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    壺瓶棗總黃酮抗氧化性研究

    2012-09-06 02:00:32王迎進(jìn)閆瑾璠趙雅琴張書書蘆婧
    食品研究與開發(fā) 2012年11期
    關(guān)鍵詞:超氧試液蘆丁

    王迎進(jìn),閆瑾璠,趙雅琴,張書書,蘆婧

    (忻州師范學(xué)院生化分析技術(shù)研究所,山西忻州 034000)

    壺瓶棗(Zizyphus jujuba cv.Huping)為鼠李科(Rhamnaceae)棗屬植物果實。主要產(chǎn)于山西太谷、榆次、平遙、交城、清徐等地。壺瓶棗含有大量的黃酮類、有機酸、三萜類、環(huán)磷酸腺苷、維生素、微量元素等[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物有抗炎、抗病毒、利膽、強心、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等作用[3-4]。因而,黃酮類化合物以其營養(yǎng)及保健作用引人矚目。近年來,有關(guān)棗類黃酮提取工藝和抗氧化性的研究屢見報道[4-5],然而關(guān)于壺瓶棗黃酮抗氧化性方面的研究卻鮮見報道。本研究采用超聲強化提取的方法,提取了壺瓶棗黃酮,研究了壺瓶棗黃酮對羥基、超氧陰離子、DPPH 3種不同自由基的清除能力,旨在為壺瓶棗黃酮的進(jìn)一步研究和開發(fā)奠定一些基礎(chǔ)。

    1 材料與儀器

    1.1 材料

    蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品:中國藥品生物制品檢定所,批號:100080-200707;壺瓶棗:產(chǎn)地山西省,太谷縣;實驗用水為蒸餾水,其它試劑均為分析純。

    1.2 儀器

    752型紫外光柵分光光度計:上海精密科學(xué)儀器有限公司;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器:上海亞榮生化儀器廠;KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司;SHZ-D(III)型循環(huán)水式真空泵:河南豫華儀器有限公司;HH-S型恒溫水浴鍋:陜西太康生物科技有限公司。

    2 方法

    2.1 黃酮含量的測定方法

    2.1.1 對照品溶液的制備

    精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品適量,用甲醇溶解,定容于50mL容量瓶中,制得濃度為0.20mg/mL的對照品溶液。

    2.1.2 最大吸收峰的確定

    精確吸取蘆丁對照品溶液2 mL,加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL,搖勻后靜置6 min,加10%硝酸鋁溶液0.3 mL,搖勻后靜置6 min,加10%氫氧化鈉溶液4.0 mL,用蒸餾水定容至10 mL,搖勻,放置15 min,于400 nm~600 nm波長處掃描,結(jié)果在510 nm處有最大吸收。

    2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    精確吸取0.20 mg/mL蘆丁對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,按照 2.1.2 實驗方法在 510 nm 處測定其吸光度值。以吸收度為縱坐標(biāo),對照品溶液的濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo),得線性回歸方程:Y=11.357X-0.002 9,r2=0.999 4。

    2.1.4 黃酮的提取

    壺瓶棗經(jīng)去核,干燥,粉碎,過篩(60目)后得壺瓶棗粉。準(zhǔn)確稱取壺瓶棗粉50 g,加入250 mL石油醚于70℃回流脫脂兩次,每次3 h,真空干燥。稱取脫脂后棗粉20.00g,按料液比1∶20加入70%乙醇浸泡30min,超聲功率105 W,提取溫度70℃下超聲提取0.5 h,過濾后得濾液和濾渣。濾渣再按上述方法提取2次,濃縮,定容至100 mL容量瓶,作為試樣液。

    2.1.5 黃酮含量測定

    取試樣液2.5 mL于10 mL容量瓶中,用蒸餾水稀釋到刻度,分別移取1 mL稀釋后試液于5個比色管中,按照2.1.2所述方法在510 nm處測定其吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得壺瓶棗黃酮含量為0.264%。

