• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    慢性淋巴細(xì)胞白血病患者外周血p53基因突變觀察

    2012-06-14 09:47:58朱家斌周立濤王曉煒李建勇
    山東醫(yī)藥 2012年34期
    關(guān)鍵詞:南京醫(yī)科大學(xué)基因突變外周血

    朱家斌,周立濤,王曉煒,徐 衛(wèi),于 亮,李建勇

    (1南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院,江蘇淮安223300;2南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院)

    慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)臨床進(jìn)程異質(zhì)性較大,一些患者初診時即有臟器腫大、貧血等癥狀,需立即開始治療;另一些患者在整個疾病過程中無任何癥狀或體征,壽命與同年齡的健康人群類似。因此,對其相關(guān)預(yù)后指標(biāo)的研究顯得極其重要。由于CLL的Binet或Rai 分期不能預(yù)測疾病早期是否進(jìn)展,一些新的預(yù)測指標(biāo)不斷被發(fā)現(xiàn),如淋巴細(xì)胞倍增時間、乳酸脫氫酶、血清 β2-微球蛋白、可溶性CD23、胸苷激酶、分子遺傳學(xué)異常、CD38、ZAP-70、p53基因異常及免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(IgVH)基因突變等[1~4],其中位于 17p的 p53基因的突變與 CLL的病程及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。本研究對CLL患者的p53基因突變情況進(jìn)行了觀察?,F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 收集2004年10月~2012年1月在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院初診的CLL患者80例,男53例,女27例;年齡31~86歲,中位年齡65歲;符合張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》中的CLL診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。Binet分期[3]A 期 54 例,B 期 6 例,C 期 20例。隨機選擇南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院體檢中心各項指標(biāo)檢查均正常的健康體檢者10例作為對照。

    1.2 p53基因檢測方法 取兩組外周血標(biāo)本5 mL,EDTA抗凝,淋巴細(xì)胞分離液分離單個核細(xì)胞(MNC),應(yīng)用DNA提取試劑盒(挪威Dynal公司)提取DNA,置于-20℃保存?zhèn)溆谩53基因有11個外顯子(exon),其中exon 1不編碼。起始密碼子位于exon 2,終止密碼子位于exon 11。針對p53基因exon 2~11用Primer Premier 5引物設(shè)計軟件設(shè)計引物。因exon 2和exon 3之間的內(nèi)含子序列較短,故設(shè)計引物時將上游引物置于exon 2的上游,下游引物置于exon 3的下游,同時擴增exon 2和exon 3,依此類推,exon 5和 exon 6、exon 8和 exon 9亦同時擴增。p53基因11個exon的引物序列及產(chǎn)物長度,由上海英駿生物技術(shù)有限公司設(shè)計合成,見表1。PCR反應(yīng)體系:DNA 25 ng,10 mmol/L的上、下游引物各1 μL,Master Mix(北京天根科技有限公司)12.5 μL,加去離子水至終體積 25 μL。exon 10擴增循環(huán)參數(shù):94℃預(yù)變性7 min,94℃變性30 s,55℃退火45 s,72℃延伸45 s,共35個循環(huán),72℃延伸10 min,4℃保存;其余外顯子退火溫度為60℃,其他循環(huán)參數(shù)相同。從每個反應(yīng)中取5 μL PCR產(chǎn)物加樣于1.5%的含溴化乙錠的瓊脂糖凝膠,在0.5×TBE緩沖液中,90 V電泳30 min;陽性條帶回收、純化,由上海英駿生物技術(shù)有限公司測序,測序結(jié)果與野生型p53基因序列比對(野生型序列見http://p53.iarc.fr/TP53sequenceX54156.html),判斷p53基因突變情況。

