• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血髓源性抑制細胞的檢測及與Th1/Th2 細胞的相關(guān)性分析

      2013-05-07 02:20:58許為民龔愛華王慧花盛浩王旭輝陳艷尤海燕焦志軍
      關(guān)鍵詞:免疫性類風(fēng)濕外周血

      許為民,龔愛華,王慧,花盛浩,王旭輝,陳艷,尤海燕,焦志軍

      (1.江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科,江蘇 鎮(zhèn)江212001;2.江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院,江蘇 鎮(zhèn)江212013)

      類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是以關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織非感染性炎癥為主的、系統(tǒng)性自身免疫性疾病。RA 的發(fā)病機制仍不清楚,目前認為該病的發(fā)生發(fā)展與CD4+T 細胞(Th 細胞)亞群失衡及功能異常密切相關(guān)[1-2]。髓源性抑制細胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是一群分化成熟受阻而形成的異質(zhì)細胞,可通過分泌誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(iNOS)、Ⅰ型精氨酸酶(ARG-1)等抑制T 細胞的增殖和分化[3-4]。此類細胞在RA 外周血中的分布情況尚未見報道。本文擬通過流式細胞術(shù)檢測RA 患者外周血中MDSCs 的比例并分析其與Th1/Th2 細胞的相關(guān)性。

      1 對象與方法

      1.1 研究對象

      選擇2012年4月至7月于江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院門診及住院的RA 患者36例,其中,男4例,女32例,年齡30 ~80(51.7 ±12.0)歲。所有病例符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)腫脹關(guān)節(jié)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、C 反應(yīng)蛋白、紅細胞沉降率等臨床檢測指標(biāo),計算DAS28 評分,分為2 組:活動組(n =20)和穩(wěn)定組(n =16)。另選江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院健康查體人員10例作為對照組,男2例,女8例,年齡32 ~75(52.1 ±15.2)歲,無類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及其他自身免疫性疾病、感染、腫瘤等。以上標(biāo)本獲取時均取得受試者的知情同意。

      1.2 主要試劑和儀器

      熒光標(biāo)記的抗體:CD4-PE、IFN-γ-FITC、IL-4-FITC、CD14-PEcy5、HLA-DR-FITC、CD11b-APC、CD33-PE(eBioscience);RPMI-1640、Hanks 液、PBS緩沖液、胎牛血清(Gibco);Ficoll 分離液(Lymphoprep);固定破膜劑(Beckman);流式細胞儀(BD FACS Calibur)。

      1.3 標(biāo)本采集

      分別抽取RA 患者和健康者外周血3 mL,置于EDTA 抗凝管中。

      1.4 MDSCs 膜表面標(biāo)志染色

      取100 μL 抗凝全血于流式管中,加入鼠抗人熒光標(biāo)志CD14-PEcy5、HLA-DR-FITC、CD11b-APC、CD33-PE 各5 μL,室溫避光孵育15 min。加入1 mL溶血劑,混勻,室溫避光,反應(yīng)10 min。PBS 洗滌,2000 r/min,離心5 min。棄上清,加入200 μL PBS,混勻,用流式細胞儀進行檢測。

      1.5 外周血單個核細胞( peripheral blood mononuclear cell,PBMC) 分離

      取抗凝血2 mL,1500 r/min,離心5 min,吸出血漿后,加入等體積PBS 稀釋、混勻,按照1 ∶1 比例,移至Ficoll 分離液中,2000 r/min,離心10 min,用吸管將白膜層移入無菌玻璃管,用PBS 洗滌,1500 r/min,離心5 min,棄去上清液。用RPMI-1640 培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)調(diào)整細胞懸液密度為1 ×106/mL。

      1.6 膜表面標(biāo)志及胞內(nèi)細胞因子染色

      在PBMC 懸液中加入2 μL 佛波醇酯(50 mg/L)和1 μL 離子霉素(100 mg/L),于37 ℃和5%CO2孵育箱中培養(yǎng)5 h。取出刺激培養(yǎng)的PBMC,用PBS 離心洗滌后加入5 μL CD4-PE,渦旋混勻,室溫避光孵育15 min。經(jīng)洗滌、固定和破膜后將樣品分成2 管,分別加入5 μL IFN-γ-FITC 和5 μL IL-4-FITC,混勻,室溫避光孵育15 min。PBS 洗滌,離心,棄去上清,加入200 μL PBS,混勻,用流式細胞儀進行檢測。

      1.7 FCM 檢測分析

      以CD4+INF-γ+的表達比例表示Th1 細胞百分比,以CD4+IL-4+的表達比例表示Th2 細胞百分比,以CD14-HLA-DR-CD33+CD11b+的表達比例表示MDSCs 百分比。結(jié)果分析采用Cellquest軟件。

      1.8 統(tǒng)計學(xué)分析

      實驗數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 5.0 軟件進行分析,多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,進一步兩兩比較采用LSD-t 檢驗。相關(guān)性分析采用Spearman檢驗,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 RA 患者外周血MDSCs 的比例

