國產(chǎn)與進(jìn)口吲達(dá)帕胺片在健康人體的生物等效性分析

潘學(xué)智

吲達(dá)帕胺是一種具有利尿作用和鈣拮抗作用的藥物，是新型的抗高血壓藥物，對血管平滑肌的選擇性比較高[1]，可以降低血管外周阻力；還可以通過抑制腎皮質(zhì)稀釋段對鈉的重吸收[2]，增加尿鈉和尿氯的排出量，因此，增加了尿量，發(fā)揮了抗高血壓作用。吲達(dá)帕胺是一種用量小、副作用少、療效顯著、價(jià)格經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的新型抗高血壓藥物[3]，屬于二氫吲哚類利尿藥，方便長效，對心血管系統(tǒng)有保護(hù)作用，不致引起體位性低血壓、心動(dòng)過速和潮紅，尤其對輕度和中度高血壓療效比較好。對樣品中吲達(dá)帕胺的測定方法已有許多報(bào)道，由于吲達(dá)帕胺在紅細(xì)胞中的分布比較多，因此，測定全血中吲達(dá)帕胺的含量已成為研究藥代動(dòng)力學(xué)的首選方法。本試驗(yàn)以進(jìn)口吲達(dá)帕胺作為參比試劑，國產(chǎn)片作為受試試劑，采用HPLC-MS/MS分析方法測定血漿中吲達(dá)帕胺濃度在健康人體中藥代動(dòng)力學(xué)，為臨床用藥提供合理的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 受試者選擇 6 0 名健康男性受試者，平均年齡（2 5.5±5.8）歲，平均身高（1.7 3±0.0 6）m，平均體重（65.7±7.2）kg，民族均是漢族。所有受試者通過體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查（血常規(guī)、尿常規(guī)、心電圖、肝功能、腎功能），未發(fā)現(xiàn)肝、心、脾、肺、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)和代謝異常以及精神異常等疾病，經(jīng)詢問也沒有既往病史，身體狀況良好。在進(jìn)行試驗(yàn)前的一個(gè)月以及實(shí)驗(yàn)期間沒有服用過其他任何藥物，也沒有吸煙、酗酒等不良嗜好[4]。此次指定的實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)白求恩國際和平醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，且所有受試者均簽署了知情同意書。

1.2 藥品、試劑與儀器的選擇 受試制劑：吲達(dá)帕胺片，批號(hào)：081010，規(guī)格：2.5 mg/片，由北京國藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)；參比制劑：吲達(dá)帕胺片，批號(hào)：687669，規(guī)格：2.5 mg/片，由法國施維雅藥廠生產(chǎn)；吲達(dá)帕胺標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)：100257—200002，含量99%，由濟(jì)南市高華制藥廠提供；瑞格列奈鈣對照品(內(nèi)標(biāo))，批號(hào)：100753—200501，由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純，甲酸、乙酸乙酯為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為市場上銷售的純凈水；空白人血漿由白求恩國際和平醫(yī)院采供血中心提供。儀器 1100 型高效液相色譜儀,包括: 四元輸液泵、在線脫氣機(jī)、柱溫箱和自動(dòng)進(jìn)樣器,配備HP 1049 電化學(xué)檢測器，美國Agilent公司產(chǎn)品;API-4000 型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀和Analyst 1.4軟件, 美國ABI公司產(chǎn)品。BP 211 D型十萬分之一天平,德國Sartorius公司產(chǎn)品;XW-80 A旋渦混合器,上海精科實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品; 80-2 型離心機(jī),姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品。

1.3 給藥方法以及樣品采集 采用自身對照隨機(jī)交叉試驗(yàn)的方法，將60 名受試者隨機(jī)分為兩組，按照不同的順序先后給予國產(chǎn)和進(jìn)口吲噠帕胺片，兩次用藥間隔一周進(jìn)行清洗。受試者在試驗(yàn)的前一天晚上進(jìn)食清淡飲食以后，夜里禁食10 h，試驗(yàn)的當(dāng)天早晨空腹服藥，用溫開水500 mL送服2.5 mg的吲噠帕胺片，服藥2 h以后可以飲水，服藥4 h以后統(tǒng)一進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)午餐，10 h以后統(tǒng)一進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)晚餐。給藥前及給藥后0.5 h，1 h，1.5 h，2 h，2.5 h，3 h，4 h，6 h，8 h，12 h，

24 h，48 h，72 h時(shí)間點(diǎn)取肘靜脈血約5 mL，放于被肝素化的試管中，6000 r/min離心10 min，分離血漿，于-50℃進(jìn)行保存直至測定用。停藥一周以后，進(jìn)行交叉實(shí)驗(yàn)。

