安絡(luò)化纖丸對大鼠高脂性脂肪肝的治療作用

靖 旭，婁海燕，馮一民，于曉彥，王菊英，張岫美

(山東大學(xué) 醫(yī)學(xué)院 藥理學(xué)研究所，山東 濟(jì)南 250012)

安絡(luò)化纖丸對大鼠高脂性脂肪肝的治療作用

靖 旭，婁海燕，馮一民，于曉彥，王菊英，張岫美

(山東大學(xué) 醫(yī)學(xué)院 藥理學(xué)研究所，山東 濟(jì)南 250012)

目的 探討安絡(luò)化纖丸對大鼠高脂性脂肪肝的治療作用。方法 以連續(xù)飼以高脂飼料(基礎(chǔ)飼料加10%豬油、2%膽固醇、0．5%膽酸鈉、5%蛋黃)1個月的方法建立高脂性大鼠脂肪肝模型，造模成功后給予安絡(luò)化纖丸治療4周，觀察一般情況及測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平，測定肝勻漿TG、丙二醛(MDA)及肝組織超氧化物歧化酶(SOD)水平，并對大鼠肝臟行病理學(xué)檢查。結(jié)果 安絡(luò)化纖丸可明顯降低高脂性脂肪肝大鼠血清ALT、AST、TC和TG水平，降低肝組織TG含量，提高肝組織SOD活性，并降低肝組織MDA水平。安絡(luò)化纖丸可顯著改善高脂性脂肪肝大鼠肝組織的病理損害。結(jié)論安絡(luò)化纖丸對大鼠高脂性脂肪肝有明顯的治療作用，其作用可能與其抗氧化作用有關(guān)。

安絡(luò)化纖丸;高脂性脂肪肝;大鼠

高脂性脂肪肝屬于最常見的一種非酒精性脂肪肝，如果得不到及時的治療，會逐漸發(fā)展為脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化、末期肝衰竭以及肝癌。近年來，高脂性脂肪肝發(fā)病率呈上升趨勢，且日趨年輕化［1］。

目前，治療高脂性脂肪肝的藥物較少。中醫(yī)理論的整體觀念和以調(diào)為本、以平為期的辨證論治，對治療高脂性脂肪肝具有獨(dú)特的優(yōu)勢。安絡(luò)化纖丸主要由地黃、三七、水蛭、牛黃、地龍等組成，具有疏通脈絡(luò)、健脾養(yǎng)肝、涼血活血、軟堅散結(jié)、清除肝內(nèi)淤積的作用，臨床用于治療乙型肝炎和肝硬化，具有降低轉(zhuǎn)氨酶、保肝、抗肝纖維化等作用，具有較好療效［2-4］。本文以連續(xù)飼以高脂飼料制備大鼠脂肪肝模型，觀察安絡(luò)化纖丸的治療作用，為安絡(luò)化纖丸臨床治療高脂性脂肪肝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

安絡(luò)化纖丸(批號:2007-12-001)，森隆藥業(yè)有限公司提供;硫普羅寧(批號:070508)，河南新誼藥業(yè)有限公司生產(chǎn);丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT/GPT)試劑盒(批號:20080423)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST/GOT)試劑盒(批號:20080423)、丙二醛(MDA)試劑盒(批號:20080423)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(批號:20080423)，南京建成生物工程研究所;甘油三酯(TG)試劑盒(批號:2008060008)及總膽固醇(TC)試劑盒(批號:2008060008)，溫州東甌津瑪生物科技有限公司。豬油由購于市場的豬肥肉煉制。

尤尼柯UV2102-PCS紫外分光光度計，尤尼柯(上海)儀器有限公司;TGL-16G型冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠;VARIOSKAN多功能酶標(biāo)儀，美國熱電公司。

Wistar大鼠，雄性，體重180～220 g，山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號:SCXK(魯)2003004。

2 方法

2．1 動物分組與高脂性脂肪肝大鼠模型的制備

Wistar大鼠70只，正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為兩組:高脂性脂肪肝模型組(60只)和正常對照組(10只)。高脂性脂肪肝模型組飼以高脂飼料(基礎(chǔ)飼料加10%豬油、2%膽固醇、0．5%膽酸鈉、5%蛋黃)1個月。正常對照組飼以基礎(chǔ)飼料。自由飲水。

