TNS4和Stat3蛋白表達與大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

楊朝暉 曹學(xué)全 盧洪勝 孫剛 章輝 王四玲

TNS4和Stat3蛋白表達與大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

楊朝暉 曹學(xué)全 盧洪勝 孫剛 章輝 王四玲

目的 探討張力蛋白4（TNS4）和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（Stat3）在大腸癌中的表達情況及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)En Vision法檢測90例大腸癌患者的癌組織和其中20例患者的癌旁組織中TNS4和Stat3的表達情況。結(jié)果TNS4和Stat3在大腸癌組織中陽性表達率均顯著高于癌旁組織（均P＜0．05）。TNS4和Stat3的陽性率在不同腫瘤浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不同臨床分期的大腸癌患者之間均具有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0．05），而在不同年齡、性別、腫瘤大小及分化程度的患者之間無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0．05）。在大腸癌組織中兩者表達呈正相關(guān)（r=-0．476，P＜0．05）。 結(jié)論 TNS4和Stat3的表達異?？赡芄餐瑓⑴c了大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移；聯(lián)合檢測以上兩種蛋白的表達對于評價大腸癌的惡性程度、判斷其轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后具有一定的參考價值。

TNS4 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3 大腸癌

大腸癌是人類消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，在我國，由于飲食習(xí)慣和生活方式的改變，其發(fā)病率呈逐漸上升趨勢。大腸癌的發(fā)生、發(fā)展與多基因突變及多信號傳導(dǎo)途徑異常有關(guān)。新近的研究發(fā)現(xiàn)[1-2]張力蛋白4（tensin4，TNS4），也稱為只含羧基端的張力蛋白樣分子（COOH-termed tensin-like molecule，Cten），是張力蛋白（tensin）基因家族中的一員，該家族參與細胞黏附、遷移及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。Stat3是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子（signal transducers and activators of transcription，Stats）的家族成員之一，其信號通路與細胞的增殖、分化及凋亡密切相關(guān)，該通路持續(xù)激活可導(dǎo)致細胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化，故Stat3目前被認為是癌基因中的一種[3-5]。本研究利用免疫組化方法，檢測并分析大腸癌組織及癌旁組織中TNS4和Stat3的表達及臨床意義，進一步探討其在大腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及機制。

1 對象和方法

1.1 對象 收集2010-09—2012-09于我院行根治手術(shù)的90例大腸癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，其中男57例，女33例；年齡39～82歲，平均（63.0±11.7）歲。所有患者術(shù)前均未接受放、化療及其他針對腫瘤的特殊治療，且術(shù)后均經(jīng)病理明確診斷。所取癌組織均為中心非壞死部分，另選取其中20例患者的癌旁組織，均為距離腫瘤＞5cm的組織。所有組織標(biāo)本取出后迅速用10%的中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋保存。參照2010年WHO組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)分為：高分化腺癌6例，中分化腺癌55例，低分化腺癌29例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者65例。根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）/國際抗癌聯(lián)盟（UICC）結(jié)直腸癌TNM分期系統(tǒng)（第7版）判定，Ⅰ期18例、Ⅱ期30例、Ⅲ期19例、Ⅳ期23例。

1.2 實驗試劑及方法 鼠抗人TNS4單克隆抗體購自美國Abnova公司，工作濃度為1∶100。兔抗人Stat3單克隆抗體購自Santa Cruz公司，工作濃度1∶150。即用型羊抗鼠免疫組化En VisionTM檢測試劑盒和DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本固定包埋后，以4μm厚度連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟和水化后，行免疫組織化學(xué)En Vision二步法染色，具體操作步驟按試劑盒說明書進行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片。以PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性切片作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 TNS4蛋白陽性表達指在細胞膜或細胞質(zhì)見到棕黃色顆粒分布。Stat3蛋白則主要表達于細胞質(zhì)，部分在細胞核。觀察5個以上高倍鏡視野，計數(shù)不少于1 000個細胞中的陽性細胞數(shù)，陽性細胞數(shù)＜10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 TNS4和Stat3在大腸癌組織和癌旁組織中的表達 大腸癌組織中TNS4表達陽性率64.4%（58/90），癌旁組織中表達陽性率15.0%（3/20）；大腸癌組織中Stat3表達陽性率為70.0%（63/90），癌旁組織中表達陽性率25.0%（5/20）。兩者在大腸癌組織中陽性表達率均顯著高于癌旁組織（χ2=16.195、7.350，均P＜0.05），見圖1-2。

2.2 TNS4和Stat3表達與患者臨床病理特征的關(guān)系 大腸癌組織中TNS4和Stat3的陽性率隨著腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期進展逐漸遞增，均有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）；而在不同年齡、性別、腫瘤大小及分化程度的患者之間的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05），見表1。

