引種栽培對(duì)卷丹水溶性成分的影響＊

侯 嘉 ，連中學(xué) ，杜 弢 ，陳紅剛 ，朱田田 ，林 麗

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，甘肅 蘭州 730000; 2.甘肅省渭源縣種子管理站，甘肅 定西 748299)

中藥百合最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，來源于百合科植物卷丹 Lilium lancifolium Thunb、百合 Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker或細(xì)葉百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉質(zhì)鱗葉，性味甘寒，有養(yǎng)陰潤肺、清心安神之功，用于治療陰虛久咳、痰中帶血、虛煩驚悸、失眠多夢(mèng)、精神恍惚等癥[1]。江蘇宜興是藥用百合的傳統(tǒng)產(chǎn)地，其原植物為卷丹 Lilium lancifolium Thunb，商品稱為“宜興百合”。近20年來，卷丹的產(chǎn)地發(fā)生了很大變化，目前卷丹的主要產(chǎn)區(qū)分布在湖南龍山、安徽霍山及天長等地[2]。中藥百合中含有皂苷、生物堿、多糖、磷脂、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、淀粉和大量微量元素等化學(xué)成分[3]。其中百合多糖具有增強(qiáng)耐缺氧能力、抗氧化及增強(qiáng)免疫作用，是百合的主要活性成分之一[4]。本研究中分別測(cè)定原產(chǎn)地與引種地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量，為評(píng)價(jià)引種后的卷丹質(zhì)量提供參考。

1 材料、儀器與試藥

2009年百合課題組赴卷丹的主產(chǎn)區(qū)引種，共收集江蘇宜興、安徽霍山縣、湖南龍山等地卷丹樣品19份，經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系杜弢副教授鑒定為卷丹 Lilium lancifolium Thunb.。2010年春將收集到的樣品種植于甘肅渭源，2010年秋采收。材料來源見表1。

UV1102型紫外可見分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司);BS－224S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);800型離心沉淀器(上海手術(shù)器械十廠);SHA－B型數(shù)顯恒溫水浴振蕩器(常州榮冠實(shí)驗(yàn)分析儀器廠)。D－葡萄糖對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110833－200904，供含量測(cè)定用);其余試劑均為分析純。統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS11.5軟件。

表1 卷丹樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 水溶性總多糖的含量測(cè)定(蒽酮－濃硫酸法)[5]

2.1.1 溶液配制

精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對(duì)照品適量，置100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，制成0.151 2 mg/mL的對(duì)照品貯備液。稱取卷丹樣品約2 g，置250mL圓底燒瓶中，精密加入100mL蒸餾水，加熱回流2 h，冷卻至室溫，過濾，精密吸取濾液 1.0mL，加入無水乙醇 5.0mL，搖勻，離心(3 000 r/min，30 min)，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.1.2 測(cè)定波長選擇

精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，分置10 mL棕色具塞試管中，分別加入0.2%蒽酮－硫酸溶液4.0mL，混勻，迅速置冰水浴中冷卻6min后，置100℃水浴中加熱10min，取出，置冰水浴中5min，取出，室溫放置10min后，于400～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。結(jié)果表明(圖1)，對(duì)照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長均為627 nm。

圖1 百合多糖紫外掃描光譜圖

2.1.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品貯備液 0，1.5，3.0，4.5，6.0，7.5，10.0mL，分別置 10mL 容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。精密吸取上述各溶液1.0mL，置10mL棕色具塞試管中，照2.1.2項(xiàng)下操作，于627 nm波長處測(cè)定吸光度。以吸光度(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=35.535X+0.056 1，r=0.994 8(n=7)。結(jié)果表明，葡萄糖質(zhì)量濃度在0.004 536～0.030 24 g/L范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取質(zhì)量濃度為0.151 2 g/L的對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果吸光度的 RSD為1.28%，表明儀器的精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取新鮮配制的卷丹供試品溶液1.0mL，置10mL棕色具塞試管中，照2.1.2項(xiàng)下方法操作，分別于0，1.0，1.5，2.0，2.5，3 h 測(cè)定。結(jié)果吸光度的 RSD 為 1.36% ，表明供試品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):分別稱取卷丹樣品約2 g，精密稱定，平行6份，按2.1.1項(xiàng)下方法制得供試品溶液，按2.1.2項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算百合多糖的百分含量。結(jié)果平均含量為9.654%，RSD為1.96%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收率試驗(yàn):稱取已測(cè)定含量的卷丹樣品約0.2 g，精密稱定，加入0.151 2 g/L的葡萄糖對(duì)照品溶液適量，按2.1.1項(xiàng)下提取方法共制得6份供試品溶液。將供試品溶液照2.1.2項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

