補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)糖尿病大鼠主動(dòng)脈PPAR-γ表達(dá)的影響*

李 陽(yáng)徐 潔△ 王 芳 郭 偉 譚 燚 付金鳳

（1.湖北省武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430022；2.江漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430056；3.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065）

補(bǔ)陽(yáng)還五湯具有益氣、活血、通絡(luò)之功效，臨床上常用于防治心腦血管意外及其后遺癥的治療［1］。研究表明，補(bǔ)陽(yáng)還五湯能改善動(dòng)脈粥樣硬化及糖尿病并血管病變，預(yù)防心腦血管急癥的發(fā)生。本研究旨在觀察補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)糖尿病大鼠血脂及主動(dòng)脈過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR-γ）的影響。

1 材 料

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)健康雄性Wistar大鼠，60只，體質(zhì)量 （200±20）g，由湖北省防疫站提供。

1.2 藥物及試劑 補(bǔ)陽(yáng)還五湯，中藥均購(gòu)自湖北省中藥材公司，為免煎劑，使用前用蒸餾水配制成溶液，最終質(zhì)量濃度為2g/mL。鹽酸二甲雙胍片為華北制藥集團(tuán)制劑有限公司產(chǎn)品，批號(hào)0709705，臨用時(shí)以蒸餾水為溶劑制成混懸液，其終質(zhì)量濃度為2mg/mL。鏈脲佐菌素（STZ，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品）臨用時(shí)以0.1mol/L，pH4.4檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液配成STZ溶液；血糖（中生北控生物科技有限公司）；膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、免疫熒光染色試劑。高脂高糖飼料，按蔗糖∶豬油∶奶粉∶雞蛋∶普通飼料=30∶20∶4∶2∶63 配置。

1.3 模型制備 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（8只）和造模組（52只）。造模組大鼠禁食12h后，按30mg/kg體質(zhì)量尾靜脈注射STZ溶液，用普通飼料喂養(yǎng)2周，高糖高脂飼料喂養(yǎng)1周，然后作OGTT試驗(yàn)，血糖值＞16.7mmol/L以上確定為糖尿病大鼠［2-3］。

1.4 分組與給藥 篩選糖尿病大鼠共46只，隨機(jī)分為糖尿病模型組（DM組）12只，按10g/kg體質(zhì)量灌服蒸餾水；二甲雙胍組（MF 組）12 只，按 0.75g/（kg·d）灌服二甲雙胍混懸液；補(bǔ)陽(yáng)還五湯高劑量組（BH 組）11 只，按 22.5g/（kg·d）灌服補(bǔ)陽(yáng)還五湯液；補(bǔ)陽(yáng)還五湯低劑量組（BL 組）11 只，按 5.4g/（kg·d）灌服補(bǔ)陽(yáng)還五湯液；均每日1次，連續(xù)6周，治療期間喂高脂高糖飼料。正常對(duì)照組（NR組）給予注射等量枸櫞酸緩沖液，以普通飼料喂養(yǎng)。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè) 大鼠禁食12h后，在戊巴比妥腹腔注射麻醉下行腹主動(dòng)脈取血，離心后取血清保存于-70℃冰箱中。血糖采用葡萄糖氧化酶法；TC、TG采用酶學(xué)方法檢測(cè)；以上均采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。各實(shí)驗(yàn)組在相對(duì)一致的位置（瓣膜邊緣處）截取主動(dòng)脈根部動(dòng)脈環(huán)部分測(cè)定PPAR-γ水平。PPAR-γ表達(dá)水平測(cè)定采用免疫熒光染色法，拍攝倍數(shù)及照相條件一致，采用IPP6.0圖像分析軟件，計(jì)算熒光面積率及平均光密度（熒光面積率=熒光陽(yáng)性區(qū)面積/動(dòng)脈截面的面積，平均熒光灰度值=熒光灰度/熒光陽(yáng)性區(qū)面積）。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 造模成功后，DM大鼠出現(xiàn)典型的多飲、多尿、精神萎靡表現(xiàn)。NR組大鼠飲食、飲水及活動(dòng)正常，反應(yīng)靈敏，毛色光亮，體質(zhì)量漸增。

2.2 補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)糖尿病大鼠血糖、血脂的影響 見(jiàn)表1。與NR組相比，DM大鼠血糖、TC、TG均較NR組明顯升高（P＜0.01）。給予補(bǔ)陽(yáng)還五湯、二甲雙胍干預(yù)后，血糖、TC、TG均較DM組降低，其中BH、MF組降低有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

2.3 補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)糖尿病大鼠主動(dòng)脈PPAR-γ表達(dá)的影響見(jiàn)表1、圖1。與NR組相比，DM大鼠主動(dòng)脈PPAR-γ表達(dá)下降（P＜0.01）。給予補(bǔ)陽(yáng)還五湯、二甲雙胍干預(yù)后，BH、MF組較DM組大鼠主動(dòng)脈PPAR-γ表達(dá)明顯上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 各組大鼠血糖、血脂水平及PPAR-γ表達(dá)比較（）

表1 各組大鼠血糖、血脂水平及PPAR-γ表達(dá)比較（）

與 NR 組比較，*P＜0.01；與 DM 組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

平均熒光灰度值NR 組 8 5.74±1.74 1.34±0.53 1.38±0.25 12.77±2.38 98.22±13.3 DM 組 12 23.34±8.34* 3.31±0.75*3.02±1.457* 5.48±1.75* 43.45±16.5*BL 組 11 14.51±7.92△ 2.82±0.23 2.71±2.57 6.06±1.48* 48.40±15.24*BH 組 11 13.21±9.93△ 2.28±0.32△ 2.47±1.67△ 11.17±2.19△△ 74.52±14.40△△MF 組 12 9.16±7.59△△ 2.38±0.75△ 2.03±0.503△ 13.43±2.29△△ 83.19±15.31△△組 別 n 血糖（mmol/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）PPAR-γ表達(dá)面積率（%）

