DC/CIK在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用進(jìn)展

叢珊亭 時(shí)圣彬綜述 馬廷行審校

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,其中非小細(xì)胞肺癌占80% 以上， 確診時(shí)多數(shù)患者已屬于中晚期,化療、放療等是治療中晚期非小細(xì)胞肺癌的有效方法，但生存期的改善仍不理想，主要原因?yàn)榫植靠刂评щy和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展與機(jī)體的免疫功能失調(diào)密切相關(guān),免疫系統(tǒng)無(wú)法識(shí)別和清除惡變和突變的細(xì)胞，致使腫瘤細(xì)胞逃逸機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和清除；同樣，由于傳統(tǒng)的放化療對(duì)惡性腫瘤是指數(shù)性殺傷，及時(shí)清除惡性腫瘤綜合治療后的微小殘留病變,最終需要?jiǎng)訂T機(jī)體的免疫功能方可達(dá)到。生物免疫治療對(duì)提升機(jī)體免疫監(jiān)視功能，殺傷體內(nèi)殘余腫瘤細(xì)胞起到重要作用。

1 DC

1.1 DC的生物學(xué)作用

樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC ) 是目前功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞( antigen presenting cell,APC )，在機(jī)體的免疫應(yīng)答中起著重要的調(diào)控作用，是機(jī)體免疫應(yīng)答的主要啟動(dòng)者，為其用于惡性腫瘤的治療開辟了新的道路[2]。DC在外周組織攝取抗原后逐漸成熟，同時(shí)伴隨遷移，通過(guò)淋巴管和(或)血循環(huán)進(jìn)入次級(jí)淋巴器官。遷移至外周淋巴器官T細(xì)胞區(qū)的成熟DC高表達(dá)MHCⅠ類/Ⅱ類分子和共刺激分子(B7、CD40)等，能有效地將加工、處理后的抗原以抗原肽-MHC-Ⅱ類分子復(fù)合物的形式提呈給初始T細(xì)胞，并使之激活[3]。DC所具有的特性，使它們能夠有效地激活T細(xì)胞和調(diào)解腫瘤特異性免疫反應(yīng)[4]。肺癌細(xì)胞裂解物致敏的樹突狀細(xì)胞能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)在肺癌患者中表現(xiàn)出良好的臨床效果[5]。腫瘤抗原致敏的DC與T細(xì)胞共培養(yǎng)，可增加T細(xì)胞的抗腫瘤活性[6]。

1.2 DC的臨床應(yīng)用

文洽先等分離患者外周血單核細(xì)胞,用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子( rhGM2CSF)和白介素24 ( rh IL24)體外誘導(dǎo)DC治療晚期肺癌。7例有可評(píng)價(jià)病灶的患者中,1例部分緩解( PR) 、1例輕微緩解(MR) 、3例穩(wěn)定( SD) 、2例進(jìn)展(PD)[7]。施玲燕等采用靜脈輸注CIK細(xì)胞對(duì)43例腫瘤患者進(jìn)行治療，結(jié)果顯示CIK細(xì)胞治療腫瘤的總有效率為32.6%;治療過(guò)程中的主要不良反應(yīng)是發(fā)熱,占治療總?cè)藬?shù)的20.9%,體溫37.5～38.5 ℃,發(fā)熱在2 h內(nèi)自動(dòng)緩解[8]。

