云南白藥酊口服加外用的抗炎作用研究

張立群，閆俊嶺，張信岳，李 欽，陳愛君，汪苾菡，章琳莉

(1.云南白藥集團(tuán)股份有限公司云南白藥研究院，云南昆明 650032;2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，浙江杭州 310013)

云南白藥歷經(jīng)百年錘煉，成為了在傷科止血、活血、愈傷領(lǐng)域有顯著療效的中成藥瑰寶［1］。以云南白藥處方為基礎(chǔ)制成的云南白藥酊，具有活血散瘀，消腫止痛之功效，主要用于跌打損傷、風(fēng)濕麻木、筋骨及關(guān)節(jié)疼痛、肌肉酸痛及凍傷等疾病的治療。本文就云南白藥酊對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎和尿酸鈉致大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的拮抗作用，進(jìn)行單純口服或外用以及口服加外用的實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物與試劑

云南白藥酊，棕褐色液體，由云南白藥集團(tuán)提供，規(guī)格:90mL/瓶，批號:20080205;臨床用法:口服1次3～5mL，每日3次，最大量1次10mL;外用，適量擦揉患處，每日3～5次。阿司匹林 (腸溶片)，上海九褔藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號:20040810;正骨水，廣西玉林制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號:421115;Freund’s完全佐劑，Sigma公司產(chǎn)品，批號:063K8928;尿酸，Sigma公司生產(chǎn)，上?；瘜W(xué)試劑公司分裝廠分裝，批號:080516;巴豆油合劑，配方為巴豆油:無水乙醇:蒸餾水:乙醚=0.2∶2∶0.5∶7.3，臨用新配。

1.2 動(dòng)物

SD大鼠 (清潔級)，雄性，購自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證:SCXK(浙)2003－0001。

2 方法

2.1 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的影響

雄性SD大鼠110只，體重170～200g，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、阿司匹林150 mg/kg陽性對照組、正骨水 (外用)陽性對照組、云南白藥酊 (外用)組、云南白藥酊口服 (灌胃)組0.63，1.25，2.5mL/kg劑量、云南白藥酊口服(灌胃)加外用0.63，1.25，2.5 mL/kg劑量組，每組10只。參考文獻(xiàn) ［2］方法及文獻(xiàn) ［3］方法，除正常對照組外均在左側(cè)足趾皮內(nèi)注射Freund’s完全佐劑50μL致炎，并從致炎前2d開始給藥，灌胃給藥為每天1次，給藥容積均為10mL/kg，外用方法為每天上、下午各1次，每次浸泡四肢踝關(guān)節(jié)以下部位1min，正常對照組及模型對照組均灌胃10mL/kg生理鹽水并用生理鹽水浸泡外用，致炎后第21d各組停藥，再繼續(xù)觀察3d。采用自制測量尺測量致炎足 (原發(fā)性)及對側(cè)足(繼發(fā)性)致炎前、后間隔一定時(shí)間的體積，按下列公式計(jì)算腫脹度;觀察繼發(fā)于大鼠前足紅腫的出現(xiàn)情況，按5級評分法評價(jià)前足紅腫程度 (0分，無紅腫;1分，小趾關(guān)節(jié)紅腫;2分，趾關(guān)節(jié)和足趾腫脹;3分，踝關(guān)節(jié)以下足腫脹;4分，包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)全部足爪腫脹)。

腫脹度=(致炎后周長－致炎前周長)/致炎前周長×100%.

2.2 云南白藥酊對尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)致炎的影響

雄性SD大鼠102只，體重170～200g，隨機(jī)分為對照組、阿司匹林150mg/kg陽性對照組、正骨水 (外用)陽性對照組、云南白藥酊 (外用)對照組、云南白藥酊口服 (灌胃)0.63，1.25，2.5mL/kg劑量組、云南白藥酊口服 (灌胃)加外用0.63，1.25，2.5mL/kg劑量組，每組10只。參考文獻(xiàn) ［4］方法及文獻(xiàn) ［5］方法 ，灌胃給藥容積均為10mL/kg，外用方法為局部涂抹致炎足 (左后肢踝關(guān)節(jié)周圍及以下部位)方法給藥，對照組灌胃10mL/kg生理鹽水并用生理鹽水浸泡外用，間隔30min后再同法給藥1次，2次給藥后立即在大鼠左后肢踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射10%的微晶型尿酸鈉生理鹽水混懸液0.1mL/只致炎，致炎后2h按前述方法再用藥1次，共3次，觀察致炎后2，4，6，24，48h大鼠的步行姿態(tài)，按5級評分法進(jìn)行評分(0分，正常步行;1分，輕度跛行;2分，中度跛行;3分，用腳尖行走;4分，用3只腳行走)，用自制測量尺測定致炎前及致炎后2，4，6，24h致炎足踝周長，同上法計(jì)算腫脹度。

2.3 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的影響

從表1結(jié)果可見，大鼠以Freund’s完全佐劑造模后早期局部炎癥腫脹在3d后達(dá)峰值，然后逐漸消退，12d后致炎足再度腫脹，其后腫脹消退緩慢;云南白藥酊各用藥組用藥后，各時(shí)段致炎足腫脹度均低于模型對照組，其中單純灌胃3劑量組各有部分時(shí)段腫脹度與模型對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，口服 (灌胃)加外用3劑量組多數(shù)時(shí)段腫脹度明顯低于模型對照組 (P＜0.05)，部分時(shí)段如致炎后9d，12d，18d，21d腫脹度甚至明顯低于單純外用組，提示云南白藥酊有抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠原發(fā)病變的作用，而且口服 (灌胃)加外用各組對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的原發(fā)病變的抑制作用優(yōu)于單純外用組。

