銀黃顆粒中黃芩苷含量測(cè)定方法研究

巴小翠，高延甲

（東營(yíng)市藥品檢驗(yàn)所，山東 東營(yíng)257091）

銀黃顆粒收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第六冊(cè).由金銀花提取物，黃芩提取物組成，具有清熱，解毒，消炎的功效.金銀花提取物為方中君藥，黃芩提取物雖為臣藥，但其藥理作用非常重要，該標(biāo)準(zhǔn)中僅有黃芩的薄層鑒別，沒(méi)有定量指標(biāo)，本文參照《中國(guó)藥典》2010年版（一部）黃芩藥材中黃芩苷的含量測(cè)定方法，對(duì)制劑中黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定［1］.

1 儀器與試藥

Agilent型液相色譜儀 （美國(guó) ）、METTLER TOLEDO XS205DualRange電子分析天平、KQ－500B型超聲波清洗器，甲醇為色譜純?cè)噭疄榧兓?，其他試劑為分析?黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110715－201016），銀黃顆粒（四川升和制藥股份有限公司，批號(hào)：100911、100923、100952）.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Kromasil C18色譜柱（4.6mm×250 mm，5μm），以甲醇－水－磷酸（47∶53∶0.2）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)274nm，柱溫30℃ ，流速：1.0mL·min－1.

2.2 供試品溶液的制備［1］取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.1g，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇約40mL，超聲處理50min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液.

2.3 對(duì)照品溶液的制備 取60℃真空干燥4h的黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，至容量瓶中，加50%甲醇制成60μg·mL－1的溶液，作為對(duì)照品溶液.

2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方制備不含黃芩提取物的陰性樣品，照“2.2”供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液.

2.5 干擾試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性樣品溶液，注入液相色譜儀測(cè)定，色譜圖見(jiàn)（圖1～3），結(jié)果陰性樣品溶液在此條件下對(duì)黃芩苷測(cè)定無(wú)干擾.

2.6 線性關(guān)系的試驗(yàn) 精密稱取黃芩苷對(duì)照品12.00mg，置200mL棕色量瓶中，加50%甲醇150mL，振搖10min，使充分溶解，再用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻.精密吸取25 mL，置100mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻.分別精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μL注入液相色譜儀中，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸，回歸方程：Y＝77 910X＋17 014，r＝0.999 5.表明黃芩苷進(jìn)樣量在0.03～0.15μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.3項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積的RSD為0.7%（n＝5），結(jié)果表明儀器精密度良好.

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣10μL，測(cè)得峰面積的RSD為1.0%（n＝6）.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品5份，照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定，黃芩苷含量平均為19.8mg·g－1，RSD為1.5%（n＝5）.表明分析方法重現(xiàn)性好.

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批號(hào)樣品6份，分別精密加入對(duì)照品溶液（黃芩苷對(duì)照品10.2mg，加甲醇至10mL）1mL，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品測(cè)定 取樣品，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μL進(jìn)樣測(cè)定峰面積，用外標(biāo)法（以峰面積）計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)圖1～3，表2.

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性樣品色譜圖

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討論

銀黃顆粒的組成雖簡(jiǎn)單，但僅有定性，不足以控制其質(zhì)量.本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定銀黃顆粒中黃芩苷含量，該法回收率高，分離效果好，操作簡(jiǎn)便，方法可行.

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：283.