大黃水提液防治小鼠癲癇的實(shí)驗(yàn)研究

張文風(fēng)，楊 焱

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130012)

大黃為蓼科植物掌葉大黃(RheumpalmatumL.)、唐古特大黃(RheumtanguticumMaxim.exBalf.)或藥用大黃(RheumofficinaleBaill.)的干燥根及根莖，前兩種習(xí)稱“北大黃”,后一種習(xí)稱“南大黃”[1]。2005版《中國(guó)藥典》一部確定其有瀉熱通腸,涼血解毒，逐瘀通經(jīng)功能。借助《普濟(jì)方》數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)[2]，以大黃為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，發(fā)現(xiàn)大黃復(fù)方用于一切癇32方，由此推測(cè)，大黃單味藥物可能對(duì)癲癇也有一定的治療作用。國(guó)內(nèi)學(xué)者[3-4]研究也提示大黃可減輕腦水腫，預(yù)防腦缺血，臨床應(yīng)用并對(duì)癲癇有防治作用。本研究通過(guò)MES、戊四唑、士的寧驚厥模型對(duì)大黃的抗癲癇作用進(jìn)行初步研究。

1 材料與方法

1.1 藥物 大黃水提液(大黃購(gòu)于吉林大藥房,由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王淑敏教授鑒定。水提液制備方法：大黃100 g，水煎煮3次，第1次10倍量，煎煮2 h；第2次和第3次8倍量,煎煮2 h，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至每毫升含生藥1 g，備用。)

1.2 動(dòng)物 昆明種小鼠，體質(zhì)量20～26 g，雌雄各半(吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào)：SCXK(吉)2003-0007)。

1.3 試劑 戊四唑 (北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限公司)；士的寧注射液(天津市人民制藥廠)；苯妥英鈉片(東北制藥總廠)。

1.4 儀器 YSD-4G藥理生理實(shí)驗(yàn)多用儀(安徽淮北正華生物儀器廠)。

1.5 方法

1.5.1 MES癲癇小鼠 采用YSD-4G藥理生理實(shí)驗(yàn)多用儀，將齒狀?yuàn)A以生理鹽水浸濕后,夾住小鼠雙耳尖部，預(yù)實(shí)驗(yàn)確定95%以上動(dòng)物產(chǎn)生強(qiáng)直性驚厥發(fā)作的參數(shù)為100 V，4 Hz，以后肢強(qiáng)直性伸直為驚厥指標(biāo)，于實(shí)驗(yàn)前1天進(jìn)行篩選。取符合驚厥標(biāo)準(zhǔn)的昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、大黃高、中、低劑量組和苯妥英鈉組。按表1劑量灌胃給藥,模型對(duì)照組給予等溶積的蒸餾水，給藥30 min后，按上述參數(shù)，給予電刺激1次,計(jì)算各組小鼠發(fā)生驚厥的只數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表1。

1.5.2 戊四唑癲癇小鼠 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定95%以上動(dòng)物出現(xiàn)陣發(fā)性抽搐的戊四唑劑量為93 mg/kg。小鼠50只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組，大黃高、中、低劑量組，苯妥英鈉組,按表2劑量灌胃給藥。模型對(duì)照組給予等體積的蒸餾水，給藥后30 min，腹腔注射相應(yīng)致驚劑量戊四唑，觀察藥物抗戊四唑致驚療效，結(jié)果見(jiàn)表2。

1.5.3 士的寧癲癇小鼠 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定95%以上動(dòng)物出現(xiàn)陣發(fā)性抽搐的士的寧劑量為0.7 mg/kg。取健康小鼠50只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組，大黃高、中、低劑量組，苯妥英鈉組,按表3劑量灌胃給藥。模型對(duì)照組給予等體積的蒸餾水，給藥后30 min,皮下注射相應(yīng)致驚劑量士的寧，觀察藥物抗士的寧致驚療效。結(jié)果見(jiàn)表3。

