丹參、三七等中藥對關(guān)節(jié)炎小鼠抗炎作用的實驗研究

林曉明 劉 萍 劉樹群 楊 冬 國 華

(1.泰安市第一人民醫(yī)院； 2.泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院，山東 泰安 271000)

關(guān)節(jié)炎是一種非感染性炎癥，與巨噬細胞分泌的炎癥細胞因子、白細胞介素1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)有關(guān)。有的研究表明該病是一種免疫性炎癥，在炎癥機制研究中涉及免疫學(xué)、病理學(xué)等科學(xué)領(lǐng)域，盡管近年來對炎癥遞質(zhì)中的細胞因子的研究比較活躍，但細胞因子在關(guān)節(jié)炎中的作用及其機制需要進一步開展研究。有關(guān)文獻中藥治療關(guān)節(jié)炎僅限于臨床，而中藥療法具體作用機制未見報道。膝關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性滑膜炎動物模型經(jīng)過一次預(yù)實驗適當(dāng)?shù)馗脑旌?，采用ELISA法檢測中藥有效成份抑制關(guān)節(jié)炎小鼠中IL-1β和TNF-α的作用及機制。

1 材料和方法

1.1關(guān)節(jié)炎小鼠動物模型的建立與分組 選擇純系雄小鼠12只，體重100～150 g,以1 mg/kg左下腹腔注射細菌脂多糖(LPS),制成關(guān)節(jié)炎模型12只，再隨機分為：模型組6只、中藥組6只，其中模型組動物的正常肢設(shè)為對照組，共18個關(guān)節(jié)。

1.2方法 從造模的第1天起，中藥組開始灌胃給藥，藥液濃度為1 g/ml，每次給藥量為4.7 ml/kg，1次/d，共10天；造模組給予等量生理鹽水。造模后的第11天，用空氣栓塞法將小鼠處死，切開膝關(guān)節(jié)囊，經(jīng)觀察記錄后，用1 ml生理鹽水灌洗關(guān)節(jié)腔收集關(guān)節(jié)液，用肉眼觀察其色質(zhì)情況后置于硅化試管中，離心(4℃，1800 r/min,10 min),收集上清液，-70℃進行低溫冷凍保存待用。大體觀察各組動物膝關(guān)節(jié)皮色、關(guān)節(jié)液色質(zhì)和滑膜厚度的變化情況。用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA檢測各組鼠關(guān)節(jié)滑液中的白細胞介素1β和腫瘤壞死因子α表達水平。

2 結(jié) 果

2.1一般觀察 正常情況下，關(guān)節(jié)皮色是常態(tài)，不出現(xiàn)紅腫，滑液量少，清亮透明，滑膜厚度正常。在兩組未造膜的正常肢呈現(xiàn)的情況與上述一致。模型組的造模肢皮色出現(xiàn)紅腫、滑液滲出多，呈淺黃色且質(zhì)濁、滑膜增厚，與急性炎癥情況反應(yīng)一致。中藥組造模肢由于用藥的原故，滑膜炎癥減輕，滑膜輕微增厚。

2.2小鼠關(guān)節(jié)液中IL-1β和TNF-α水平 見表1。

表1 各組關(guān)節(jié)液中IL-1β和TNF-α水平比較

注：aP<0.05,vs對照組;bP<0.05,vs模型組。

由表1顯示：①模型組炎癥細胞因子白細胞介素1β和腫瘤壞死因子α較對照組表達水平高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。②中藥組炎癥細胞因子白細胞介素1β和腫瘤壞死因子α較模型組表達水平低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

關(guān)節(jié)炎是一種自身免疫性疾病，臨床上通常給予糖皮質(zhì)激素及非甾體類抗炎藥治療，但副作用較大，效果較差。隨著近年來中藥的抗炎應(yīng)用增多，但作用機制的諸多空白亟待填充。深入研究此類中藥的作用機制，有助于為抗炎中藥的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。本實驗研究結(jié)果表明，關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)液中炎癥細胞因子白細胞介素1β和腫瘤壞死因子α表達水平比較，模型組的質(zhì)量濃度最高，中藥組次之，對照組最小。可見高濃度炎癥細胞因子的出現(xiàn)，提示白細胞介素1β和腫瘤壞死因子α在關(guān)節(jié)炎病理過程中起一定作用。研究還顯示，中藥組與模型組比較：中藥組小鼠關(guān)節(jié)液中白細胞介素Iβ和腫瘤壞死因子α表達水平顯著降低，提示中藥療法能夠抑制炎癥細胞因子白細胞介素Iβ和腫瘤壞死因子α的表達。經(jīng)分析，IL-β在炎癥反應(yīng)中可提高內(nèi)皮細胞通透性，促進中性粒細胞和內(nèi)皮細胞間的粘附，對炎癥性器官損傷有重要作用。TNF-α是機體炎癥反應(yīng)與免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子，可在內(nèi)毒素、病毒及其它細胞因子的刺激下由不同細胞分泌，是強有力的促炎癥反應(yīng)的細胞因子。

總之，本實驗證明：三七、丹參有效成份可以通過抑制IL-1β和TNF-α水平，而發(fā)揮抗炎作用。

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