淺談如何有效降低馬鈴薯脫毒苗擴(kuò)繁污染率

王彥紅

（古交市種子管理站，山西 古交 030200）

近年來(lái)，脫毒馬鈴薯在山西省范圍內(nèi)得到廣泛的推廣應(yīng)用。由于馬鈴薯病毒會(huì)導(dǎo)致其產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重下降，擴(kuò)繁馬鈴薯優(yōu)良品種脫毒苗非常重要。在馬鈴薯脫毒苗生產(chǎn)過(guò)程中，各個(gè)環(huán)節(jié)都要嚴(yán)格執(zhí)行技術(shù)規(guī)程，否則極易引起污染，影響馬鈴薯脫毒苗的擴(kuò)繁成活率。

1 馬鈴薯脫毒苗擴(kuò)繁過(guò)程中污染的原因

1.1 細(xì)菌性污染

1.1.1 培養(yǎng)基在植入基礎(chǔ)苗前發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)有細(xì)菌菌斑：有的是培養(yǎng)基高壓滅菌不徹底引起的；有的是培養(yǎng)瓶口處理不干凈，帶有抗逆性很強(qiáng)的雜菌引起的。

1.1.2 在植入基礎(chǔ)苗以后發(fā)現(xiàn)組織周?chē)屑?xì)菌污染：有的是操作工具消毒不到位或是操作不規(guī)范引起的；有的是基礎(chǔ)苗組織自身帶菌引起的；也有的是植入基礎(chǔ)苗操作過(guò)程中交叉感染引起的。

1.2 真菌性污染

1.2.1 在植入基礎(chǔ)苗前，培養(yǎng)基表面發(fā)現(xiàn)真菌污染：大部分是由于存放培養(yǎng)基的環(huán)境中真菌孢子濃度過(guò)大或是培養(yǎng)基瓶口密封不嚴(yán)引起的；如果在培養(yǎng)基內(nèi)部存在大量真菌污染，很有可能是配制培養(yǎng)基的母液已經(jīng)被真菌污染。

1.2.2 在植入基礎(chǔ)苗后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面出現(xiàn)真菌污染，并且污染位置不固定：初期是由于無(wú)菌操作臺(tái)消毒不徹底或是接種室的真菌孢子含量過(guò)高；后期是由于基礎(chǔ)苗本身就攜帶有內(nèi)生菌或是由于培養(yǎng)瓶封口不嚴(yán)。組織培養(yǎng)過(guò)程中，在脫毒苗組織周?chē)l(fā)現(xiàn)真菌污染，是由于基礎(chǔ)苗自身帶有真菌，只是菌源太少，進(jìn)行組織分離操作時(shí)肉眼無(wú)法辨認(rèn)，接苗以后由于條件適宜，真菌繼續(xù)生長(zhǎng)引起真菌污染；如果真菌只是毫無(wú)規(guī)律地分布在培養(yǎng)基中，主要是由于培養(yǎng)基滅菌不到位或操作工具滅菌不徹底引起的。

2 如何有效降低馬鈴薯脫毒苗擴(kuò)繁過(guò)程中的污染率

2.1 外植材料滅菌

在馬鈴薯脫毒苗組培過(guò)程中，一定要重視外植材料表面滅菌這一環(huán)節(jié)，不然就會(huì)影響繼續(xù)的培養(yǎng)工作。為了獲得無(wú)菌材料，對(duì)室外采集來(lái)的培養(yǎng)瓶及操作工具，首先要用自來(lái)水沖洗干凈，然后根據(jù)材料大小選用不同種類(lèi)的藥劑進(jìn)行不同時(shí)間的表面滅菌。

常用的藥劑有75%的乙醇溶液、9%左右的次氯酸鈉溶液等。用乙醇作殺菌劑滅菌時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，約20s即可殺死外植體表面的絕大多數(shù)微生物。次氯酸鈉溶液滅菌處理后易于撤除，不留殘毒，是組培整個(gè)過(guò)程中常用的殺菌劑之一。為了取得十分好的殺菌效果，常采用乙醇和次氯酸鈉復(fù)合消毒技術(shù)。

2.2 培養(yǎng)基滅菌

用加壓濕熱滅菌法進(jìn)行培養(yǎng)基滅菌，要求殺死全部微生物。在滅菌整個(gè)過(guò)程中需注意以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：

2.2.1 當(dāng)滅菌鍋氣壓達(dá)到0.05pa左右時(shí)進(jìn)行一次冷空氣排放。高壓滅菌鍋內(nèi)部冷空氣排放要干凈徹底，不然壓力表上的溫度和壓力指示與鍋內(nèi)物體實(shí)際的溫度、壓力不符，就會(huì)引起滅菌不徹底，引起大面積培養(yǎng)基污染。