2 CIK

2.1 生物學(xué)作用

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞( cytokine induced killer cell,CIK)是1種高效、新型疫活性細(xì)胞,是惡性腫瘤過(guò)繼免疫治療的重要手段之一。CIK細(xì)胞是1種非MHC限制性的高效溶腫瘤細(xì)胞毒性T細(xì)胞,占外周血淋巴細(xì)胞的1%～5%。CIK細(xì)胞是人外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子刺激后獲得的一群異質(zhì)性細(xì)胞,其主要效應(yīng)細(xì)胞表面既有T細(xì)胞表面標(biāo)志(CD3),也有NK細(xì)胞表面標(biāo)志(CD56),因而兼有T淋巴細(xì)胞抗瘤活性和NK細(xì)胞非MHC 限制性殺瘤的特點(diǎn)[9]。Hongeng等用CIK細(xì)胞對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株進(jìn)行體外殺傷實(shí)驗(yàn),研究結(jié)果表明CIK細(xì)胞對(duì)這些腫瘤細(xì)胞株的溶瘤活性在45.5%～64.5%之間,顯著高于PBL的溶瘤活性( 8% ～12%)[10]。Cancer Biother Radiopharm 報(bào)道了CIK細(xì)胞聯(lián)合多西紫杉醇在體內(nèi)外都可明顯增強(qiáng)多西紫杉醇對(duì)多藥耐藥肺腺癌細(xì)胞的抗腫瘤活性。這表明CIK細(xì)胞將適合消滅對(duì)化療藥物耐藥的腫瘤細(xì)胞。如果CIK細(xì)胞與化療聯(lián)合可應(yīng)用于臨床治療，可能會(huì)抵制惡性細(xì)胞的協(xié)同作用，并可能有利于克服癌癥患者的多藥耐藥[11]。Thorne等的最新研究顯示，CIK細(xì)胞與有溶瘤作用的病毒相結(jié)合能產(chǎn)生強(qiáng)大的協(xié)同抗腫瘤作用，可一定程度上解決靶向生物治療中存在的遞呈及定向等難題[12]。CD4(+)、CD25(+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)已被證明能夠抑制細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。這些結(jié)果表明，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能抑制CIK細(xì)胞的抗腫瘤活性[13]。一項(xiàng)研究表明，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK細(xì)胞)對(duì)人類肺癌細(xì)胞在體內(nèi)外的抗腫瘤活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。雖然外周血CD3(+)、CD56(+)CIK細(xì)胞在新鮮人外周血單核細(xì)胞少見，但在加入IL-2后會(huì)很快擴(kuò)增。在1個(gè)30∶1的效應(yīng)靶細(xì)胞比例中，CIK摧毀了98%的NCI-H460人肺癌細(xì)胞。這項(xiàng)研究表明，外周血CD3(+)、CD56(+)CIK細(xì)胞可作為過(guò)繼免疫治療用于肺癌患者[14]。

2.2 臨床應(yīng)用

CHANG PING WU 等的一項(xiàng)研究評(píng)估了CIK細(xì)胞聯(lián)合化療與單獨(dú)化療的臨床療效。他們將59例晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者隨機(jī)分為A、B組，A組單用化療，多西紫杉醇75 mg/m2d1，順鉑25 mg/m2d1～4，每3周為1個(gè)周期；B組多西紫杉醇75 mg/m2d1，順鉑25 mg/m2d1～4，化療結(jié)束后第5天進(jìn)行CIK細(xì)胞輸注，共回輸5次。A、B組的整體反應(yīng)率(ORR)分別為43.3%和44.8%。疾病控制率(DCR)B組高于A組(89.7% vs 65.5%，P值=0.030)。疾病進(jìn)展時(shí)間分別為4.67個(gè)月(95%CI為3.98～6.02個(gè)月)和6.65個(gè)月(95%CI為4.70～7.30個(gè)月)。中位生存時(shí)間分別為15.0個(gè)月(95%CI為11.04～18.96個(gè)月)和11.0個(gè)月(95%CI為7.88～14.1個(gè)月)，與A組相比，B組的患者有較長(zhǎng)的無(wú)進(jìn)展存活率(P=0.042)和總生存率(P=0.029)。在B組患者中無(wú)嚴(yán)重的不良反應(yīng)的增加[15]。另一項(xiàng)研究將120例非小細(xì)胞肺癌分為3組：支氣管動(dòng)脈灌注；傳統(tǒng)靜脈化療；支氣管動(dòng)脈灌注加CIK細(xì)胞輸注。經(jīng)過(guò)2個(gè)周期的治療后評(píng)價(jià)臨床療效和不良反應(yīng)。聯(lián)合組有效率比傳統(tǒng)靜脈化療組高，并有顯著差異(Chi-square=4.721，P=0.03)。聯(lián)合組的不良反應(yīng)顯著低于傳統(tǒng)靜脈化療組。腫瘤進(jìn)展率支氣管動(dòng)脈灌注組高于聯(lián)合組(Chi-square=4.287，P=0.038)[16]。