    1.3 治療及療效評價方法 本組中25例應(yīng)用FC方案(氟達(dá)拉濱25 mg/m2,環(huán)磷酰胺250 mg/m2,第1~3天靜滴)化療,28d為1個療程,應(yīng)用2~6個療程。療效評價依據(jù)美國國家癌癥研究所(NCI)工作組推薦的標(biāo)準(zhǔn)。完全緩解(CR):癥狀消失,無淋巴結(jié)、肝、脾等臟器腫大,血象正常,包括中性粒細(xì)胞>1.5×109/L、淋巴細(xì)胞 <4 ×109/L、血紅蛋白 >110 g/L、血小板>100×109/L,骨髓涂片淋巴細(xì)胞<30%。上述改善需維持2個月。部分緩解(PR):腫大的淋巴結(jié)、肝、脾縮小≥50%;下列幾項中至少滿足1項:中性粒細(xì)胞 >1.5×109/L,血紅蛋白 >110g/L、血小板>100×109/L,無輸血情況下中性粒細(xì)胞、血紅蛋白、血小板數(shù)較治療前上升50%。上述狀癥改善持續(xù)2個月??偡磻?yīng)率(OR)為CR、PR例數(shù)之和占總例數(shù)的百分比。

    表1 p53基因11個exon的PCR引物序列及產(chǎn)物長度

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較行χ2檢驗及 Fisher's確切概率法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 p53基因突變情況 80例CLL患者中12例(15.0%)檢測到p53基因突變,其中11例為錯義突變、1例為無義突變,未檢測到插入和缺失;突變位點均發(fā)生在exon 5~9,其中發(fā)生在exon 5 2例、exon 6 3例、exon 7 1例、exon 8 5例、exon 9 1例,exon 2~4、exon 10、exon 11未檢測到突變。健康體檢者外周血中均未檢測到p53基因突變。二者p53基因突變率比較,P <0.05。

    2.2 p53基因突變與CLL臨床病理參數(shù)的關(guān)系 p53基因突變與CLL患者外周血白細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白水平和血小板計數(shù)均無關(guān)(P均>0.05),與 Binet分期、p53 基因缺失、IgVH 突變有關(guān)(P均<0.05)。見表2。

    表2 p53基因突變與CLL臨床病理參數(shù)的關(guān)系

    2.3 p53基因突變CLL患者的FC方案化療效果本組80例患者中25例行FC方案化療,結(jié)果CR 5例,PR 11例,OR為64.0%。p53基因突變者(7例),無1例達(dá)CR,PR 1例,OR 為14.3%;p53基因無突變者(18例)CR 5例,PR 10例,OR為83.3%。二者 OR 比較,P <0.05。

    3 討論

    在人類腫瘤中,p53基因的改變是迄今為止發(fā)現(xiàn)的變化頻率最高的一種分子異常,涉及一半以上的腫瘤[5]。p53基因是一種抑癌基因,定位于人類染色體17p13.1,編碼的蛋白質(zhì)為53 kD。野生型p53作為一種轉(zhuǎn)錄因子,可以激活p21基因的轉(zhuǎn)錄及表達(dá),而p21蛋白可抑制人周期素依賴性激酶(CDK)的活性,從而阻斷細(xì)胞周期的進(jìn)程;p53蛋白亦可通過上調(diào)noxa、puma和bax等促凋亡基因,以及下調(diào)bcl-2和mcl-1等抗凋亡基因誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[6]。

    突變的p53蛋白喪失了野生型p53蛋白的功能,同時其表達(dá)水平增高、半衰期延長,與野生型p53蛋白形成異源寡聚體使之失活,導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖及耐藥[7]。已發(fā)現(xiàn),p53基因exon 5~8是突變熱點區(qū)域,不同組織器官腫瘤的p53突變譜有差異,但約有90%的突變集中在此區(qū)域[8]。p53基因突變在CLL并不常見,見于10% ~15%的初治CLL患者[9,10]。本研究中80例 CLL中12例存在 p53突變,突變率為15%,與國外報道類似[9,10]。其中 11例突變位點均位于突變熱點區(qū)域exon 5~8,1例位于exon 9,其他外顯子未檢測到突變。