圖1 各組PPAR-γ水平表達(dá)熒光染色圖（×400倍）

3 討 論

補(bǔ)陽(yáng)還五湯是王清任根據(jù)其氣虛血瘀理論，在《醫(yī)林改錯(cuò)》創(chuàng)立的經(jīng)典方劑，方以黃芪為君，生用、重用則力專(zhuān)而性走，周行全身，大補(bǔ)元?dú)庵?，而奏益氣行瘀之功；以歸尾為臣，活血以通血脈，祛瘀而不傷正；輕用桃仁、紅花、川芎、赤芍、地龍為佐使，以活血化瘀通絡(luò)。全方配伍嚴(yán)謹(jǐn)，氣血并顧，標(biāo)本兼顧，具有益氣、活血、通絡(luò)之功效。既往研究表明補(bǔ)陽(yáng)還五湯能減低血脂，減輕血管動(dòng)脈粥樣硬化病變程度［4］。本研究也觀察到補(bǔ)陽(yáng)還五湯高劑量組有降低糖尿病大鼠TC、TG作用，與既往研究一致。

PPARs為核受體超家族成員之一。其中，PPAR-γ在脂肪細(xì)胞中的表達(dá)最高，另外腎臟、肝臟和腸組織等也表達(dá)。其主要作用是調(diào)節(jié)體內(nèi)糖脂代謝，增加組織對(duì)胰島素的敏感性。近幾年研究表明，在血管壁中的血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中均有PPAR-γ表達(dá)，PPAR-γ還有保護(hù)血管作用。既往研究表明PPAR-γ激動(dòng)劑具有抗血管重構(gòu)作用，還可通過(guò)糾正糖尿病患者代謝異常間接保護(hù)血管［5］。細(xì)胞培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)PPAR-γ受體激動(dòng)劑可抑制平滑肌細(xì)胞增殖和遷移［6］。抗細(xì)胞增殖和遷移作用是抗血管重構(gòu)作用的重要基礎(chǔ)，因此，激活PPAR-γ受體可能對(duì)調(diào)節(jié)糖脂代謝同時(shí)有對(duì)血管有保護(hù)作用。

有研究表明，補(bǔ)陽(yáng)還五湯能上調(diào)糖尿病大鼠肝臟PPAR-γ的表達(dá)，從而改善胰島素抵抗［7］，但對(duì)血管中PPAR-γ表達(dá)影響少有報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中DM組大鼠主動(dòng)脈PPAR-γ的表達(dá)明顯低于NR組，經(jīng)治療后補(bǔ)陽(yáng)還五湯組、二甲雙胍組PPAR-γ的表達(dá)明顯高于模型組。進(jìn)一步表明補(bǔ)陽(yáng)還五湯可能通過(guò)調(diào)節(jié)胰島素靶器官PPAR-γ表達(dá)上調(diào)，從而增強(qiáng)胰島素靶器官對(duì)胰島素的敏感性，調(diào)節(jié)糖脂代謝。補(bǔ)陽(yáng)還五湯本身不具有降糖作用，但本研究中觀察到補(bǔ)陽(yáng)還五湯組糖尿病大鼠血糖有不同程度降低，可能與其脂毒性降低及PPAR-γ表達(dá)增加有關(guān)。

本研究表明補(bǔ)陽(yáng)還五湯調(diào)節(jié)糖尿病大鼠糖脂代謝、增加糖尿病大鼠血管PPAR-γ表達(dá)，為補(bǔ)陽(yáng)還五湯在預(yù)防糖尿病血管病變中的應(yīng)用進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］陳紅霞，莫秀云，郭友華，等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯配合康復(fù)訓(xùn)練對(duì)氣虛血瘀證腦梗死患者運(yùn)動(dòng)功能及日常生活活動(dòng)能力恢復(fù)的效果評(píng)估［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2006，10（43）：37-39.

［2］劉永玉，毛良，莫啟忠.實(shí)驗(yàn)性NIDDM大鼠模型［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，1990，6（2）：115-116.

［3］陸付耳，冷三華，屠慶年，等.黃連解毒湯與黃連素對(duì)2型糖尿病大鼠葡萄糖和脂質(zhì)代謝影響的研究［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2002，31（6）：662-665.

［4］尚改萍，文志斌，何小凡，等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯抗家兔動(dòng)脈粥樣硬化形成及機(jī)制［J］.中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2002，2（10）：112-113

［5］Bajaj M，Suraamornkul S，Piper P，et al.Decreased plasma adiponectin concentrations are closely related to hepatic fat content and hepatic insul in resistance in pioglitazone-treated type 2 diabeticpatients［J］.JClin Endocrinol Metab，2004，89（1）：200-206.

［6］Wakino S，Kintscher U，Kim S，et al.Peroxisome proliferator-activated receptor-γ ligands inhibit Rb phosphorylation and G1→S transition in vascular smooth muscle cells ［J］.J Biol Chem，2000，275 （29）：22435-22441.

［7］常庚，潘莉，王菊素，等.補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)2型糖尿病大鼠模型PPARα/γ 表達(dá)的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2010，2（30）：358-359.