牛黃消炎片中非法成分土大黃苷的檢測(cè)

朱南霖， 許 菊

（1.內(nèi)蒙古大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010021；2.紹興市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江紹興 312071）

牛黃消炎片中非法成分土大黃苷的檢測(cè)

朱南霖1， 許 菊2*

（1.內(nèi)蒙古大學(xué)，內(nèi)蒙古呼和浩特010021；2.紹興市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江紹興 312071）

目的 建立牛黃消炎片中非法成分土大黃苷的檢測(cè)方法。方法 采用薄層色譜法對(duì)牛黃消炎片中有可能投入的偽品大黃中的土大黃苷成分進(jìn)行薄層鑒別；采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法對(duì)土大黃苷成分作進(jìn)一步定性鑒別。結(jié)果 對(duì)牛黃消炎片中存在的非法成分土大黃苷能有效檢測(cè)。結(jié)論 該方法操作簡便，靈敏可靠，可用于牛黃消炎片中非法成分土大黃苷的檢查。

牛黃消炎片；土大黃苷；TLC；HPLC

牛黃消炎片為收載于《中國藥典》的中成藥［1］，其處方由人工牛黃、珍珠母、蟾酥、青黛、大黃、天花粉、雄黃組成，其中的大黃目前市場(chǎng)中存在多個(gè)《中國藥典》收載品種以外的混偽品，并存在充正品投料的現(xiàn)象，這些混偽品大多含有土大黃苷成分，而有3個(gè)植物來源 （掌葉大黃、唐古特大黃和藥用大黃）的正品大黃不含有此成分［2-4］。近年國家食品藥品監(jiān)督管理局尚有對(duì)含大黃成分的中成藥 （如牛黃解毒片、炎可寧片等）檢查土大黃苷的藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法頒布［5］，但尚無牛黃消炎片中檢測(cè)非法成分土大黃苷的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法，也未見有關(guān)報(bào)道。為此，通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)［6-12］，采用薄層色譜法和高效液相色譜法，建立了牛黃消炎片中土大黃苷成分的檢測(cè)方法，可方便的檢查出投料大黃的真?zhèn)吻闆r。現(xiàn)將檢測(cè)方法介紹如下，以供質(zhì)量控制參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1200高效液相色譜儀，檢測(cè)器為二極管陣列 （DAD）檢測(cè)器。

1.2 試藥 土大黃苷對(duì)照品 （批號(hào)110794-201105，購自中國藥品生物制品檢定所）；大黃對(duì)照藥材 （唐古特大黃，批號(hào)120902-200609，購自中國藥品生物制品檢定所）；牛黃消炎片由哈爾濱某制藥有限公司生產(chǎn) （批號(hào)：20100101）；甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水；硅膠G預(yù)制板；聚酰胺薄膜；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 土大黃苷的薄層檢查

2.1.1 供試樣品溶液制備 樣品去糖衣，研細(xì)，取0.5 g，置錐形瓶中，加甲醇10 mL，超聲處理20min，濾過，濾液作為供試樣品溶液。

2.1.2 陰性樣品溶液制備 按牛黃消炎片的處方組成制得陰性樣品，取0.5 g，同2.1.1項(xiàng)供試品溶液制備法，制得陰性樣品溶液。

2.1.3 大黃對(duì)照溶液制備 取大黃對(duì)照藥材0.1 g，同2.1.1項(xiàng)供試品溶液制備法，制得大黃對(duì)照溶液。

2.1.4 土大黃苷對(duì)照品溶液制備 取土大黃苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.5 薄層色譜條件與檢出 采用3個(gè)不同的展開系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。展開系統(tǒng)①：硅膠G薄層板，以丁酮-乙酸乙酯-甲酸-水 （7∶10∶1∶1）為展開劑。展開系統(tǒng)②：硅膠G薄層板，以三氯甲烷-甲醇-水 -甲酸 （20∶6∶0.6∶0.4）為展開劑。展開系統(tǒng)③：聚酰胺薄膜，以甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸 （15∶2.5∶2.5∶10∶0.05）為展開劑。點(diǎn)樣量：供試品溶液、對(duì)照品溶液、大黃對(duì)照溶液和陰性樣品溶液各5μL。檢出方法：展開，取出，晾干后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同持久藍(lán)紫色的熒光斑點(diǎn)；陰性樣品溶液、大黃對(duì)照溶液對(duì)土大黃苷檢出無干擾。薄層的色譜圖見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2.2 高效液相色譜法 （HPLC法）