      以CD14-HLA-DR-CD33+CD11b+作為外周血MDSCs 的表面標(biāo)志,采用流式細胞術(shù)四色標(biāo)志檢測36例RA 患者外周MDSCs 比例,結(jié)果顯示,活動組RA 患者外周血中MDSCs 比例(61.14 ±2.68)%明顯高于穩(wěn)定組(48.29 ±3.96)%和對照組(46.91 ±5.01)%(P 均<0.05);穩(wěn)定組雖略高于對照組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見圖1。

      2.2 RA 患者外周血MDSCs 與Th1、Th2 細胞的相關(guān)性

      在檢測MDSCs 的同時,我們檢測了外周血中Th1、Th2 細胞的比例,經(jīng)Spearman 相關(guān)分析,結(jié)果顯示,MDSCs 比例與Th1 細胞比例呈負相關(guān)(r =-0.424,P=0.0219),而與Th2 細胞比例無明顯相關(guān)性(r=-0.213,P>0.05),見圖2。

      圖1 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中髓源性抑制細胞的檢測結(jié)果Fig 1 Detection of myeloid-derived suppressor cells in peripheral blood from patients with rheumatoid arthritis

      圖2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血MDSCs 與Th1、Th2細胞的相關(guān)性分析Fig 2 The correlations between myeloid-derived suppressor cells and Th1/Th2 cell in peripheral blood from patients with rheumatoid arthritis

      3 討論

      MDSCs 是一群具有強免疫抑制功能的異質(zhì)細胞,通過分泌iNOS、ARG-1、活性氧等產(chǎn)物抑制T 細胞增殖活化,促進T 細胞凋亡,減弱機體的免疫監(jiān)視功能,從而成為機體抗腫瘤免疫的最主要障礙。MDSCs在自身免疫性疾病中也發(fā)揮作用,如Zhu 等[5]、Slaney 等[6]通過對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)動物模型的研究發(fā)現(xiàn),MDSCs 能夠發(fā)揮免疫抑制作用,緩解EAE 的癥狀。這一發(fā)現(xiàn)使MDSCs 成為近年來研究自身免疫性疾病的新熱點。

      本研究結(jié)果顯示,活動組MDSCs 的比例明顯高于穩(wěn)定組和對照組,而穩(wěn)定組雖然在總體上略高于對照組,但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明,RA 患者外周血中MDSCs 的比例增高,尤其在活動期更為明顯。在急慢性炎癥患者和動物模型中(如腫瘤[7-8]、急性移植排斥反應(yīng)[9]以及自身免疫性疾?。?-6,10]),MDSCs 均有顯著增高,這與本文的研究結(jié)果相一致,說明MDSCs 在炎癥狀態(tài)下顯著增多,檢測其比例可作為炎性活動的評估指標(biāo)。

      根據(jù)上述結(jié)果,我們推測RA 外周血MDSCs 增多的可能原因如下。在炎癥狀態(tài)下,大量活化的T細胞亞群、異常增多的炎性因子和趨化因子,通過各種途徑,傳遞信號至骨髓,使得骨髓造血干細胞和祖細胞大量增殖,并且將尚未分化成熟的MDSCs 提前釋放入血,當(dāng)病情穩(wěn)定以后,由于炎性細胞因子的水平降低,可能刺激招募MDSCs 的信號減弱,所以MDSCs 的比例也逐漸降低。

      在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)RA 患者的病情越嚴重,MDSCs 的比例越高,增多的MDSCs 似乎未能有效抑制其病情。我們推測可能隨著病情的加重,炎癥局部的炎性因子水平過高,MDSCs 的抑制能力無法與其抗衡;或者致炎細胞及其分泌的細胞因子阻礙MDSCs 進入炎性局部發(fā)揮抑制作用;或者MDSCs 只是受到炎性信號的反饋刺激,僅僅表現(xiàn)為數(shù)量上的增多,并無抑制功能;或者MDSCs 本身就是一把雙刃劍,在不同的疾病中,扮演不同的角色,促炎或是抑炎。King 等[11]和Milder 等[12]研究表明,內(nèi)源性的MDSCs 并不能抑制自身免疫性疾病的發(fā)展,甚至?xí)又夭∏?。所以,在后續(xù)實驗中,我們將進一步研究MDSCs 在RA 中的具體功能。

      CD4+T 細胞的大量浸潤及其亞群的平衡失調(diào)是RA 發(fā)病機制的一個重要環(huán)節(jié)[1-2]。經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),MDSCs 比例與Th1 細胞比例呈負相關(guān),而與Th2細胞比例無明顯相關(guān)性,表明在RA 患者體內(nèi),MDSCs 和Th1 細胞功能可能是互相拮抗的,MDSCs 對體內(nèi)Th1/Th2 平衡的調(diào)節(jié)主要在于對Th1 細胞功能的抑制。體外研究[13-14]表明,MDSCs 可抑制Th1 細胞的分化與功能的發(fā)揮。此外,Chou 等[15]指出,MDSCs能促進調(diào)節(jié)性T 細胞(regulatory T celll,Treg)的增殖與分化,降低移植胰島的排斥反應(yīng),促進移植物存活。在RA 中,MDSCs 抑制功能的發(fā)揮也可能與Treg 細胞有關(guān),值得進一步研究。

      總之,本研究表明,RA 患者外周血中MDSCs 比例增高,且與Th1 細胞呈負相關(guān),有關(guān)MDSCs 細胞的功能及其與T 細胞亞群的作用機制有待進一步探討。

      [1]Jadidi-Niaragh F,Mirshafiey A. Regulatory T-cell as orchestra leader in immunosuppression process of multiple sclerosis[J]. Immunopharmacol Immunotoxicol,2011,33(3):545-567.