1.4 血樣品的測定 血漿樣品的預(yù)處理：用精密儀器量取血漿樣品40 mL，放于1.5 mLEP的試管中，加入內(nèi)標(biāo)工作液(瑞格列奈鈣乙腈溶液)40 (μL，渦旋混合均勻，加入乙腈300 mL，渦旋混合均勻，1×104r/min，4℃低溫離心10 min，取上清液4μL樣，-50℃下氮?dú)獯蹈桑詈筮M(jìn)行HPLC—MS／MS分析。

2 方法學(xué)考察與評(píng)價(jià)

2.1 專屬性 在設(shè)定好色譜的情況下進(jìn)行測量，空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不影響吲噠帕胺的測定，吲噠帕胺的保留時(shí)間約為6 min。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 將吲噠帕胺標(biāo)準(zhǔn)液用空白血漿稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)血樣，按照樣品的處理方法進(jìn)行處理，以樣品的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比對藥物濃度進(jìn)行回歸處理。

2.3 回收率及精密度 配制濃度為1.73 ng/mL、16.2 ng/mL、86.4 ng/mL的吲達(dá)帕胺標(biāo)準(zhǔn)血漿各5 份，按上法平行操作進(jìn)行測定，得到的日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)差均＜15%，平均相對回收率分別為91.9%、98.8%和101.2%。經(jīng)過處理以后，血樣在24 h內(nèi)比較穩(wěn)定。每天配置以上濃度的血漿，連續(xù)測量幾天，得到的日間相對標(biāo)準(zhǔn)差均＜15%。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 11.0 和DAS 10 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。AUC用梯形面積法計(jì)算;Tmax和Cmax為實(shí)測值。

4 結(jié)果

4.1 血藥濃度時(shí)間關(guān)系 經(jīng)測量繪圖得出，60 名健康志愿者單劑量口服試驗(yàn)制劑和參比制劑后的平均濃度時(shí)間曲線相似。

4.2 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 60 名受試者單劑量服用兩種藥以后，其血藥濃度時(shí)間關(guān)系用相關(guān)軟件處理以后，得到的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表1。

表1 60 名受試者單劑量服用兩種藥物的藥代動(dòng)力學(xué)比較

4.3 生物等效性評(píng)價(jià) 對AUC和Cmax進(jìn)行方差分析和單側(cè)t檢驗(yàn)。受試制劑AUCo∞m的90%可信區(qū)間為124.4%～110.4%，AUCo∞的90%可信區(qū)間是101.8%～111.2%，均在參比試劑的80%～120%以內(nèi)；受試制劑的Cmax 90%可信區(qū)間為95.5%～110.3%，在參比制劑的75%～140%之間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明受試制劑與參比制劑在生物學(xué)上等效。

5 討論

經(jīng)過參考有關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道，本研究采用HPL-MS/MS法，測定健康人血漿中吲噠帕胺的濃度，方法簡單易行，其中，精密度、準(zhǔn)確度、特異度和靈敏度均符合藥代動(dòng)力學(xué)研究的指導(dǎo)原則和分析生物藥品的要求[5]，所得的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)可以為吲噠帕胺的研究提供參考。在本次實(shí)驗(yàn)建立色譜條件下，吲噠帕胺以及內(nèi)標(biāo)的測定，均不受血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，其中精密度和回收率均能達(dá)到生物樣本測定的要求。

本研究采用的是HPL-MS/MS法，測定了60 例成年健康男性受試者自身交叉口服單位劑量口服參比制劑（進(jìn)口的吲達(dá)帕胺片）和受試制劑（國產(chǎn)的吲達(dá)帕胺片）2.5 mg后的血漿藥物濃度。兩種制劑在成年男性健康者中的代謝過程基本相似，所得到的全血中吲達(dá)帕胺的血藥濃度及主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與國外報(bào)道的文獻(xiàn)基本相似。實(shí)驗(yàn)所得到的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)經(jīng)過方差分析，經(jīng)過比較兩者差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；經(jīng)過生物等效性分析，表明進(jìn)口吲達(dá)帕胺片與國產(chǎn)吲達(dá)帕胺片在體內(nèi)吸收、分布與消除的過程基本相似，兩種制劑為生物等效制劑。而且在試驗(yàn)過程中未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。

[1]夏春華，王曉華，熊玉卿，等.高效液相一質(zhì)譜法測定人體血漿中吲達(dá)帕胺的濃度及其生物等效性研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2007,24(2)：136-138.

[2]佟玲，齊丹丹，畢開順，等.高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定人血漿中吲達(dá)帕胺及其生物等效性研究[J].中國新藥與臨床雜志，2006,25（11）：851-855.

[3]金智敏.吲噠帕胺對高血壓高危患者血清肌酐、尿酸、血鉀及左室肥厚的長期影響[J].高血壓雜志,2002,13(3):235-239.

[4]陳端霞,游凱,傅如南,等.人血清中吲達(dá)帕胺的高效液相色譜法測定[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2005,12(4):286-289.

[5]鐘大放.以加權(quán)最小二乘法建立生物分析標(biāo)準(zhǔn)曲線的若干問題[J].藥物分析雜志，1996,16（5）：343-346.