3 DC/CIK

3.1 DC/CIK聯(lián)合培養(yǎng)

DC通過(guò)受體的方式攝取外來(lái)抗原，并能與這些抗原表面的MHCⅠ類和Ⅱ類分子結(jié)合，刺激初始型CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞活化。DC除了誘導(dǎo)抗原特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞外，還可通過(guò)直接或間接方式影響B(tài)細(xì)胞的增殖，活化體液免疫應(yīng)答[17]。樹突狀細(xì)胞是主要的抗原提呈細(xì)胞。他們能捕獲和處理腫瘤抗原，表達(dá)淋巴細(xì)胞共刺激分子，分泌細(xì)胞因子等來(lái)啟動(dòng)免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)DC刺激CIK細(xì)胞后，細(xì)胞毒活性顯著增強(qiáng)[18]。DC-CIK聯(lián)合培養(yǎng)與CIK相比抑瘤率顯著增高(62.9% vs 41.5%，P<0.05)[19]。DC和CIK細(xì)胞能夠促進(jìn)化療藥物的抗腫瘤作用。聯(lián)合培養(yǎng)的DC與CIK細(xì)胞能夠產(chǎn)生新的細(xì)胞群，其細(xì)胞毒性和細(xì)胞增殖活性比CIK細(xì)胞高[20]。CIK細(xì)胞和A549細(xì)胞裂解物抗原致敏的DC細(xì)胞共培養(yǎng)后與單獨(dú)的CIK和未致敏的DC-CIK細(xì)胞相比表現(xiàn)出更強(qiáng)的殺傷活力(P<0.05)[21]。因此，將具有高效殺傷活性的CIK細(xì)胞和具有強(qiáng)大腫瘤抗原提呈能力的DC聯(lián)合應(yīng)用治療惡性腫瘤，無(wú)疑會(huì)起到協(xié)同作用。

3.2 臨床應(yīng)用

一項(xiàng)將84例Ⅰ～Ⅲa期的術(shù)后非小細(xì)胞肺癌患者隨機(jī)分為2組，一組單獨(dú)使用化療，另一組給予化療加DC/CIK治療。最終評(píng)價(jià)2組的DFS和OS。2年的總生存DC/CIK組顯著高于單用化療組(94.7±3.6% vs 78.8±7.0%，P<0.05)，2年的DFS沒(méi)有顯著性差異[22]。朱檸等對(duì)12 例確診肺癌經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)治療方案治療的患者,取外周血分離單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),體外誘導(dǎo)出DC和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)。所有患者均接受一定劑量的DC/CIK細(xì)胞過(guò)繼免疫治療，12 例患者中完全緩解1 例,部分緩解 4 例,病情穩(wěn)定 1 例,近期有效率為 41.6%,疾病控制率為50%,病情進(jìn)展共 6 例,其中死亡2 例[23]。周永春等采集70例非小細(xì)胞肺癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，加入細(xì)胞因子定向誘導(dǎo)成CIK及DC細(xì)胞，培養(yǎng)的第5天用自體腫瘤抗原(Ag)負(fù)載DC細(xì)胞，第8天將DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，14天后將聯(lián)合培養(yǎng)的細(xì)胞(Ag-DC-CIK)分次回輸給患者。Ag-DC-CIK治療組中Ⅲ、Ⅳ期患者的有效率分別為52.38%和42.85%,與對(duì)照組的相應(yīng)期別(Ⅲ期44.44%，Ⅳ期35.29%)相比有顯著性差異(P<0.05)[24]。

總之，DC/CIK生物免疫治療作為1種新的治療手段，相對(duì)于手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療而言，具有非細(xì)胞毒性和靶向性。由于缺少大樣本的臨床試驗(yàn)，許多問(wèn)題亟需解決，比如生物免疫治療的毒副作用、應(yīng)用時(shí)機(jī)、給藥途徑和方法等問(wèn)題有待于進(jìn)一步探討。相信隨著臨床試驗(yàn)的不斷深入，這些問(wèn)題將會(huì)被解決。毫無(wú)疑問(wèn)，生物免疫治療與手術(shù)、化療、放療以及靶向藥物有機(jī)結(jié)合，合理安排將會(huì)為腫瘤患者帶來(lái)新的希望。

[1]哈日巴拉，王大鵬，侯斯琴高娃，等.紫杉醇聯(lián)合順鉑同步放療治療局部晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床觀察〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2010,25 (3):305.

[2]徐 林，張維東.樹突狀細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌治療中的研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2009,24(4):427.

[3]龔非力,沈關(guān)心,李卓婭,等.樹突狀細(xì)胞及其他抗原提呈細(xì)胞〔M〕.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)，2009:106～107.

[4]Whiteside TL,Odoux C.Dendritic cell biology and cancer therapy〔J〕.Cancer Immunol Immunother,2004,53(3):240.

