食品中甜蜜素檢測(cè)方法的改進(jìn)

周慧敏，趙彤

（國家糧食監(jiān)督檢驗(yàn)中心大連市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，遼寧大連 116021）

甜蜜素又名環(huán)己基氨基磺酸鈉，是一種在我國廣泛使用的無營養(yǎng)、甜度高的食品甜味劑。但也有研究表明：人體過量攝入甜蜜素會(huì)產(chǎn)生致癌、致畸、損害腎功能等副作用[1-2]。到目前為止，已建立的測(cè)定甜蜜素的方法很多，主要有氣相色譜法、比色法、薄層層析法[3]、液相色譜-質(zhì)譜法[4]。在國家抽查中，GB/T 5009.97—2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定》中氣相色譜法是最常用的，即利用環(huán)己基氨基磺酸鈉在酸性條件下與亞硝酸鈉反應(yīng)，以生成的環(huán)己醇亞硝酸酯定性和定量。但采用填充柱，峰形不夠尖銳，給積分定量造成一定誤差；沒有凈化步驟，樣品會(huì)污染設(shè)備；使用100 mL比色管過大，不適合批量檢驗(yàn)；環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定易分解，影響定量。結(jié)合食品中甜蜜素測(cè)定方法的相關(guān)報(bào)道和實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)，采用OV-101毛細(xì)管色譜柱代替填充柱，使用正己烷凈化樣品，按比例減小取樣量和試劑使用量，以環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積加和定量，以避免以上問題。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

6890N氣相色譜儀：安捷倫科技有限公司；OV-101毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm×0.5 μm）色譜柱：中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所；TB—114電子天平：北京塞多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；QN—999多功能食物攪拌機(jī)：韓國日進(jìn)精工有限公司；QL-866渦旋混合器：海門市其林貝爾；CR21G離心機(jī)：日本日立公司。

1.1.2 試劑

甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品：上海泉島公司；甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液：2 mg/mL用蒸餾水配制；濃硫酸（優(yōu)級(jí)純）：100 g/L，用蒸餾水配制；亞硝酸鈉（分析純）：50 g/L，用蒸餾水配制；正己烷（色譜純）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)系列制備

分別取 2 mg/mL 甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液 2、20、50、100、200 μL于10 mL離心管中加蒸餾水至4 mL，加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應(yīng)30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.3 方法

1.3.1 固體樣品

試樣用粉碎機(jī)粉碎。稱取已粉碎的樣品10 g置于50 mL具塞三角瓶中，加入50 mL蒸餾水，振蕩60 min，過濾，取濾液10 mL并加入5 mL正己烷，渦旋混合儀混合2 min，4 000 r/min離心5 min，棄去有機(jī)相后，移取4 mL水相，轉(zhuǎn)移到10 mL離心管。向離心管中先后加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應(yīng)30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.3.2 液體樣品

稱取10 g樣品置于50 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，取10 mL并加入5 mL正己烷，渦旋混合儀混合2 min，4 000 r/min離心5 min，棄去有機(jī)相后，移取4 mL水相，轉(zhuǎn)移到10 mL離心管。向離心管中先后加入50 g/L的亞硝酸鈉溶液1 mL、100 g/L的硫酸溶液1 mL，渦旋混合，冰浴中反應(yīng)30 min后，加入2 mL正己烷提取，渦旋混合1 min，4 000 r/min離心2 min，取上清液供分析用。

1.4 色譜條件

色譜柱OV-101毛細(xì)管柱（30m×0.53mm×0.5μm），進(jìn)樣口溫度160℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度180℃，柱箱溫度80℃保持6min。載氣高純氮?dú)?mL/min，進(jìn)樣量1μL。

1.5 測(cè)定

甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液圖，見圖1。

經(jīng)GC-MS驗(yàn)證，如圖1所示峰1為甜蜜素衍生主產(chǎn)物環(huán)己醇亞硝酸酯，峰2為甜蜜素衍生副產(chǎn)物環(huán)己醇，環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定隨時(shí)間推移會(huì)分解成環(huán)己醇。為了減少環(huán)己醇亞硝酸酯分解給定量帶來的影響，本方法用環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積加和定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性范圍和檢出限

按1.2的方法配制標(biāo)準(zhǔn)序列，以1.4的色譜條件進(jìn)樣見圖 1。在 2 μg/mL～200 μg/mL 選定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)甜蜜素的含量與環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積之和的線性相關(guān)系數(shù)為0.999 6，見表1。

表1 甜蜜素的保留時(shí)間、線性范圍、相關(guān)系數(shù)Table 1 Retention time，Linear rang，correlative coefficients（r）of sodium cyclamate

在系列樣品中，將濃度為1.6 μg/mL的標(biāo)液1 μL進(jìn)樣后，所示得到的峰面積為12 PA*S，由此計(jì)算最低檢出濃度為4 mg/kg。

2.2 定量峰的選擇

國標(biāo)方法以環(huán)己醇亞硝酸酯定量，但環(huán)己醇亞硝酸酯不穩(wěn)定會(huì)隨時(shí)間推移分解成環(huán)己醇，影響定量，而且衍生后的樣品放置時(shí)間過長無法使用。在20℃下，以200 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品為例，其衍生產(chǎn)物隨時(shí)間變化，見表2。

表2 甜蜜素產(chǎn)物隨時(shí)間變化Table 2 Derivative varition with tim

由表2知，在40 h內(nèi)兩者峰面積之和是穩(wěn)定的。因此，本方法選擇環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇峰面積加和定量，以避免上述問題。

2.3 樣品的測(cè)定、回收率和精密度試驗(yàn)

2.3.1 空白樣品

取一空白糕點(diǎn)樣品在0.1、0.5、1.0 g/kg三個(gè)水平，每個(gè)水平同時(shí)做6組平行樣，按1.3的方法前處理，進(jìn)行回收率試驗(yàn)?；厥章试?3%～104%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.6%～4.3%，結(jié)果見表3。

表3 糕點(diǎn)試樣加標(biāo)回收率和精密度（n=6）Table 3 Recoveries and precision of cake samples（n=6）

2.3.2 陽性樣品

取一陽性糕點(diǎn)樣品在0.5水平，同時(shí)做6組平行樣，按1.3的方法前處理，進(jìn)行回收率試驗(yàn)?；厥章蕿?3.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.7%，結(jié)果見表4。

表4 糕點(diǎn)試樣加標(biāo)回收率和精密度（n=6）Table 4 Recoveries and precision of cake samples（n=6）

3 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)主要是用氣相色譜法對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明，該方法可準(zhǔn)確測(cè)定食品中的甜蜜素含量，且有很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.999 5，最低檢出濃度為4 mg/kg，回收率為93%～104%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.6%～4.7%。從而確認(rèn)本方法可準(zhǔn)確測(cè)定食品中的甜蜜素。

:

[1]Jacks0n C D,Baetcke K P.Causative agents in the induction of bladder cancer[J].Ann Clin Lab Sci,1976,6(3):223-232

[2]Bopp B A,Senders R C,Kesterson J W.Toxicological aspects of cyclamate and cyclohexylamine[J].Crit Rev Toxicol,1986,16(3):213-306

[3]張暖民.GB/T 5007.97-2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定》[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社:689-693

[4]王明泰.SN/T 1948-2007《進(jìn)出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法》[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社