    討 論

    動脈粥樣硬化是急性心肌梗死發(fā)病的主要機制。隨著對動脈硬化研究的深入,目前認為動脈粥樣硬化是衰老的一種表現(xiàn)。

    Klotho 基因是根據(jù)傳說中掌握人生命線的希臘女神命名的,于1997 年被發(fā)現(xiàn)。klotho 基因缺陷小鼠不僅壽命縮短,且會提前出現(xiàn)動脈粥樣硬化及骨質(zhì)疏松等衰老表現(xiàn)[1]。同前所述,通過轉(zhuǎn)基因使klotho過度表達則能延長小鼠達20% ~30%的壽命,因此klotho 也是目前確定的哺乳動物抗衰老的因子之一。Klotho 基因編碼一種單通道跨膜蛋白,其膜外部分由膜拋錨蛋白酶ADAM10 和ADAM17 剪切成分泌型klotho 蛋白。國內(nèi)有研究報道,不同年齡健康人中,年齡越大,klotho 表達水平越低[4],提示klotho 與衰老有一定關聯(lián)。除了在慢性腎病的患者血清klotho表達水平下降外[5],其他影響klotho 因子表達水平的因素目前尚不清楚。

    關于klotho 與急性心肌梗死或冠心病發(fā)病關系的研究,近年發(fā)表的文獻提示klotho 基因多態(tài)性可能與冠心病發(fā)病有關,如Arking 等[3]研究了klotho 基因的功能變異(KL-VS)與早發(fā)冠心病的關系,KL-VS等位基因?qū)τ诠谛牟〉南鄬ξkU度為1.90(95%CI:1.21 ~2.98)。此外,Jo 等[6]報道,klotho 基因G395A多態(tài)性與冠狀動脈狹窄相關,而與冠狀動脈鈣化無關。日本的一項研究也報道,klotho 基因G395A 多態(tài)性與冠狀動脈狹窄有關,與冠狀動脈痙攣無關[7]。上述研究均提示klotho 基因與冠心病發(fā)病相關。在本研究中,急性心肌梗死患者血清klotho 值顯著低于對照組,提示兩者可能相關。由于在病例組患者吸煙、高血壓及糖尿病等因素高于對照組,為排除這些因素的干擾,采用多因素回歸分析顯示高血清klotho對于急性心肌梗死的OR 為0.345(95%CI:0.171 ~0.693),提示klotho 表達水平與急性心肌梗死發(fā)病呈負相關,高表達klotho 可能有降低急性心肌梗死發(fā)生的作用。

    目前認為klotho 可能通過保護血管內(nèi)皮來發(fā)揮保護心血管的作用。klotho 基因和蛋白對于血管內(nèi)皮細胞具有抗凋亡和抗老化效應,保護血管內(nèi)皮功能[8]。Klotho 為一種體液因子。血管內(nèi)皮持久暴露于klotho,內(nèi)皮細胞受到特定激活物如乙酰膽堿作用,則釋放出一氧化氮;klotho 表達不足時,主動脈的內(nèi)皮依賴性舒張功能顯著減退,小動脈對乙酰膽堿的反應也下降[9]。有證據(jù)表明,klotho 缺陷的小鼠尿中一氧化氮代謝產(chǎn)物的排出顯著減低,因此klotho 可能具有上調(diào)一氧化氮的作用。Klotho 缺陷可能下調(diào)一氧化氮合酶(eNOS)、減少一氧化氮的生成。

    總之,通過本研究提示血清klotho 表達水平可能與急性心肌梗死的發(fā)生相關,血清klotho 蛋白高表達可能有降低急性心肌梗死發(fā)生的作用。

    [1] Kuro-o M,Matsumura Y,Aizawa H,et al. Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing. Nature,1997,390:45-51.

    [2] Kurosu H,Yamamoto M,Clark JD,et al. Suppression of aging in mice by the hormone klotho. Science,2005,309:1829-1833.

    [3] Arking DE,Becker DM,Yanek LR,et al. Klotho allele status and the risk of early-onset occult coronary artery disease. Am J Hum Genet,2003,72:1154-1161.

    [4] Xiao NM,Zhang YM,Zheng Q,et al. klotho is a serum factor related to human aging. Chin Med J (Engl),2004,117:742-747.

    [5] Kacso IM,Bondor CI,Kacso G. Soluble serum klotho in diabetic nephropathy:relationship to VEGF-A. Clin Biochem,2012,45:1415-1420.

    [6] Jo SH,Kim SG,Choi YJ,et al. KLOTHO gene polymorphism is associated with coronary artery stenosis but not with coronary calcification in a Korean population. Int Heart J,2009,50:23-32.

    [7] Imamura A,Okumura K, Ogawa Y, et al. klotho gene polymorphism may be a genetic risk factor for atherosclerotic coronary artery disease but not for vasospastic angina in Japanese.Clin Chim Acta,2006,371:66-70.

    [8] Wang Y,Sun Z. Current understanding of klotho. Ageing Res Rev,2009,8:43-51.

    [9] Saito Y,Yamagishi T,Nakamura T,et al. Klotho protein protects against endothelial dysfunction. Biochem Biophys Res Commun,1998,248:324-329.

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