1.5.4 行為觀察 癲癇發(fā)作的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照Racine標(biāo)準(zhǔn)[5]:0級(jí)：無(wú)反應(yīng)；Ⅰ級(jí)：節(jié)律性嘴或面部抽動(dòng)；Ⅱ級(jí)：點(diǎn)頭或甩尾；Ⅲ級(jí)：?jiǎn)沃閯?dòng)；Ⅳ級(jí)：多肢抽動(dòng)或強(qiáng)直；Ⅴ級(jí)：全面性強(qiáng)直——陣攣發(fā)作。連續(xù)觀察30 min，記錄小鼠癲癇發(fā)作潛伏期。

2 結(jié)果

2.1 大黃對(duì)MES所引起癲癇小鼠的影響 見(jiàn)表1。

表1 大黃對(duì)MES所引起小鼠驚厥發(fā)生率的影響

2.2 大黃對(duì)戊四唑癲癇小鼠的影響 見(jiàn)表2。

2.3 大黃對(duì)士的寧癲癇小鼠的影響 見(jiàn)表3。

表2 大黃對(duì)小鼠戊四唑驚厥模型的影響(±s)

表3 大黃對(duì)小鼠士的寧驚厥模型的影響(±s)

3 討論

癲癇是最常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疑難病癥之一，是由于反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)元超同步放電所致的短暫發(fā)作性腦功能失調(diào)。臨床上可見(jiàn)到運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、意識(shí)、行為和植物神經(jīng)等功能障礙。無(wú)論是用其研究癲癇發(fā)病機(jī)制，還是開(kāi)發(fā)抗癲癇藥物以及探索新的治療途徑，都需要理想的癲癇動(dòng)物模型，許多新的進(jìn)展和突破亦多直接或間接來(lái)自動(dòng)物模型的研究結(jié)果。一般認(rèn)為，最大電休克發(fā)作模型是較好的癲癇大發(fā)作模型，若一藥物對(duì)該實(shí)驗(yàn)具有強(qiáng)大對(duì)抗作用，則其臨床上對(duì)癲閑大發(fā)作常有效；戊四唑主要作用于腦干和大腦，是癲癇小發(fā)作常用模型；士的寧模型常被認(rèn)為是頑固性癲癇的良好模型。

現(xiàn)代藥理研究[6]發(fā)現(xiàn),大黃的有效成分主要集中在蒽醌類(lèi)化合物，包括大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚等，具有瀉下、抗炎、抗菌、保肝利膽、降血脂、抗腫瘤、抗免疫抑制等多方面的作用。

本研究選用幾種癲癇模型從不同側(cè)面對(duì)大黃抗癇作用進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)大黃可減少M(fèi)ES發(fā)作次數(shù)，延長(zhǎng)戊四唑、士的寧所致小鼠驚厥的發(fā)作潛伏期、改善癇性發(fā)作程度，并縮短持續(xù)時(shí)間，提示大黃水提液對(duì)癲癇有一定的防治作用，并存在一定的量效關(guān)系，其防治機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。

[1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:17-18.

[2]梁茂新,黃會(huì)生.數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)(計(jì)算機(jī)軟件著作權(quán)登記證書(shū)軟著登字第0002781號(hào))[Z].北京:中華人民共和國(guó)國(guó)家版權(quán)局,1998.

[3]GU Jian-wen,HASUO H,TAKEYA M,et al.Effects of emodin on synaptic transmission in rat hippocampal CA1 pyramidal neurons in vitro[J].Neuropharmacology,2005,49(1): 103-111.

[4]GU Jian-wen,ZHENG Chong-xun,ZHANG Ai-hua,et al.Effects and wavelet spectral entropy analysis of rhubarb extracts rhein on synaptic transmission in rat hippocampal ca1 area in vitro[J].Chinese Medical Journal,2005,118(10):817-823.

[5]RACINE R.Modification of seizure activity by elecyrical stimula-tion:Ⅱ.Motor seizure[J].Electroencephalography and Clinical Neurophysiology,1972(3):281.

[6]李敏,李麗霞,劉渝,等.大黃研究進(jìn)展[J].世界科學(xué)技術(shù)(中醫(yī)藥現(xiàn)代化),2006,8(4):34-39.