三明市禽隱孢子蟲感染情況調(diào)查

黃志堅 福建省三明市動物疫病預(yù)防控制中心 365000

禽隱孢子蟲病是由隱孢子蟲科隱孢子蟲屬的貝氏隱孢子蟲、火雞隱孢子蟲寄生于家禽的呼吸系統(tǒng)、消化道、法氏囊和泄殖腔內(nèi)所引起的一種原蟲病。1907年，著名寄生蟲學(xué)家Tyzzer（1907）首次從實驗小鼠的胃腺乳膜上皮內(nèi)發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲，其具有廣泛的宿主類型，能感染大多數(shù)禽類，包括雞、鴨、鵝、火雞、鵪鶉等30多種禽類動物，引起動物嚴重的呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)障礙，導(dǎo)致其生產(chǎn)性能下降或死亡，造成重大經(jīng)濟損失［1-3］。在我國北京、山東、廣東、寧夏、上海等地均已報道了畜禽隱孢子蟲感染。Goodwin等（1989）和 Tzipori等（1981）報道，雞在自然感染的情況下，其感染率為6.4%～88.0%。我國雞隱孢子蟲感染情況在北京為37.8%，新疆9.8%，廣東82.3%～100%；北京鴨隱孢子蟲感染率為29%～64%，鵪鶉為14.7%［4-5］。對三明市禽類隱孢子蟲感染情況的調(diào)查研究還沒有系統(tǒng)進行過，為全面了解掌握三明市禽隱孢子蟲感染狀況，科學(xué)推斷禽隱孢子蟲的感染來源和傳播機制以及公共衛(wèi)生重要性，為預(yù)防和控制禽隱孢子蟲病提供理論基礎(chǔ)，筆者對轄區(qū)內(nèi)12個雞場、8個鴨場、2個鵝場、1個鴿場、1個鵪鶉場及36家散養(yǎng)戶的禽類進行隱孢子蟲感染情況調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 隨機抽取12個雞場238羽雞，8個鴨場165羽鴨，2個鵝場40羽鵝，1個鴿場20羽鴿，1個鵪鶉場20羽鵪鶉，36家散養(yǎng)戶213羽家禽（其中雞152羽），逐一從其泄殖腔采集新鮮糞便5～10 g，共696份，分別裝入塑料袋中，密封編號，置于4℃冰箱保存待檢。

1.2 檢查方法 飽和蔗糖溶液漂浮法［6］：取糞便樣品，加10倍體積的蒸餾水，浸泡5 min充分攪勻，用銅網(wǎng)過濾，取濾液3000 r/min離心10 min，棄去上清液，加蔗糖漂浮液（蔗糖454 g，蒸餾水355 mL，石炭酸6.7 mL），充分混勻，3000 r/min離心10 min，用細鐵絲圈蘸取表層漂浮液涂片，在600倍光鏡下檢查。

改良抗酸染色法［7］：染液配制如下。石炭酸復(fù)紅染液（第1液）：堿性復(fù)紅4 g，95%的乙醇20 mL，石炭酸8 mL，蒸餾水100 mL；10%硫酸溶液（第2液）：純硫酸10 mL，蒸餾水90 mL（邊攪拌邊將硫酸徐徐傾入蒸餾水中）；孔雀綠液（第3液）：20 g/L孔雀綠原液1 mL，蒸餾水10 mL。操作步驟：將糞便樣品置于干凈載玻片上涂成糞膜，干后加甲醇固定5 min，吹干；滴加第 1 液染 5～10 min，水洗；滴加第2液染1～5 min后水洗；滴加第3液，1 min后水洗；干后置1000倍油鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 不同區(qū)域感染情況 三明地處福建西北部，位于武夷山脈與戴云山脈之間。南北長180 km，東西寬230 km，區(qū)內(nèi)山地丘陵廣布，山中及河谷盆地錯落其間，形成“八山一水一分田”的地理格局。總體地勢由西北部的武夷山麓自西南向東北傾斜，其中于沙溪中下游兩岸形成一塊閩中大谷地。全境屬中亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)，溫度適宜，雨量充沛。森林覆蓋率達76.8%。各養(yǎng)殖場、戶散落于山地丘陵間，周圍復(fù)雜的地理環(huán)境提供了良好的防疫天然屏障。但由于現(xiàn)代交通事業(yè)的高速發(fā)展和人員間密切往來，加上各養(yǎng)殖場、戶防疫制度上的漏洞，使得天然隔離措施在防止疫病傳入上大打折扣。從表1中可以看出，三明地區(qū)禽隱孢子蟲感染具有普遍性，但在各區(qū)域間存在一定的差異（23.2%～32.2%），東部地區(qū)最高，達32.2%，北部地區(qū)最低，為23.2%；抽檢的60個規(guī)模養(yǎng)殖場和農(nóng)村散養(yǎng)戶中，有17個陽性場（戶），平均感染率28.3%；抽檢696份糞便樣品，陽性數(shù)為192份，平均感染率27.6%。

