高效液相色譜法測定清熱通淋丸中苦參堿和氧化苦參堿含量

楊獻(xiàn)玲，翟宏宇

(吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130033)

清熱通淋丸是由爵床、苦參、白茅根、硼砂4味中藥組成的復(fù)方制劑。具有清熱、利濕、通淋的作用[1-2]。清熱通淋丸現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ05982009,原標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法測定方中苦參堿的含量，未測氧化苦參堿的含量，因此本研究增加了氧化苦參堿含量的測定，并以苦參堿和氧化苦參堿的總和計(jì)算苦參含量品的含測指標(biāo)更為合理[3-5]。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1100高效液相色譜儀，Agilent 1200高效液相色譜儀，MILLI-Q純水處理器，CQX-12型超聲波清洗器?？鄥A對(duì)照品，購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110805-200306，供含量測定用；氧化苦參堿對(duì)照品，購自中國藥品生物制品檢定所；批號(hào)為110780-200506，供含量測定用；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑為分析純。清熱通淋丸為通化博祥藥業(yè)股份有限公司提供。缺苦參的陰性對(duì)照樣品為自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對(duì)照品15 mg、氧化苦參堿對(duì)照品8 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取混合對(duì)照品溶液5 mL,置25 mL量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1 mL，精密加入三氯甲烷50 mL，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理(功率250 W，頻率50 KHz)30 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密吸取續(xù)濾液25 mL,蒸干，殘?jiān)眉状? mL溶解后,加磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)稀釋并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH 3.0)至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱取苦參堿對(duì)照品適量,加流動(dòng)相制成每1 mL含0.314 4 mg的溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9、11 μL測定，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果表明苦參堿進(jìn)樣量在0.314 4～3.458 μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測定的要求。

以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=110 2.1X+15.423，相關(guān)系數(shù)為r=1.000 0。

精密稱取氧化苦參堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1 mL含0.007 4 mg的溶液,分別精密吸取1、3、5、7、9、11 μL測定，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果表明苦參堿進(jìn)樣量在0.007 4～0.081 9 μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測定的要求。

以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=110 6.6X+5.040 2，相關(guān)系數(shù)為r=0.999 2。

2.4 精密度試驗(yàn) 對(duì)同一分供試品溶液(批號(hào)：110401)，按正文擬定的色譜條件，連續(xù)測定6次，結(jié)果其苦參堿RSD為0.13%，氧化苦參堿RSD為2.76%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一供試品溶液照正文方法,在0、2、4、6、8、10、12 h測定苦參堿和氧化苦參堿峰面積值，苦參堿峰面積RSD為0.58%，氧化苦參堿峰面積RSD為6.47%，結(jié)果表明：供試品溶液在12 h內(nèi)，穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)清熱通淋丸(批號(hào):110401)樣品，按正文擬訂的方法獨(dú)立測定6分，結(jié)果氧化苦參堿和苦參堿之和的平均含量為5.308 mg/g(RSD=%,n=6)，表明本法的重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 結(jié)果苦參堿平均回收率為99.01%，RSD=0.46%(n=6)符合定量分析的要求。氧化苦參堿平均回收率為97.91%，RSD=0.40%(n=6)符合定量分析的要求。

3 樣品測定

取4批樣品,按上述方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，按上述色譜條件操作，結(jié)果陰性對(duì)照無干擾。4批樣品測定結(jié)果見表1。

表1 4批樣品測定結(jié)果

4 討論

本研究考察了樣品以堿性三氯甲烷(三氯甲烷+濃氨試液)溶解后超聲，回流,及溶解后靜置過夜再超聲，回流。結(jié)構(gòu)表明靜置過夜后的結(jié)果明顯高于直接超聲，回流，而且過夜后的超聲，回流樣品含量無明顯差異，鑒于超聲的方法更為簡便，故選擇樣品以堿性三氯甲烷(三氯甲烷+濃氨試液)溶解，靜置過夜后超聲作為供試溶液的制備方法。

[1]劉瑩,孟慶妍,翟宏宇.HPLC法同時(shí)測定復(fù)方苦參腸炎康片中苦參堿和氧化苦參堿的含量[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(5):842-843.

[2]宋小莉.苦參主要有效成分作用于肝臟的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].吉林中醫(yī)藥,2010,30(6):526-527.

[3]徐國紅.苦參治療濕疹的藥理作用研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(5):781.

[4]張春麗,孫國英,黃超,等.青柏潔身洗液中苦參堿的含量測定方法比較研究[J].吉林中醫(yī)藥,2009,29(7):619-620.

[5]王琳,張羽,王曉明,等.舒心膠囊的生產(chǎn)工藝研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,24(4):383.