    研究[11]表明,p53突變與CLL臨床分期關(guān)系密切。Sturm等[10]發(fā)現(xiàn),p53的突變率與患者初診時的年齡、性別、外周血白細(xì)胞計數(shù)等無關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn),p53突變與CLL患者外周血白細(xì)胞計數(shù)、外周血淋巴細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白水平和血小板計數(shù)均無關(guān)(P 均 >0.05),而與 Binet分期有關(guān)(P <0.05),表明p53突變患者往往處于病程晚期,預(yù)后差。

    p53基因缺失與突變存在相關(guān)性,缺失往往伴隨另一條等位基因的突變。Saddler等[12]檢測了106例CLL患者p53基因的缺失和突變情況,15例p53缺失者中12例(80.0%)同時有p53突變,而91例無p53缺失者僅4例(4.4%)伴突變(P<0.05),表明p53基因缺失往往與突變伴隨。一個p53等位基因的缺失導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物mRNA和蛋白水平下降,即單倍不足[13];若另一個等位基因亦發(fā)生突變則產(chǎn)生了突變的p53蛋白,失去了抑制腫瘤增殖的作用;同時,突變的p53蛋白與野生型p53蛋白相結(jié)合,抑制其功能,使得一些癌基因轉(zhuǎn)錄失控導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[7]。本研究結(jié)果顯示,12例突變者中5例伴有p53基因缺失,68例無突變者中僅4例伴有p53基因缺失,表明p53突變和缺失往往同時存在,兩者的共同作用可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

    Zenz等[14]研究發(fā)現(xiàn),p53缺失伴突變、單獨缺失和單獨突變患者的生存期分別為 7.6、5.4、5.5 個月,均明顯短于無p53異常者的69個月。p53突變和缺失均為CLL的獨立預(yù)后因素,無論是p53缺失伴突變、單獨缺失還是單獨突變,患者的預(yù)后都很差。由于本研究中p53異常患者例數(shù)較少,且隨訪時間較短(中位隨訪24個月),目前僅1例死亡,因而未能進(jìn)行生存分析。

    IgVH基因突變被認(rèn)為是CLL最可靠的預(yù)后因素,無突變者預(yù)后較差[15]。已有研究[9]證實,p53突變與IgVH無突變有明顯相關(guān)性,p53突變者往往不伴隨IgVH突變,該類患者生存期短。我們亦發(fā)現(xiàn),p53突變者中IgVH無突變率明顯高于p53無突變者(P <0.05)。

    研究表明,p53突變的CLL患者對化療耐藥,且是有選擇的對烷化劑以及嘌呤類似物耐藥,提示烷化劑和嘌呤類似物通過p53途徑發(fā)揮作用[10]。對于p53突變者,應(yīng)選用其他不涉及p53信號傳導(dǎo)系統(tǒng)的藥物,如大劑量甲強龍[16]、阿侖單抗[17]等。本研究發(fā)現(xiàn),p53突變的CLL患者采用FC方案化療OR明顯低于無突變者。因此,對于p53突變的CLL患者,應(yīng)避免選擇涉及p53信號傳導(dǎo)系統(tǒng)的藥物如環(huán)磷酰胺、氟達(dá)拉濱等。

    [1]Chiorazzi N,Rai KR,F(xiàn)errarini M,et al.Chronic lymphocytic leukemia[J].N Engl J Med,2005,352(2):804-815.

    [2]張之南,沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].3版.北京:科學(xué)出版社,2007:139-144.

    [3]International workshop on chronic lymphocytic leukemia.Chronic lymphocytic leukemia:recommendations for diagnosis,staging,and response criteria[J].Ann Intern Med,1989,110(3):236-238.

    [4]鄭文娟,陳麗娟,吳雨潔,等.應(yīng)用多重PCR技術(shù)檢測慢性淋巴細(xì)胞白血病 IgVH基因突變[J].中國實驗血液學(xué)雜志,2006,14(6):1101-1104.

    [5]Vousden KH,Lu X.Live or let die:the cell's response to p53[J].Nat Rev Cancer,2002,2(8):594-604.

    [6]Chipuk JE,Green DR.Dissecting p53-dependent apoptosis[J].Cell Death Differ,2006,13(6):994-1002.