表1 三明市各區(qū)域禽隱孢子蟲感染情況

2.2 不同養(yǎng)殖模式下各種家禽感染情況 規(guī)模養(yǎng)殖場感染率在25%～100%，抽檢483份樣品，陽性數(shù)為138份，平均感染率28.6%；農(nóng)村散養(yǎng)戶感染率在14.3%～100%，抽檢213份樣品，陽性數(shù)為54份，平均感染率25.4%。規(guī)模養(yǎng)殖場感染率略高于農(nóng)村散養(yǎng)戶，但二者間無明顯差異；雞、鴨的感染率較高，達25%～34%，鵝、鴿、鵪鶉的感染率較低，在0%～25%。見表2。

表2 不同養(yǎng)殖模式下禽隱孢子蟲感染情況

2.3 不同日齡家禽感染情況 10～30日齡平均感染率為33.9%，31～50日齡平均感染率為25.4%，51日齡以上平均感染率為22.1%；10～30日齡雞感染率最高（41.6%），明顯高于31日齡以上的雞群，鴨次之（30.5%）。見表3。

表3 不同日齡家禽隱孢子蟲感染情況

3 討 論

1）本次調(diào)查中，雞的總感染率為30.5%，鴨的總感染率為28.8%，鵝的總感染率為13.6%，鴿的總感染率為15%，鵪鶉的總感染率為0%，說明禽隱孢子蟲感染在三明市普遍存在，但在流行強度和損失程度上有所差別。通過試驗結(jié)果可以看出，規(guī)模養(yǎng)殖場和農(nóng)村散養(yǎng)戶禽類的總感染率較高但差異不太，這可能與禽類養(yǎng)殖密度高，更易感染有關(guān)，其中雞的感染率較高于其他禽類動物，說明在類似的環(huán)境中雞比其他禽類更易感染隱孢子蟲病；此次調(diào)查中，鵪鶉未檢出隱孢子蟲，但據(jù)國內(nèi)外資料報道，鵪鶉也是隱孢子蟲宿主之一，孫銘飛等［8］報道鵪鶉隱孢子蟲陽性率達14.69%，而此次調(diào)查中鵪鶉未檢出隱孢子蟲可能與調(diào)查的范圍和數(shù)量偏少及樣品多為成年鵪鶉有關(guān)。

2）從此次調(diào)查結(jié)果看來，三明地區(qū)禽隱孢子蟲感染具有普遍性，但在各區(qū)域間存在一定的差異（23.2%～32.2%），表1中顯示北部地區(qū)明顯低于南部和東部地區(qū)，這是否與北部地區(qū)的地理環(huán)境或氣候有關(guān)還有待于調(diào)查；各種家禽隱孢子蟲病的感染率也存在一定差異，這種差異除了與調(diào)查范圍和樣品來源、數(shù)量有關(guān)外，還可能與不同的養(yǎng)殖模式和飼養(yǎng)環(huán)境有關(guān)。在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，對于一些感染率高的養(yǎng)殖場戶一般建場時間較長，飼養(yǎng)密度過大，禽舍通風(fēng)不良，衛(wèi)生條件差等方面的問題，而感染率低的養(yǎng)殖房舍多數(shù)符合環(huán)境衛(wèi)生管理要求；農(nóng)村散養(yǎng)戶比規(guī)模養(yǎng)殖場感染率低的原因，可能是由于農(nóng)村多采取半放養(yǎng)的方式且養(yǎng)殖密度較低。

