ICSI胞質回吸程度對卵細胞受精及胚胎發(fā)育的影響

馬 博，張 紅

(1武警廣東公安邊防總隊醫(yī)院，廣東深圳 518000;2廣西醫(yī)科大學)

卵胞質內(nèi)單精子注射技術(ICSI)作為一種有效輔助生殖技術自從出現(xiàn)以來，研究者就不斷嘗試不同的 ICSI注射方式［1～5］，試圖發(fā)現(xiàn)最佳的 ICSI操作方法。2011年3～11月，我們對同源卵母細胞在進行ICSI操作時不同程度地回吸胞質，并對受精及胚胎發(fā)育情況進行了觀察?，F(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 在本院接受輔助生殖治療，采用ICSI作為授精方式，且取卵后成熟卵子數(shù)量≥12個(不含無精子癥患者)的不孕癥患者36例。女方年齡23～38(30.4±3.7)歲，不孕年限為 3 ～12(5.3±3.1)年。36例中，原發(fā)性不孕29例，繼發(fā)性不孕7例。28例為男方因素不孕，3例為不明原因性不孕，5例為前次行體外受精聯(lián)合胚胎移植(IVF)治療后不受精或受精率低。

1.2 ICSI方法 ①采用常規(guī)達菲林長方案，前1個月經(jīng)周期第21天開始降調節(jié)，肌注達菲林1～1.25 mg，月經(jīng)周期第3～5天查血清卵泡生成素(FSH)、黃體生成素(LH)、雌二醇(E2)值，達充分降調節(jié)標準后開始用果納芬促排卵。超聲檢查發(fā)現(xiàn)1個直徑≥18 mm或2個≥16 mm的卵泡的當晚，肌注HCG 1萬U，34～36 h后經(jīng)陰道超聲下引導采卵。采卵后第3天行胚胎移植，剩余優(yōu)質胚胎冷凍。黃體支持為采卵日開始肌注黃體酮60 mg/d。②精子采用密度梯度離心法準備。③取卵后將卵子置于37℃、含5%CO2培養(yǎng)箱中，孵育4～6 h后行ICSI。為減少干擾因素，在行ICSI時將全部卵子的極體固定在12點鐘的位置，在3點鐘位置注射，授精后16～18 h觀察授精情況，以出現(xiàn)雙原核為正常受精，授精后64～66 h行移植前胚胎觀察，記錄胚胎卵裂球數(shù)目、對稱性及碎片情況，以胚胎卵裂球≥6個、大小均勻、胞質碎片 ＜10%的胚胎定為優(yōu)質胚胎［6］。④分組及操作:將獲取的成熟卵子分為約等的3份，分別為A、B、C組。A組:在行ICSI操作時，注射針回吸卵細胞胞質不超過透明帶(如圖1，不超過A點);B組:ICSI操作時，注射針回吸卵細胞胞質超過透明帶，但在距透明帶65 μm(約為卵子半徑)以內(nèi)(如圖1，在A、B點之間);C組:ICSI操作時，注射針回吸卵細胞胞質超過透明帶，且距透明帶的位置大于65 μm(如圖1，超過B點)。授精后3 d內(nèi)連續(xù)觀察卵細胞的受精情況及胚胎發(fā)育情況。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

圖1 ICSI操作中回吸胞質作用點

36例患者共獲得卵子713枚，其中成熟卵子601枚，A、B、C 組分別有199、217、185枚。36 例均未出現(xiàn)受精率低或不受精的情況。三組卵細胞受精情況比較見表1。A、B、C組卵裂率分別為93.29%、92.49%、93.71%，優(yōu)質胚胎率分別為 64.05%、56.25%、59.7%，其中A組優(yōu)質胚胎率明顯高于B、C組(P均 ＜0.05)。

表1 三組卵細胞受精情況比較(%)

3 討論

ICSI對卵母細胞的激活主要來自注射針的機械刺激和注入精子的生物刺激［7］，受精激活是受精的開始，正常受精形態(tài)學上表現(xiàn)為雌雄原核的形成，并釋放出第2極體。單精子注射時回吸胞質是ICSI操作的必須步驟之一，能起到激活卵子的作用［8］。有學者認為劇烈回吸胞質是ICSI成功的關鍵［9］，然而又有研究顯示這種操作會對胞膜完整性及細胞器產(chǎn)生破壞作用［10］。