2．2 安絡(luò)化纖丸對大鼠高脂性脂肪肝的治療作用

將高脂性脂肪肝模型制備成功的大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。即①脂肪肝模型組;②安絡(luò)化纖丸高劑量組(2 160 mg/kg);③安絡(luò)化纖中劑量組(1 080 mg/kg);④安絡(luò)化纖丸低劑量組(540 mg/kg);⑤硫普羅寧陽性對照組(108 mg/kg)。各組灌胃給予相應(yīng)藥物，1次/d，連續(xù)4周。

2．3 指標(biāo)測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一晚大鼠禁食不禁水，并稱重。次日以1．5%戊巴比妥鈉溶液2 mL/kg腹腔注射麻醉，下腔靜脈取血5 mL，3 000 r/min離心30 min，取血清，按試劑盒說明測定ALT、AST、TC及TG含量;同時取出肝臟，稱重后按肝重/體重比值計算肝指數(shù)，取肝左葉用10%甲醛溶液固定進(jìn)行病理學(xué)檢查，右葉肝用生理鹽水制備成10%的肝勻漿(冰浴，1 000 r/min，1 min)，3 000 r/min 離心 10 min 后取上清測定TG、MDA及SOD的含量。

3 結(jié)果

3．1 肝組織病理學(xué)改變

正常對照組肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝小葉清晰，中央靜脈位于肝小葉中心，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈單層放射狀排列。肝細(xì)胞胞漿豐富，細(xì)胞核圓形，大小正常，位于細(xì)胞中央，無炎細(xì)胞浸潤。模型組肝細(xì)胞彌漫性中等程度水樣變性，超過1/3的肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見大小不一的脂滴空泡(中度脂肪變性)。肝血竇擴(kuò)張充血。而安絡(luò)化纖丸各劑量組對肝細(xì)胞脂肪變性有不同程度的改善。見圖1。

圖1 肝組織病理學(xué)檢查(HE染色，200×)Fig．1 Liver histopathological examination(HE staining，200 × )

3．2 安絡(luò)化纖丸對高脂性脂肪肝大鼠ALT、AST水平的影響

結(jié)果見表1。與正常組相比，脂肪肝模型組肝指數(shù)及血清ALT及AST水平明顯升高，表明脂肪肝大鼠模型制備成功。與脂肪肝模型組相比，安絡(luò)化纖丸各治療組及硫普羅寧組可明顯降低脂肪肝大鼠肝指數(shù)及血清ALT、AST水平(P＜0．05)。

表1 安絡(luò)化纖丸對高脂性脂肪肝大鼠血清ALT、AST水平的影響(n=10，x±s)Tab．1 The effect of Anluohuaxianwan on the liver index and the serum levels of ALT，AST in high fatty liver(AFL)rats(n=10，x±s)

3．3 安絡(luò)化纖丸對高脂性脂肪肝大鼠血清TC、TG及肝組織TG含量的影響

結(jié)果見表2。與正常組相比，脂肪肝模型組大鼠血清TC、TG，肝組織TG含量均明顯升高。與脂肪肝模型組相比，安絡(luò)化纖丸各治療組及硫普羅寧組可不同程度地降低脂肪肝大鼠血清TG、TC及肝組織TG含量。

3．4 安絡(luò)化纖丸對高脂性脂肪肝大鼠肝組織SOD活性及MDA含量的影響

結(jié)果見表3。與正常組相比，脂肪肝模型組MDA水平明顯升高。安絡(luò)化纖丸高、中、低劑量及硫普羅寧可明顯降低脂肪肝大鼠肝組織MDA含量;與正常組相比，脂肪肝模型組肝勻漿SOD活性明顯降低。與脂肪肝模型組相比，安絡(luò)化纖丸高、中、低劑量及硫普羅寧可增強(qiáng)脂肪肝大鼠肝組織SOD活性。

表2 安絡(luò)化纖丸對脂肪肝大鼠血清TC、TG及肝組織TG含量的影響(n=10，x±s)Tab．2 The effect of Anluohuaxianwan on the content of TC，TG in serum and the content of TG in high fatty liver rats(n=10，x±s)