3）禽隱孢子蟲感染與日齡的關(guān)系。調(diào)查結(jié)果顯示，禽類動物隱孢子蟲感染率與日齡之間存在一定的關(guān)系。雛禽隱孢子蟲感染率明顯高于成年禽，這與周望平等［9］的報道相一致。從表3可見，雞隱孢子蟲感染受日齡的影響比較明顯，10～30日齡雞感染率為41.6%，31～50日齡雞感染率為28.9%，51日齡以上雞感染率為16.8%，前者明顯高于后者。

4）禽隱孢子蟲感染與季節(jié)的相關(guān)性。隱孢子蟲病一年四季均可發(fā)生，從此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在三明地區(qū)以春夏季感染率最高，秋冬季較低，春夏秋冬季感染率呈下降趨勢，這可能與氣溫、濕度變化、禽類活動范圍影響隱孢子蟲病的傳播有一定關(guān)系。由于此次調(diào)查的時間、地區(qū)、范圍和環(huán)境都不相同，對隱孢子蟲感染受季節(jié)影響的規(guī)律性還有待于進一步證實。

5）隱孢子蟲卵囊形態(tài)結(jié)構(gòu)與蟲種鑒定。由于隱孢子蟲感染多呈隱性經(jīng)過，感染者可以只向外界排出卵囊，而不表現(xiàn)出任何臨床癥狀，對一些發(fā)病的禽類來說，即使有明顯的癥狀，也常常屬于非特異性的，另外，動物在發(fā)病時常伴有許多條件性病原體的感染，因此，確切的診斷只能依靠實驗室手段觀察隱孢子蟲的各期蟲體，或用免疫學(xué)技術(shù)檢測抗原或抗體的方法。應(yīng)用飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法對隱孢子蟲進行形態(tài)學(xué)鑒定，是當(dāng)前最常用的檢測方法，其步驟簡便易行、結(jié)果明顯、不需復(fù)雜的儀器。此次檢測過程中，隱孢子蟲卵囊在糞便中已充分孢子化，卵囊呈長橢圓形，近似圓形等，大小為（5.5～7.7）μm×（4.2 ～5.5）μm，平均為 6.5 μm×4.7 μm，形狀指數(shù)為1.32。隱孢子蟲卵囊壁薄、光滑，無微孔和極粒，無色，卵囊內(nèi)有4個子孢子和1個殘體，卵囊在飽和糖水中呈玫瑰紅色，周圍有亮綠色的折光帶。改良抗酸染色法可見卵囊呈玫瑰紅色，內(nèi)部有桔子瓣狀結(jié)構(gòu)，背景呈藍綠色，對比性很強。從形態(tài)學(xué)上初步鑒定為貝氏隱孢子蟲。本次調(diào)查的所有形態(tài)相似的陽性樣品中可能有多種基因型，這有待于進一步用分子生物學(xué)方法進行鑒定。

［1］ 孔繁瑤.家畜寄生蟲學(xué)［M］.2版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1997：347-351.

［2］ 張龍現(xiàn)，蔣金書.隱孢子蟲和隱孢子蟲病研究進展［J］.寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報，2001，8（3）：184-192.

［3］ 孫銘飛，張龍現(xiàn)，寧長申，等.禽類隱孢子蟲研究進展［J］.中國人獸共患病雜志，2005，21（6）：522-525.

［4］ 孫彥平，張龍現(xiàn)，營復(fù)春，等.河南省規(guī)?；u隱孢子蟲感染情況調(diào)查［J］.中國家禽，2008，30（4）：49-52.

［5］ 史美清，林輝環(huán)，伊德里薩，等.廣州地區(qū)禽類隱孢子蟲病的初步調(diào)查［J］.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1996，17（1）：6-9.

［6］ 謝明權(quán)，李國清.現(xiàn)代寄生蟲學(xué)［M］.廣州：廣東科學(xué)技術(shù)出版社，2003.

［7］ 侯衛(wèi)東，菅復(fù)春，張龍現(xiàn)，等.抗酸染色法對隱孢子蟲卵囊的檢查［J］.河南畜牧獸醫(yī)，2006，27（11）：6-10.

［8］ 孫銘飛，閆文朝，張龍現(xiàn)，等.鵪鶉隱孢子蟲流行病學(xué)調(diào)查及動物感染試驗［J］.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，39（2）：210-214.

［9］ 周望平，肖兵南.湖南省部分地區(qū)禽隱孢子蟲感染情況調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)科技，2000，30（10）：15-16.