    2.2 自由基的生成及清除率的測定

    2.2.1 羥自由基的生成及清除率的測定

    按文獻(xiàn)[6]方法測定。

    2.2.2 超氧陰離子自由基的生成及清除率的測定

    按文獻(xiàn)[7]方法測定。

    2.2.3 DPPH·自由基的生成及清除率的測定

    按文獻(xiàn)[8]方法測定。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 壺瓶棗黃酮對羥自由基的清除作用

    壺瓶棗黃酮對羥自由基的清除效果見圖1。

    由圖1可知,隨著壺瓶棗黃酮濃度的增加,其對·OH自由基的清除率從19.85%逐漸增加到94.91%,說明壺瓶棗黃酮具有很強的·OH清除能力,并且量效關(guān)系明顯。壺瓶棗黃酮試液和VC的IC50值分別為0.0072mg/mL和0.051mg/mL,當(dāng)樣品濃度為0.04mg/mL時,羥基自由基的清除率達(dá)到了88.98%。遠(yuǎn)高于同濃度VC的38.63%。

    圖1 壺瓶棗黃酮對羥自由基的清除作用Fig.1 The hydroxyl radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

    3.2 壺瓶棗黃酮對超氧陰離子自由基的清除作用

    壺瓶棗黃酮對超氧陰離子自由基的清除效果見圖2(反應(yīng)4 min時)。

    圖2 壺瓶棗黃酮對超氧陰離子自由基的清除作用Fig.2 The O2-·free radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

    由圖2可知,壺瓶棗黃酮對O2-·有較強的清除能力,當(dāng)樣品濃度為0.02 mg/mL時,羥基自由基的清除率達(dá)到了84.94%。在較低濃度0.002 5 mg/mL~0.03 mg/mL范圍內(nèi),壺瓶棗黃酮對O2-·的清除率從20.05%增加到96.44%。壺瓶棗黃酮試液和VC的IC50分別為0.009 1 mg/mL和0.006 4 mg/mL,壺瓶棗黃酮試液清除能力略小于VC。

    3.3 壺瓶棗黃酮對DPPH·自由基的清除作用

    壺瓶棗黃酮對DPPH·自由基的清除效果見圖3。

    由圖3可知,壺瓶棗黃酮對DPPH·具有很明顯的清除作用,清除率隨著濃度的增加而增大。清除能力與同濃度下的VC相當(dāng)。壺瓶棗黃酮試液和VC的IC50分別為0.001 6 mg/mL和0.001 4 mg/mL。

    4 結(jié)論

    圖3 壺瓶棗黃酮對DPPH·自由基的清除作用Fig.3 The DPPH·free radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

    研究表明,壺瓶棗黃酮對·OH、O2-·和 DPPH·均具有明顯的清除作用,而且對3種自由基的清除率與黃酮提取液的濃度存在明顯的量效關(guān)系。壺瓶棗黃酮提取液對·OH、O2-·和 DPPH·3 種自由基 IC50值分別為0.007 2、0.009 1、0.001 6 mg/mL。對 3 種自由基清除能力總體強弱趨勢是 DPPH·>·OH>O2-·。

    [1]LI J,FAN L,DING S,et al.Nutritional composition of five cultivars of Chinese jujube[J].Food chem,2007,103(2):454-460

    [2]SAN B,YILDIRIM AN.Phenolic,alphatocopherol,beta-carotene and fatty acid composition of four promising jujube (Ziziphus jujuba Miller)selections[J].Journal of food composition and analysis,2010,23(7):706-710

    [3]黃鎖義,覃成箭,余美科,等.益母草黃酮的提取及鑒別[J].時珍國醫(yī)國藥,2005,16(5):398-399

    [4]李紅,郅潔,馬彥梅,等.沙棗黃酮的提取及其抗氧化作用的研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(1):35-36

    [5]李進(jìn)偉,范柳萍,丁霄霖.五種棗提取物抗氧化活性的比較[J].食品工業(yè)科技,2009,30(2):142-144

    [6]蔡仲軍,陳仕江,伊定華,等.不同產(chǎn)地冬蟲夏草清除羥基自由基作用的研究[J].中草藥,2004,35(1):57-59

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    [8]劉小莉,周劍忠,單成俊,等.藍(lán)莓葉總黃酮的微波提取及抗氧化活性研究[J].食品研究與開發(fā),2011,32(3):44-46

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