2.1.4 樣品總多糖含量測(cè)定

取不同來源卷丹樣品各2 g，按2.1.1項(xiàng)下方法制得供試品溶液。精密吸取上述各供試品溶液1.0mL，置10mL棕色具塞試管中，照2.1.2項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算不同來源卷丹的多糖百分含量。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2 水溶性浸出物含量測(cè)定[1]

將卷丹樣品粉碎，使能通過二號(hào)篩，并混合均勻。取供試品約4 g，精密稱定，置250mL的錐形瓶中，精密加水100mL，密塞，冷浸，在振蕩器中振搖6 h，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液20mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供樣品中水溶性浸出物的含量。

2.3 結(jié)果

原產(chǎn)地與引種地卷丹中多糖及浸出物含量的測(cè)定結(jié)果見表3?？梢姡a(chǎn)地卷丹浸出物含量高于引種地，但引種地卷丹中多糖含量明顯高于原產(chǎn)地。

表3 原產(chǎn)地與引種地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量(%，n=3)

3 討論

引種到甘肅渭源的卷丹和原產(chǎn)地的成分相比，多糖含量平均增加了約3倍。通過協(xié)方差分析(F=70.799，單側(cè) P=0.000)，卷丹引種前后多糖含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多糖是藥用百合中主要的活性成分，春季降水少、夏季溫度較低、秋季日照短有利于多糖的累積[6]。2010年，甘肅渭源縣4月份平均降雨14.2 mm，8月份最高溫度27.1℃，最低溫度16.0℃，9月份平均日照時(shí)數(shù)150.5 h(甘肅省渭源縣氣象局)，可見甘肅渭源的氣候環(huán)境有利于百合多糖的累積，其多糖含量遠(yuǎn)高于原產(chǎn)地，同時(shí)浸出物含量也符合《中國藥典》(2010年版)要求。甘肅渭源種植卷丹的水溶性浸出物含量低于原產(chǎn)地，能否在甘肅大面積種植卷丹，還需進(jìn)一步試驗(yàn)。

引種到甘肅渭源的卷丹和原產(chǎn)地的相比，浸出物的含量普遍下降。卷丹中浸出物含量與多糖含量無相關(guān)性(協(xié)方差分析，F(xiàn)=0.474，單側(cè) P=0.496 ＞0.05);可能由于藥材不同的干燥方法造成引種地與原產(chǎn)地卷丹中浸出物含量差異，具體原因還需進(jìn)一步研究。

卷丹預(yù)處理時(shí)不宜粉碎過細(xì)，否則加熱提取易糊化，且在加熱過程中應(yīng)避免長時(shí)間高溫回流。提取完成后，必須過濾，取濾液，防止藥渣中的淀粉、纖維素等也能被濃硫酸水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)，使得結(jié)果不準(zhǔn)確。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:123，174，附錄 62.

[2]杜 弢，陳紅剛，連中學(xué)，等.中藥材百合生產(chǎn)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J].中藥材，2011，34(2):165 －168.

[3]曲偉紅，周日寶，童巧珍，等.百合的化學(xué)成分研究概況[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，10(3):75－76.

[4]胡敏敏，蔡寶昌，張志杰，等.百合多糖的藥效學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18(2):107 －109.

[5]孫 俊，張科偉，秦昆明，等.不同產(chǎn)地百合多糖的含量測(cè)定[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26(1):65 －66.

[6]馮旭芹，崔秀明，陳中堅(jiān)，等.三七有效成分與氣候生態(tài)因子的相關(guān)性分析[J].中國農(nóng)業(yè)氣象，2006，27(1):16－18.