2.2.2 滅菌鍋內(nèi)需滅菌的培養(yǎng)基不可以堆放過(guò)滿(mǎn)。否則，將阻礙蒸汽的流通和熱交換，使容器內(nèi)升溫減慢，引起培養(yǎng)基內(nèi)部殺菌不完全。

2.2.3 升溫和降溫速度不可以太快。這樣可以避免滅菌不徹底的情況出現(xiàn)。

2.3 嚴(yán)格執(zhí)行技術(shù)規(guī)程

掌握接種的基本技術(shù)環(huán)節(jié)是組織培養(yǎng)中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，接種整個(gè)過(guò)程中產(chǎn)生的污染往往是不可避免的，我們只能是努力將污染降到最低限度，控制在5%以?xún)?nèi)。除常規(guī)的消毒環(huán)節(jié)外，還需注意以下一些問(wèn)題：

2.3.1 對(duì)基礎(chǔ)苗徹底消毒。對(duì)選用的基礎(chǔ)苗用75%的乙醇溶液進(jìn)行瓶外徹底消毒，并且要仔細(xì)檢查所拿取的基礎(chǔ)苗是否有被污染的，否則將會(huì)引起一瓶帶菌的基礎(chǔ)苗引發(fā)大量的接種組培苗被污染的情況。

2.3.2 接種室保持干凈，達(dá)到無(wú)菌組培室的要求。接種前對(duì)接種室進(jìn)行20～30 min紫外線(xiàn)殺菌，然后用84消毒液在室內(nèi)噴灑，做到降塵，保持接種室清潔無(wú)雜菌。

2.3.3 接種前對(duì)接種用的操作工具用滅菌鍋進(jìn)行徹底滅菌。接種過(guò)程中，要將鑷子、剪刀及用到的操作工具放置于75%的乙醇溶液中進(jìn)行徹底消毒，并且用75%乙醇溶液擦拭雙手，時(shí)刻保持清潔、無(wú)菌。

2.3.4 無(wú)菌操作臺(tái)面用75%的乙醇溶液擦拭。物體堆放不可以過(guò)滿(mǎn)，不然引起氣流不暢通，使操作臺(tái)的空氣得不到凈化，最后引起污染。

2.4 脫毒苗培養(yǎng)

注意脫毒苗的生長(zhǎng)環(huán)境與培養(yǎng)條件，必要時(shí)進(jìn)行調(diào)控，以促進(jìn)脫毒苗有利生長(zhǎng)。

2.4.1 光照：光照對(duì)脫毒苗的生長(zhǎng)起著至關(guān)重要的作用，要求無(wú)菌培養(yǎng)室采光要非常好，平時(shí)要用日光燈進(jìn)行調(diào)節(jié)，最好滿(mǎn)足每天16 h光照。將新接的脫毒苗放置在培養(yǎng)架的下層，有利于新接莖段的萌發(fā)和再繁殖；將培養(yǎng)一周以上的脫毒苗放置在培養(yǎng)架的上層，可使瓶苗的節(jié)間縮短，葉大莖粗，有利于形成壯苗。

2.4.2 溫度：把接好的脫毒苗放到無(wú)菌培養(yǎng)室之后，溫度要控制在25℃左右。一般低于15℃時(shí)會(huì)引起培養(yǎng)組織生長(zhǎng)停滯，而高于30℃對(duì)生長(zhǎng)也不利。

2.4.3 濕度：無(wú)菌培養(yǎng)室中的濕度會(huì)影響培養(yǎng)基的濕度，培養(yǎng)室濕度太低，培養(yǎng)基容易失水、干裂，影響生長(zhǎng)；過(guò)高則易引起培養(yǎng)基底部長(zhǎng)霉，引起污染。一般要求70%～80%的相對(duì)濕度，過(guò)低應(yīng)多灑些水增加濕度，過(guò)高可以通風(fēng)排濕。

2.4.4 消毒：用75%的乙醇溶液每周做一次噴霧降塵，殺死空氣中的真菌孢子，以降低污染率。

3 結(jié)論

綜上所述，擴(kuò)繁馬鈴薯脫毒苗，關(guān)鍵之處在于滅菌要仔細(xì)徹底，操作要嚴(yán)格執(zhí)行規(guī)程，努力降低馬鈴薯脫毒苗的污染率，提高脫毒種薯的種植面積，使其保持優(yōu)良的種性，達(dá)到高產(chǎn)、高效的目的。