2.3 大腸癌組織中TNS4和Stat3表達的相關(guān)性 90例患者大腸癌組織中TNS4和Stat3的表達均陽性者50例，均陰性者19例，TNS4陽性而Stat3陰性者8例，TNS4陰性而Stat3陽性者13例。大腸癌組織中TNS4和Stat3的表達呈正相關(guān)（r=-0.476，P＜0.05）。

3 討論

TNS4是tensin家族中的第4成員，該基因家族包括四個成員（TNS1，TNS2，TNS3和Cten/TNS4）。既往關(guān)于TNS4的研究較少，近年來對其關(guān)注開始增加。有研究顯示其在肝癌、乳腺癌等腫瘤中的表達與患者的預(yù)后有一定的關(guān)系[6-7]。同樣的結(jié)果在胰腺癌、胃癌中也被證實[8-9]。本研究顯示，TNS4在大腸癌組織中陽性表達率顯著高于癌旁組織，提示TNS4的高表達可能參與正常腸黏膜的惡性轉(zhuǎn)化。進一步研究發(fā)現(xiàn)，隨著患者腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移增加和臨床分期提高，TNS4在大腸癌組織中的表達明顯增強，而與患者的年齡、性別、腫瘤大小及分化程度無相關(guān)性，表明TNS4的高表達在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要的角色，這些研究結(jié)果與文獻報道一致[6-9]。

圖1 TNS4在大腸癌組織及癌旁組織中的表達（A：大腸癌組織；B：癌旁組織；免疫組化En Vision法，×200）

圖2 Stat3在大腸癌組織及癌旁組織中表達（A：大腸癌組織；B：癌旁組織；免疫組化En Vision法，×200）

Stat3是Stats家族的重要成員，己被公認為是一種癌基因或類癌基因。Stats家族由Stat1、Stat2、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b和Stat6等7個成員組成[10]，主要包括6個功能區(qū)，編碼基因定位于人類第17號染色體q21，廣泛表達于不同類型的細胞和組織中，是許多致癌途徑的焦點。Stat3在正常組織中的表達是快速而短暫的，而在多種惡性腫瘤如肝癌、乳腺癌和胃癌中，Stat3表現(xiàn)為持續(xù)性激活和高表達，并且與腫瘤的惡性程度及預(yù)后密切相關(guān)[11-13]。當(dāng)細胞因子或生長因子等激活Stat3上游的Janus激酶（JAK）后，活化的JAK募集胞漿中以單體存在的Stat3分子，使與受體結(jié)合的Stat3分子酪氨酸磷酸化后（p-Stat3，Tyr705），形成同源或異源二聚體從受體上釋放下來，進入細胞核調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄[14]。本研究顯示Stat3在大腸癌組織的表達高于癌旁組織，而且Stat3表達上調(diào)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)。Stat3在大腸癌組織中的過表達，提示該基因可能與大腸癌的發(fā)生密切相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌組織中TNS4和Stat3的表達呈正相關(guān)，提示Stat3的活化可能和TNS4的高表達有關(guān)，這與Kwon等[15]和Barbieri等[7]報道的TNS4持續(xù)的高表達可活化Stat3，在促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮了重要作用一致。高表達的TNS4持續(xù)活化Stat3的途徑可能促進細胞膜介導(dǎo)的腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移，顯示TNS4可能成為大腸癌潛在的生物學(xué)標(biāo)志和靶點。因此，TNS4和Stat3有望成為判斷大腸癌預(yù)后的一個重要指標(biāo)，為大腸癌的診斷治療開辟一條新途徑。

表1 TNS4和Stat3表達與患者臨床病理特征的關(guān)系

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Expression of TNS4 and Stat3 in colorectal carcinoma and its relation to cancer metastasis

Objective To investigate the expression and TNS4 and Stat3 in colorectal carcinoma and its correlation with cancer metastasis． Methods Expression of TNS4 and Stat3 was detected by immunohistochemistry in tissue sections of 90 patients with colorectal carcinoma and 20 samples of pericancerous colorectal mucosa． Results The expression of TNS4 and Stat3 in colorectal carcinoma were higher than that in precancerous mucosa(both P＜0．05)．The abnormal expression of TNS4 and Stat3 were correlated with infiltration depth,lymph node metastasis and clinical stages(all P＜0．05),but not correlated with age,sex,tumor size and histological types(all P＞0．05)．Expression of TNS4 was positively correlated with that of Stat3 in colorectal carcinoma tissues(P＜0．05)．Conclusion TNS4 and Stat3 may contribute to colorectal carcinoma development,invasion and metastasis．Detection of both TNS4 and Stat3 may be used as indicators for lymph node metastasis and prognosis of patients with colorectal carcinoma．

TNS4 Stat 3 Colorectal carcinoma

2013-08-30）

（本文編輯：胥昀）

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