    [7]De Vries A,F(xiàn)lores ER,Miranda B,et al.Targeted point mutations of p53 lead to dominant-negative inhibition of wild-type p53 function[J].Proc Natl Acad Sci,2002,99(5):2948-2953.

    [8]Walker DR,Bond JP,Tarone RE,et al.Evolutionary conservation and somatic mutation hotspot maps of p53:correlation with p53 protein structural and functional features[J].Oncogene,1999,18(1):211-218.

    [9]Trbusek M,Malcikova J,Smardova J,et al.Inactivation of p53 and deletion of ATM in B-CLL patients in relation to IgVH mutation status and previous treatment[J].Leukemia,2006,20(6):1159-1161.

    [10]Sturm I,Bosanquet AG,Hermann S,et al.Mutation of p53 and consecutive selective drug resistance in B-CLL occurs as a consequence of prior DNA damaging chemotherapy[J].Cell Death Differ,2003,10(4):477-484.

    [11]Wattel E,Preudhomme C,Hecquet B,et al.p53 mutations are associated with resistance to chemotherapy and short survival in hematologic malignancies[J].Blood,1994,84(9):3148-3157.

    [12]Saddler C,Ouillette P,Kujawski L,et al.Comprehensive biomarker and genomic analysis identifies p53 status as the major determinant of response to MDM2 inhibitors in chronic lymphocytic leukemia[J].Blood,2008,111(3):1584-1593.

    [13]Lynch CJ,Milner J.Loss of one p53 allele results in four-fold reduction of p53 mRNA and protein:a basis for p53 haploinsufficiency[J].Oncogene,2006,25(24):3463-3470.

    [14]Zenz T,Krober A,Scherer K,et al.Monoallelic TP53 inactivation is associated with poor prognosis in chronic lymphocytic leukemia:results from a detailed genetic characterization with long-term follow-up[J].Blood,2008,112(8):3322-3329.

    [15]Hamblin TJ,Davis Z,Gardiner A,et al.Unmutated IgVH genes are associated with a more aggressive form of chronic lymphocytic leukemia[J].Blood,1999,94(6):1848-1854.

    [16]Thornton PD,Matutes E,Bosanquet AG,et al.High dose methylprednisolone can induce remissions in CLL patients with p53 abnormalities[J].Ann Hematol,2003,82(12):759-765.

    [17]Lozanski G,Heerema NA,F(xiàn)linn IW,et al.Alemtuzumab is an effective therapy for chronic lymphocytic leukemia with p53 mutations and deletions[J].Blood,2004,103(9):3278-3281.

    猜你喜歡
    南京醫(yī)科大學(xué)基因突變外周血
    大狗,小狗——基因突變解釋體型大小
    英語世界(2023年6期)2023-06-30 06:29:10
    南京醫(yī)科大學(xué)國家級基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗教學(xué)示范中心
    管家基因突變導(dǎo)致面部特異性出生缺陷的原因
    基因突變的“新物種”
    南京醫(yī)科大學(xué)附屬江寧醫(yī)院
    白血病外周血體外診斷技術(shù)及產(chǎn)品
    結(jié)腸炎小鼠外周血和結(jié)腸上皮組織中Gal-9的表達(dá)
    Detection of prostate cancer using magnetic resonance spectroscopy
    磁共振成像(2015年1期)2015-02-21 05:37:01
    慢性蕁麻疹患者外周血IL-17和IL-23的表達(dá)及臨床意義
    加強醫(yī)保管理 建立醫(yī)院控費機制——南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)保管理實踐
    襄樊市| 平泉县| 荔波县| 文安县| 许昌县| 梨树县| 郎溪县| 饶平县| 新巴尔虎右旗| 进贤县| 荆门市| 四会市| 巴楚县| 册亨县| 临洮县| 正安县| 滁州市| 新乡市| 赫章县| 南投县| 柳河县| 崇阳县| 武邑县| 韩城市| 随州市| 呼图壁县| 柏乡县| 湘乡市| 昌邑市| 定州市| 逊克县| 甘肃省| 鱼台县| 武城县| 建阳市| 西贡区| 桑植县| 万年县| 玉门市| 拜泉县| 仪陇县|