C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF在乳腺癌中的表達(dá)及相關(guān)性

張繼運(yùn) 沙新海 于明濤

乳腺癌是1種嚴(yán)重威脅婦女健康的惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是1個(gè)極其復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，是多因素、多基因、多步驟突變的結(jié)果[1]。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)乳腺癌組織中C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF的表達(dá)，探討其與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系，進(jìn)而探討它們之間的相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2010年1月～2011年12月診治的72例乳腺癌標(biāo)本?；颊呔鶠榕?，年齡23～76歲、中位年齡47歲。術(shù)前患者均未做放、化療。72例中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌34例，浸潤(rùn)性小葉癌4例，單純癌17例，髓樣癌8例，硬癌6例，黏液腺癌3例。乳腺癌Ⅰ期20例，Ⅱ期33例，Ⅲ期19例。腫瘤大小≤2 cm 26例，>2 cm 46例。有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。

1.2 方法

所有標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，免疫組化染色均選用福州邁新公司SP試劑盒，免疫組化染色用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，光學(xué)顯微鏡下觀察著色反應(yīng)。

1.3 結(jié)果判定

C-erbB-2蛋白以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)；VEGF、p53蛋白均以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。光學(xué)顯微鏡下觀察：以細(xì)胞膜及細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色或棕色顆粒的細(xì)胞作為陽(yáng)性細(xì)胞，根據(jù)整張切片中陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例定為：100個(gè)高倍視野陽(yáng)性著色細(xì)胞數(shù)<10%為"-"；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%～30%為"+"；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)31% ～50%為"++";陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%為"+++"。Ki-67定位于腫瘤細(xì)胞核，呈棕黃色。根據(jù)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞數(shù)的比例分：不著色為(-)，<10%為(+)，10%～50%為(++)，>50%為(+++)；Ki-67>10%為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將實(shí)驗(yàn)結(jié)果整理后建立數(shù)據(jù)庫(kù)，應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF 在乳腺癌組織中的表達(dá)

C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為47.2%、48.6%、56.9%、65.3%。C-erbB-2表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR有關(guān)；p53表達(dá)與腫塊大小無(wú)關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR有關(guān)；Ki-67、VEGF表達(dá)與腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，但與ER、PR無(wú)關(guān)，見表1。

2.2 C-erbB-2、p53、Ki-67、VEGF、ER及PR之間的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),,ER和PR呈正相關(guān)；C-erbB-2與ER、PR呈負(fù)相關(guān) ；p53與ER和PR呈負(fù)相關(guān)，p53、Ki-67、VEGF之間均呈正相關(guān)，見表2。

表1 C-erbB-2、p53、Ki-67及VEGF 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例)

表2 C-erbB-2、p53、Ki-67、VEGF、ER、PR之間的相關(guān)系數(shù)

注：▲▲為P<0.01 ，▲為P<0.05

3 討論

乳腺癌是危害婦女健康的常見惡性腫瘤之一。在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中諸多因素可以影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。傳統(tǒng)判斷乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)有年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織分類分級(jí)、雌激素受體表達(dá)情況等。將傳統(tǒng)預(yù)測(cè)指標(biāo)與分子生物指標(biāo)相結(jié)合能更好地預(yù)測(cè)乳腺癌患者的生存率[2]。

本研究中ER和PR呈正相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)，C-erbB-2過(guò)度表達(dá)與ER、PR陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示ER、PR和C-erbB-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上存在某些關(guān)聯(lián)[3]。ER在雌激素作用下可抑制C-erbB-2表達(dá),當(dāng)ER表達(dá)下降時(shí)，C-erbB-2表達(dá)增強(qiáng)，C-erbB-2過(guò)度表達(dá)可阻止內(nèi)分泌治療的反應(yīng)。

本研究乳腺癌組織中C-erbB-2的陽(yáng)性表達(dá)率為47.2%，且C-erbB-2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌孕激素受體均有相關(guān)性，說(shuō)明有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或雌、孕激素受體陰性患者C-erbB-2的陽(yáng)性表達(dá)率更高。C-erbB-2被認(rèn)為是與乳腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的原癌基因[4]，參與調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、分化，其產(chǎn)物過(guò)度表達(dá)提示惡性程度高、復(fù)發(fā)率高，具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力，預(yù)后差。

本研究顯示，p53的陽(yáng)性表達(dá)率為48.6%，p53與ER、PR負(fù)相關(guān)。p53基因突變與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。野生型p53是隱性抑癌基因，在細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程中扮演著“分子警察”的角色，對(duì)細(xì)胞基因的完整性起著監(jiān)督作用[5,6]。p53基因在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中表達(dá)更高，是判斷乳腺癌預(yù)后的良好指標(biāo)。Mao等[7]亦證實(shí)p53和ER呈負(fù)相關(guān)。p53能正向激活EGFR的表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞增殖；可增加ER和EGFR/HER-2旁路途徑，抵抗4-羥基三苯氧胺(OHT)細(xì)胞毒性作用[8]，影響內(nèi)分泌治療，但目前仍認(rèn)為其不是1個(gè)獨(dú)立判斷預(yù)后的指標(biāo)。

本研究顯示，Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率為56.9%，Ki-67表達(dá)情況與原發(fā)灶的大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Ki-67與VEGF 呈正相關(guān)。Ki-67抗原是細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白，僅在增殖細(xì)胞核中表達(dá)，被認(rèn)為是較理想的檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，用以指導(dǎo)乳腺癌的治療。Ki-67是1種與細(xì)胞增殖有關(guān)的核抗原，也是目前較常用的核增殖標(biāo)記物[9,10]，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后不良。

本研究顯示，VEGF在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為65.3%，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤體積較大的癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率更高，VEGF是最強(qiáng)的促血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂劑，血管生成對(duì)腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，是腫瘤增殖與發(fā)生轉(zhuǎn)移的主要影響因素。VEGF高表達(dá)增加了瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性[11]，故認(rèn)為VEGF可以作為判斷乳腺癌預(yù)后的指標(biāo)之一。

總之，檢測(cè)CerbB-2、p53、Ki-67、VEGF的突變對(duì)乳腺癌惡性程度、腫瘤的增殖能力以及預(yù)后的判斷均具有重要意義[12]，聯(lián)合雌孕激素受體檢測(cè)有利于更好地評(píng)估乳腺癌的生物學(xué)行為及增殖活性，提高對(duì)乳腺癌患者預(yù)后判斷的準(zhǔn)確性，并對(duì)臨床治療有重要的指導(dǎo)意義。

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