濕片法檢測(cè)陰道分泌物霉菌的質(zhì)量探討

張紅 阮小虎 李紅妮

霉菌性陰道炎是臨床上常見(jiàn)的婦科疾病之一，近年來(lái)，隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，霉菌性陰道炎有逐漸增多的趨勢(shì)，已經(jīng)成為婦科門(mén)診的常見(jiàn)病[1]。真菌學(xué)的檢驗(yàn)常有直接鏡檢、真菌培養(yǎng)、組織病理學(xué)檢查等方法。直接鏡檢方法簡(jiǎn)便，可快速為臨床診斷提供依據(jù)，在臨床中使用最為廣泛。

陰道分泌物檢出的霉菌多為白色念珠菌，人類(lèi)致病也多為白色念球菌。提高檢測(cè)質(zhì)量非常關(guān)鍵，日常工作中我們采取了一些措施，現(xiàn)總結(jié)供大家共同探討。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 我院門(mén)診和住院婦產(chǎn)科就診患者10664例。

1.2 儀器及耗材 顯微鏡、無(wú)菌棉簽、一次性塑料試管、載物玻片、無(wú)菌生理鹽水。

1.3 標(biāo)本采集 陰道分泌物標(biāo)本由婦產(chǎn)科醫(yī)生采集。無(wú)菌棉簽于陰道后穹部、宮頸管口等處取材，取材后將取樣棉簽插入約0.5mL鹽水的試管中，保溫立即送檢[2]。

1.4 方法

1.4.1 鹽水法 將送檢的標(biāo)本混勻涂于載物玻片上， 鏡檢。

1.4.2 10%KOH懸滴法 滴加10%KOH懸滴、鏡檢。高倍鏡下見(jiàn)到單個(gè)或成群卵圓形、無(wú)色透明的孢子，常為芽生或鏈狀、分枝狀。即可報(bào)告“檢到霉菌”。本方法簡(jiǎn)便、快速，是目前檢驗(yàn)科常用的方法。

1.4.3 革蘭氏染色法 若取分泌物涂片行革蘭氏染色油鏡檢查，形態(tài)為卵圓形革蘭氏陽(yáng)性孢子或?yàn)檠考?xì)胞的假菌絲，單個(gè)、呈鏈狀或分絲狀，更加準(zhǔn)確。

2 結(jié)果

近幾年檢測(cè)陰道分泌物標(biāo)本10664例，檢出霉菌1421例，占檢測(cè)總數(shù)13.33%，可見(jiàn)霉菌感染率較高，提高霉菌檢測(cè)質(zhì)量尤為重要。

我們對(duì)陰道分泌物霉菌檢測(cè)進(jìn)行了3種方法對(duì)比，結(jié)果如下。

2.1 鹽水濕片法與革蘭氏染色法對(duì)比。取濕片法檢測(cè)霉菌為陽(yáng)性100份標(biāo)本，后行革蘭氏染色鏡檢，其對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果顯示，兩種方法結(jié)果無(wú)顯著差異，濕片法準(zhǔn)確度為100%。

2.2 10%KOH懸滴法與革蘭氏染色法對(duì)比。取10%KOH懸滴法檢測(cè)霉菌為陽(yáng)性100份標(biāo)本，后行革蘭氏染色鏡檢，其對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 濕片法100份陽(yáng)性標(biāo)本后經(jīng)革蘭氏染色法結(jié)果對(duì)比

表2 懸滴法100份陽(yáng)性標(biāo)本后經(jīng)革蘭氏染色法結(jié)果對(duì)比

結(jié)果顯示，兩種方法結(jié)果無(wú)顯著差異，10% KOH懸滴法準(zhǔn)確度為100%。

2.3 進(jìn)行了隨意抽取100份標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行濕片法和滴加10%KOH溶液濕片法比較，其對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 兩種方法的比較

結(jié)果顯示，鹽水濕片法檢出陽(yáng)性率低于其他2種方法，有漏診，滴加10%KOH溶液懸滴法提高了檢出陽(yáng)性率，準(zhǔn)確度為100%。

3 討論

3.1 10664例，霉菌檢出陽(yáng)性率為13.33%。鹽水濕片法與革蘭氏染色法有差異，前者檢出陽(yáng)性率低于后者。滴加10%KOH溶液懸滴法提高了檢出陽(yáng)性率。懸滴法操作簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確。真菌的檢出率與檢出方法有關(guān)。合理取材、規(guī)范操作、熟練技術(shù)提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和陽(yáng)性率。

3.2 為保證陰道分泌物檢測(cè)霉菌的質(zhì)量和提高檢出陽(yáng)性率，本研究采取以下具體的方法和措施。

3.2.1 標(biāo)本采集 （1）陰道標(biāo)本采集前1d禁性交、陰道灌洗、陰道檢查等。

（2）取標(biāo)本部位要得當(dāng)，盡量深部取材，宮頸口處最佳。

（3）使用的棉簽、生理鹽水、一次性試管要求無(wú)菌或未被霉菌污染。接檢標(biāo)本及時(shí)檢驗(yàn)，放置不超過(guò)2h，禁止冰箱冷藏或冷凍保存。

（4）標(biāo)本采集后用生理鹽水稀釋時(shí)，生理鹽水用量控制在0.5mL內(nèi)，以免將標(biāo)本過(guò)度稀釋降低檢出陽(yáng)性率。

3.2.2 標(biāo)本鏡檢 （1）涂片厚薄適中，不要太薄。先低倍鏡檢，觀測(cè)大于50個(gè)視野。初步確定有或無(wú)霉菌均要轉(zhuǎn)高倍鏡檢，觀測(cè)大于50個(gè)視野。報(bào)告以高倍鏡視野為準(zhǔn)。

（2）對(duì)濕片法鏡檢真菌的方法進(jìn)行了改良,即滴加1.79mol/L KOH溶液,提高了陽(yáng)性率。鹽水涂片鏡檢,高倍鏡下初查,如未發(fā)現(xiàn),于載玻片上滴加10%KOH溶液一滴混合,再在高倍鏡下復(fù)查,報(bào)告之。

（3）熟練掌握霉菌在濕片中的形態(tài)特征，并要準(zhǔn)確區(qū)別與紅細(xì)胞、白細(xì)胞的形態(tài)差別。同份標(biāo)本兩位技術(shù)熟練人員同時(shí)檢測(cè)效果更佳[3]。

（4）鹽水涂片鏡檢,高倍鏡下初查,如未發(fā)現(xiàn),于載玻片上滴加10%KOH溶液一滴混合,再在高倍鏡下復(fù)查,報(bào)告之。

（5）霉菌感染時(shí)，陰道清潔度常為Ⅲ～Ⅳ度，故清潔度高時(shí)更應(yīng)重視霉菌檢出率。

[1]姚玲.臭氧在陰道炎治療中的應(yīng)用[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010,16（6）：100.

[2]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社,2 0 0 6：10.

[3]彭丹紅,任幕蘭.外陰陰道假絲酵母菌性陰道病固有免疫機(jī)制研究[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2009，4：287-289.