卵細胞是有極性和結構的生殖細胞，回吸胞質有可能破壞線粒體、微管及紡錘體等細胞器［11］。微管是紡錘體的重要組成部分，如果微管系統(tǒng)受損，可引起染色體不正常分離，產(chǎn)生單倍體或3倍體，從而影響胚胎發(fā)育潛能。若損傷微絲系統(tǒng)，也可引起紡錘體異常，卵細胞染色體可全部分給第2極體，或全部滯留于卵細胞內(nèi)，產(chǎn)生單原核或3原核。紡錘體遭到破壞可能導致卵子死亡或形成非整倍體。故認為輕柔且少量的回吸胞質有利于卵子的受精和胚胎的發(fā)育。基于不同的研究結果，筆者在ICSI操作時不同程度地回吸胞質，并分析成熟卵子的受精率、卵裂率和胚胎質量等參數(shù)，評估不同回吸操作對卵子受精及胚胎發(fā)育的影響。

研究顯示，ICSI后卵細胞的退化率為4.6% ～7.1%［12］。本研究中 ICSI后，C 組卵細胞退化率(8.11%)略高于 A 組(5.53%)及 B 組(6.00%)，C組的未受精率(13.51%)顯著高于A組(6.53%)及B組(6.00%);提示大量回吸胞質會提高卵細胞的未受精率及退化率，這可能與該操作破壞卵細胞的細胞器、分子分布及減數(shù)分裂時紡錘體功能的完整性有關［11］。本研究對ICSI后三組的卵裂率及優(yōu)質胚胎率進行比較后發(fā)現(xiàn)，數(shù)據(jù)無顯著差異，但A組優(yōu)質胚胎率(64.05%)高于其他兩組。上述結果提示，在ICSI時少量回吸胞質，可提高卵細胞的受精率，減少退化率，有利于胚胎發(fā)育。本研究還發(fā)現(xiàn)，ICSI治療后C組單原核的出現(xiàn)率(0)低于A組(4.52%)及B組(6.91%)，推測大量回吸胞質有助于減少卵細胞的異常受精率，其具體機制有待進一步探討。

綜上所述，ICSI操作中不同程度回吸卵細胞胞質對卵細胞的受精均無明顯影響，但大量回吸胞質可導致卵細胞退化率及不受精率增高。

［1］Ebner T，Moser M，Sommergruber M，et al.Complete oocyte actication failure after ICSI can be overcome by a modified injection technique［J］.Hum Reprod，2004，19(8):1837-1841.

［2］Blake M，Garrisi J，Tomkin G，et al.Sperm deposition site during ICSI affects fertilization and development［J］.Fertil Steril，2000，73(1):31-37.

［3］Woodward BJ，Campbell KHS，Ramsewak SS.A comparison of headfirst and tailfirst microinjection of sperm at intracytoplasmic sperm injection［J］.Fertil Steril，2008，89(3):711-714.

［4］Wang WH，Meng L，Hackett RL，et al.Rigorous themal control during intracytoplasmic sperm injection stabilizes the meiotic spindle and improves fertilization and pregnancy rates［J］.Fertil Steril，2002，77(6):1274-1277.

［5］Moon JH，Hyun CS，Les W，et al.Visualization of the metaphaseⅡmeiotic spindle in living human oocytes using the Polscope enables the prediction of embryonic developmental competence after ICSI［J］.Hum Reprod，2003，18(4):817-820.

［6］Ciray HN，Karagenc L，Ulug U，et al.Early cleavage morphology affects the quality and implantation potential of day 3 embryos［J］.Fertil Steril，2006，85(2):358-365.

［7］Westerlaken L，Naaktgeboren N，Verburg H，et al.Conventional in vitro fertilization versus intracytoplasmic sperm injection in patients with borderline semen:a randomized study using sibling oocytes［J］.Fertil Steril，2006，85(2):395-400.

［8］張愛軍，馮云，孫貽娟，等.ICSI時不同單精子注入方式對胚胎體外發(fā)育的影響［J］.生殖與避孕，2006，26(9):538-542.

［9］Ma S，Ho YB.Assessment of maximal fertilization rates with intracytoplasmic sperm injection［J］.Assist Reprod Genet，2000，17(2):80-86.

［10］魯振宇，劉慧娟，張云山.影響ICSI受精因素的探討［J］.天津醫(yī)藥，2006，34(5):351-354.

［11］Kim HH，Bundorf MK，Behr B，et al.Use and outcomes of intracytoplasmic sperm injection for non-male factor infertility［J］.Fertil Steril，2007，88(3):622-628.

［12］Mansour RT，Aboulghar MA，Serour GI，et al.Successful intracytoplasmic sperm injection without performing cytoplasmicaspiration［J］.Fertil Steril，1996，66(2):256-259.