[5]Hirschowitz EA,Foody T,Kryscio R,et al.Autologous dendritic cell vaccines for non-small-cell lung cancer〔J〕.J Clin Oncol,2004,22(3):2808.

[6]M?rten A,Greten T,Ziske C，et al.Generation of activated and antigen-specific T cells with cytotoxic activity after co-culture with dendritic cells〔J〕.Cancer Immunol Immunother,2002,51(1):25.

[7]文洽先,朱 婭,許 彬,等.CEA多肽負(fù)載的自體樹突狀細(xì)胞治療晚期肺癌8例近期療效觀察〔J〕.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2010，30(1):168.

[8]施玲燕,劉繼斌,劉曉玲，等.CIK細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究及治療腫瘤的臨床療效觀察〔J〕.腫瘤基礎(chǔ)與臨床,2009，22(2)：141.

[9]孫 燕，石遠(yuǎn)凱.腫瘤免疫治療〔M〕.臨床腫瘤內(nèi)科手冊(cè)，2007:92～93.

[10]Hongeng S,Petvises S,Worapongpaiboon S,et al.Generation of CD-3+CD56+cytokine - induced killer cells and their in vitro cytotoxicity against pediatric cancer cells 〔J〕.Int J Hematol,2003,77 (2):175.

[11]Pengying Liu,Longbang Chen.The antitumor effects of CIK cells combined with docetaxel against drug-resistant lung adenocarcinoma cell line SPC-A1/DTX in vitro and in vivo〔J〕.Cancer Biother Radiopharm,2009,24(1):91.

[12]Thorne SH,Negrin RS,Contag CH.Synergistic antitumor effects of immune cell-viral biotherapy〔J〕.Science,2006,311(5768):1780.

[13]Li H,Yu JP,Cao S,et al.CD4 +CD25 + regulatory T cells decreased the antitumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells of lung cancer patients〔J〕.J Clin Immunol,2007,27(3):317.

[14]Kim HM,Lim J,Park SK,et al.Antitumor activity of cytokine-induced killer cells against human lung cancer〔J〕.Int Immunopharmacol，2007，7(13):1802.

[15]Changping WU,Jingting JIANG,et al.Prospective study of chemothe-rapy in combination with cytokine-induced killer cells in patients suffering from advanced non-small cell lung cancer〔J〕.Anticancer Res，2008，28(6B):3997.

[16]Zhao G,Huang Y,Ye L,et al.Therapeutic efficacy of traditional vein chemotherapy and bronchial arterial infusion combining with CIKs on Ⅲ stage non-small cell lung cancer〔J〕.Zhongguo Fei Ai Za Zhi，2009，12(9):1000.

[17]Zoll B,Lefterova P,Ebert O,et al.Modulation of cell surface markers on NK - like T lymphocytes by using IL - 2,IL - 7 or IL- 12 in vitro stimulation〔J〕.Cytokine,2000,12 (9):1385.

[18]Hackstein H,Thomson AW.Dendritic cells:emerging pharmacological targets of immunosuppressive drugs〔J〕.Nat Rev Immunol，2004，4(1):24.

[19]Yang XJ,Huang JA,Lei W,et al.Antitumor effects of cocultured d-endritic cells and cytokine-induced killer cells on lung cancer in vitro and in vivo〔J〕.Ai Zheng，2006，25(11):1329.

[20]Zhang S,Zhang SQ.The anti-tumor effects of dendritic cells co-cultured with cytokine induced killer cells after chemotherapy〔J〕.Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi，2004，27(5):315.

[21]Zhang S,Wang EZ,Bai CX,et al.The proliferation profile in vitro and anti-tumor effects of dendritic cells co-culturing with CIK cells〔J〕.Shi Yan Sheng Wu Xue Bao，2003，36(5):375.

[22]Li H,Wang C,Yu J,et al.Dendritic cell-activated cytokine-induced killer cells enhance the anti-tumor effect of chemotherapy on non-small cell lung cancer in patients after surgery〔J〕.Cytotherapy，2009，11(8):1076.

[23]朱 檸,陳小東,劉祥麟,等.DCIK 細(xì)胞用于肺癌臨床免疫治療〔J〕.細(xì)胞生物學(xué)雜志,2008,30:251.

[24]周永春,王熙才,谷玉蘭,等.DC疫苗聯(lián)合CIK細(xì)胞治療非小細(xì)胞肺癌療效觀察〔J〕.中國(guó)肺癌雜志，2009,6(12):6.