2.2.1 色譜條件 色譜柱Atlantis d-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱溫35℃，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水 （25∶7∶68），檢測(cè)波長324 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.2.2 供試樣品溶液的制備 樣品去糖衣，研細(xì)，取1 g，置燒瓶中，加乙酸乙酯30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?5 mL溶解，溶液高速離心，取上清液作為供試樣品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取按牛黃消炎片處方組成制得的陰性樣品1 g，同2.2.2項(xiàng)供試品溶液制備法，制得陰性樣品溶液。

2.2.4 土大黃苷對(duì)照品溶液的制備 取土大黃苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每mL含50 μg的溶液，即得。

2.2.5 大黃對(duì)照溶液制備 取大黃對(duì)照藥材0.2 g，同2.2.2項(xiàng)供試品溶液制備法，制得大黃對(duì)照溶液。

2.2.6 樣品測(cè)試 取供試品溶液、陰性樣品溶液、大黃對(duì)照溶液及對(duì)照品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖。液相色譜圖見圖2。

圖2 HPLC圖

為進(jìn)一步確認(rèn)供試品溶液中出現(xiàn)的與土大黃苷對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰，利用DAD檢測(cè)器在200～400 nm對(duì)色譜峰進(jìn)行了光譜掃描，結(jié)果二峰的光譜掃描圖相一致，相似度為99.9%。紫外光譜圖見圖3。

圖3 紫外光譜圖

3 討論

3.1 在薄層色譜檢查中，采用了3種不同的展開系統(tǒng)，其中使用聚酰胺薄膜時(shí)，土大黃苷的檢出靈敏度非常高，分離度也好，同一土大黃苷對(duì)照品在硅膠板上為一個(gè)斑點(diǎn)，而在聚酰胺薄膜上除主斑點(diǎn)外尚可見另2個(gè)斑點(diǎn)，久貯的對(duì)照品溶液不穩(wěn)定，主斑點(diǎn)會(huì)分解，出現(xiàn)主次顛倒現(xiàn)象，故對(duì)照品以新制為宜。

3.2 在高效液相色譜檢查中，供試品溶液制備時(shí)，對(duì)用甲醇和用乙酸乙酯為溶劑提取作了比較，用甲醇時(shí)土大黃苷色譜峰也能較好分離，但色譜中會(huì)有較多雜峰，用乙酸乙酯作溶劑提取相對(duì)較好。本實(shí)驗(yàn)還考察了不同廠牌的液相儀 （Waters e2695高效液相色譜儀和Agilent 1100高效液相色譜儀）、不同品牌和型號(hào)的多根色譜柱 （Agilent SB-C18、Agilent XDB-C18、Diamonsil（TM）鉆石C18、Ultimate XB-C18等）的情況，尚對(duì)不同的流動(dòng)相系統(tǒng)也進(jìn)行了考察，有乙腈-甲醇-水 （7∶30∶63）和乙腈-水 （20∶80）等系統(tǒng)，均能獲得好的分離。

3.3 用上述建立的方法對(duì)從流通領(lǐng)域抽取的11批牛黃消炎片樣品 （分別由4家企業(yè)生產(chǎn)）進(jìn)行了土大黃苷的檢測(cè)，結(jié)果其中有4批檢測(cè)出了土大黃苷，對(duì)于由同一企業(yè)生產(chǎn)的不同批次樣品，有的檢出有的未檢出，說明其投料的大黃部分存在偽品現(xiàn)象。通過對(duì)牛黃消炎片市場(chǎng)中同品種中土大黃苷的檢測(cè)，說明本檢測(cè)方法應(yīng)該是可靠和有效的。

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［5］國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件：2008013，2008015［S］.

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R927.1

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1001-1528（2013）04-0870-02

10.3969/j.issn.1001-1528.2013.04.060

2012-06-18

朱南霖 （1991—），女，本科，主要從事化學(xué)分析與研究工作。E-mail：5157421@163.com

*通信作者：許 菊 （1962—），女，主任中藥師，主要從事中藥質(zhì)量研究工作。Tel：（0575）88338271，E-mail：sxxuju@126.com