      [2]Klareskog L,Catrina AI,Paget S. Rheumatoid arthritis[J]. Lancet,2009,373 (9664):659-672.

      [3]Cripps JG,Gorham JD. MDSC in autoimmunity[J]. Int Immunopharmacol,2011,11 (7):789-793.

      [4]Gabrilovich DI,Nagaraj S. Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the immune system[J]. Nat Rev Immunol,2009,9(3):162-174.

      [5]Zhu B,Bando Y,Xiao S,et al. CD11b+Ly-6Chisuppressive monocytes in experimental autoimmune encephalomyelitis[J]. J Immunol,2007,179(8):5228-5237.

      [6]Slaney CY,Toker A,La Flamme A,et al. Na?ve blood monocytes suppress T-cell function. A possible mechanism for protection from autoimmunity[J]. Immunol Cell Biol,2011,89(1):7-13.

      [7]Gonda K,Shibata M,Ohtake T,et al. Myeloid-derived suppressor cells in patients with breast cancer[J]. Gan To Kagaku Ryoho,2012,39(9):1363-1368.

      [8]Sun HL,Zhou X,Xue YF,et al. Increased frequency and clinical significance of myeloid-derived suppressor cells in human colorectal carcinoma[J]. World J Gastroenterol,2012,18(25):3303-3309.

      [9]Mougiakakos D,Jitschin R,von Bahr L,et al. Immunosuppressive CD14+HLA-DRlow/negIDO+myeloid cells in patients following allogeneic hematopoietic stem cell transplantation[J]. Leukemia,2013,27(2):377-388.

      [10]Iwata Y,F(xiàn)uruichi K,Kitagawa K,et al. Involvement of CD11b+GR-1lowcells in autoimmunedisorder in MRLFas lpr mouse[J]. Clin Exp Nephrol,2010,14(5):411-417.

      [11]King IL,Dickendesher TL,Segal BM. Circulating Ly-6C+ myeloid precursors migrate to the CNS and play a pathogenic roleduring autoimmunedemyelinatingdisease[J]. Blood,2009,113(14):3190-3197.

      [12]Mildner A,Mack M,Schmidt H,et al.CCR2+Ly-6Chi monocytes are crucial for the effector phase of autoimmunity in the central nervous system[J]. Brain,2009,132(Pt 9):2487-2500.

      [13]Wang L,Chang EW,Wong SC,et al. Increased myeloid-derived suppressor cells in gastric cancer correlate with cancer stage and plasma S100A8/A9 proinflammatory proteins[J]. J Immunol,2013,190(2):794-804.

      [14]Zheng Y,Xu M,Li X,et al. Cimetidine suppresses lung tumor growth in mice through proapoptosis of myeloid-derived suppressor cells[J]. Mol Immunol,2013,54(1):74-83.

      [15]Chou HS,Hsieh CC,Charles R,et al. Myeloid-derived suppressor cells protect islet transplants by B7-H1 mediated enhancement of T regulatory cells[J]. Transplantation,2012,93(3):272-282.

      猜你喜歡
      免疫性類風(fēng)濕外周血
      從扶正祛邪法探討免疫性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的防治
      胸腺瘤與自身免疫性疾病的研究進展
      Atg5和Atg7在自身免疫性疾病中的研究進展
      益腎蠲痹丸治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的Meta分析
      中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:25:26
      求醫(yī)更要求己的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎
      白血病外周血體外診斷技術(shù)及產(chǎn)品
      結(jié)腸炎小鼠外周血和結(jié)腸上皮組織中Gal-9的表達
      慢性蕁麻疹患者外周血IL-17和IL-23的表達及臨床意義
      中西醫(yī)結(jié)合治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動期50例
      藏藥浴治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎48例
      望奎县| 赤水市| 兴安盟| 连云港市| 临汾市| 宣城市| 长岭县| 咸宁市| 文山县| 高平市| 阳泉市| 云阳县| 苍梧县| 阳曲县| 米脂县| 科尔| 镇巴县| 绍兴县| 航空| 镇平县| 萝北县| 商南县| 湟源县| 靖江市| 姜堰市| 习水县| 云龙县| 神木县| 突泉县| 唐河县| 曲阳县| 宁波市| 宿迁市| 莲花县| 大姚县| 巴林左旗| 棋牌| 和田市| 旬阳县| 榆林市| 略阳县|