從表2～3結(jié)果可見，云南白藥酊各用藥組對側(cè)足繼發(fā)腫脹度均低于模型對照組，致炎后18～21d前足紅腫計(jì)分也低于模型對照組，提示云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的繼發(fā)病變有一定的防治作用。

表1 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠致炎側(cè)足趾腫脹度 (原發(fā)病變)的影響 (，n=10)

表1 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠致炎側(cè)足趾腫脹度 (原發(fā)病變)的影響 (，n=10)

注:*與模型對照組比較，P＜0.05;#與云南白藥酊單純外用組比較，P＜0.05。

表2 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠對側(cè)足趾腫脹度 (繼發(fā)病變)的影響 (，n=10)

表2 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠對側(cè)足趾腫脹度 (繼發(fā)病變)的影響 (，n=10)

注:*與模型對照組比較，P＜0.05。

表3 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠前足紅腫評分的影響 (，n=10)

表3 云南白藥酊對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠前足紅腫評分的影響 (，n=10)

注:*與模型對照組比較，P＜0.05。

3.2 云南白藥酊對尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)致痛的影響

從表4結(jié)果可見，云南白藥酊口服以及口服加外用后各時(shí)段足踝腫脹度均低于對照組，多數(shù)時(shí)段與對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P＜0.05)，提示云南白藥酊灌胃有一定的抑制尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)炎腫脹的作用;云南白藥酊單純外用組雖然用藥后多數(shù)時(shí)段足踝腫脹度也低于對照組，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;此外，外用加灌胃各組用藥后多數(shù)時(shí)段足踝腫脹度均低于單純外用組，部分時(shí)段 (如致炎后2h外用加中、低劑灌胃組以及致炎后6，24h外用加高劑量灌胃組)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P＜0.05)，提示外用加灌胃各組作用優(yōu)于單純外用組。

從表5結(jié)果可見，云南白藥酊各用藥組用藥后各時(shí)段步態(tài)計(jì)分均低于同期對照組，且多數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P＜0.05)，提示云南白藥酊無論是單純外用或灌胃對尿酸鈉致關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)疼痛均有較好的抑制作用;同時(shí)，由于外用加灌胃各組用藥后多數(shù)時(shí)段步態(tài)計(jì)分低于單純外用組，部分時(shí)段(如致炎后4，6，24h外用加高劑量灌胃組)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P＜0.05)，提示外用加灌胃各組作用優(yōu)于單純外用組。

表4 云南白藥酊對尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)炎 (足踝)腫脹度的影響 (，n=10)

表4 云南白藥酊對尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)炎 (足踝)腫脹度的影響 (，n=10)

注:*與模型對照組比較，P＜0.05;與云南白藥酊單純外用組比較，P＜0.05。

表5 云南白藥酊對尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)疼痛的影響 (，n=10)

表5 云南白藥酊對尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)疼痛的影響 (，n=10)

注:*與模型對照組比較，P＜0.05;與云南白藥酊單純外用組比較，P＜0.05。

4 討論

云南白藥酊口服或外用能明顯抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠致炎足的原發(fā)性腫脹以及對側(cè)足的繼發(fā)性腫脹，降低紅腫計(jì)分，表明云南白藥酊對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有治療作用，而且口服加外用各組對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的原發(fā)病變的抑制作用優(yōu)于單純外用組。云南白藥酊口服或口服加外用能明顯抑制尿酸鈉致大鼠關(guān)節(jié)炎腫脹，均能明顯降低該模型大鼠步態(tài)計(jì)分，表明云南白藥酊對尿酸鈉致關(guān)節(jié)炎大鼠的關(guān)節(jié)腫脹以及關(guān)節(jié)疼痛均有較好的抑制作用，且口服加外用各組用藥后多數(shù)時(shí)段步態(tài)計(jì)分低于單純外用組。云南白藥酊是一個(gè)既能外用又能口服的中藥制劑，對于跌打損傷、風(fēng)濕麻木、筋骨及關(guān)節(jié)疼痛、肌肉酸痛等疾病有較好的治療作用，口服加外用效果更佳。

［1］高崇昆，劉國忠，張立群，等.云南白藥探秘［M］.昆明:云南科技出版社，2002:12.

［2］李曉紅，趙永娜，李兵蘭，等.滇產(chǎn)粗根蕁麻水提取部分對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF－α的影響［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，30(6):21.

［3］張雯麗，肖金魚.風(fēng)濕痛消丸對佐劑性關(guān)節(jié)炎模型動(dòng)物的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究［J］.中國中醫(yī)急癥，2011，20(1):96.

［4］張荒生，王進(jìn)軍.痛風(fēng)顆粒對尿酸鈉關(guān)節(jié)炎模型大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度、血清LP－PLA2的影響［J］.中國中醫(yī)急癥，2009，18(7):1133.

［5］張春，唐怡，劉軍，等.痛風(fēng)靈方對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠步態(tài)和關(guān)節(jié)周徑變化的影響［J］.中國臨床康復(fù)，2004，8(23):4802 －4804.