表3 安絡(luò)化纖丸對高脂性脂肪肝大鼠肝組織SOD及MDA含量的影響(n=10，x±s)Tab．3 The effect of Anluohuaxianwan on the content of MDA and SOD in liver tissues in high fatty liver rats(n=10，x±s)

4 討論

脂肪肝形成主要由于進(jìn)食脂肪過多或各種原因引起脂肪代謝障礙，導(dǎo)致脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)積聚而成。安絡(luò)化纖丸治療乙型肝炎和肝硬化，具有降低轉(zhuǎn)氨酶、保肝、抗肝纖維化等作用，可改善肝臟微循環(huán)，增加血流量，促使肝臟增生纖維結(jié)締組織吸收改善肝細(xì)胞膜的通透性及代謝，從而從根本上恢復(fù)肝細(xì)胞的功能和作用。

本研究證明，在應(yīng)用安絡(luò)化纖丸治療后，高脂性脂肪肝變性情況有明顯改善，血清ALT、AST、TC及TG水平顯著降低，肝組織TG含量下降，且安絡(luò)化纖丸各劑量能有效降低高脂性脂肪肝模型大鼠肝組織的MDA水平，升高SOD活性，從而有效地防止肝組織的脂肪變性。

氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過氧化在高脂性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制中占有十分重要的地位，自由基氧化損傷細(xì)胞中的重要生物分子脂類、蛋白質(zhì)和DNA，形成相應(yīng)的氧化產(chǎn)物，最終導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞的衰老。過量的氧自由基損傷生物膜中的不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，形成脂質(zhì)過氧化物。MDA是自由基與不飽和脂肪酸反應(yīng)主要代謝產(chǎn)物。這個過氧化脂質(zhì)能嚴(yán)重的損傷正常細(xì)胞，所以常被用來反映機(jī)體的自由基代謝的變化和衰老的程度。SOD可清除氧自由基，被視為體內(nèi)主要的抗氧化酶。SOD通過抗氧自由基從而能有效地保護(hù)細(xì)胞免受損傷，對維持自由基代謝平衡起重要作用。SOD活性的高低直接反映機(jī)體抗氧化的能力。同時測定MDA、SOD水平可間接反映細(xì)胞受損傷的程度。本實(shí)驗(yàn)安絡(luò)化纖丸組大鼠肝組織MDA水平明顯低于高脂性脂肪肝模型組，SOD活性明顯高于高脂性脂肪肝模型組，說明安絡(luò)化纖丸可以明顯增強(qiáng)大鼠體內(nèi)抗氧化能力，從而有效清除過多的氧自由基，防止脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的生成，改善肝功能。

［1］ 葛 斌，謝梅林，顧振綸等．表沒食子兒茶素沒食子酸酯對大鼠高脂性脂肪肝的治療作用研究［J］．中國藥理學(xué)通報，2009，25(4):510-514．

［2］ 張岫美，張 斌，魏欣冰，等．安絡(luò)化纖丸對急慢性肝損傷的保護(hù)作用［J］．中國生化藥物雜志，1999，20(1):27-30．

［3］ 魏欣冰，張岫美，張 斌，等．安絡(luò)化纖丸對免疫功能的影響［J］．中國生化藥物雜志，2002，23(3):137-139．

［4］ 相妍笑，婁海燕，王菊英，等．安絡(luò)化纖丸對大鼠酒精性脂肪肝的治療作用．中國生化藥物雜志，2011，32(6):440-443．

Effect of Anluohuaxianwan on hyperlipidemic fatty liver in rats

JING Xu，LOU Hai-yan，F(xiàn)ENG Yi-min，YU Xiao-yan，WANG Ju-ying，ZHANG Xiu-mei
(Department of Pharmacology，School of Medicine，Shandong University，Jinan 250012，China)

Purpose To observe the effects of Anluohuaxianwan on high fat diet-induced fatty liver in rats．Methods Rat fatty liver model was made by continuous feeding with high cholesterol forage for 4 weeks and then the animals were

different doses of Anluohuaxianwan for 4 weeks．General conditions，lanine aminotransferase(ALT)and superoxide dismutase(AST)activity，total cholesterol(TC)and triglyceride(TG)levels in serum were determined．TG and malondialdehyde(MDA)levels and superoxide dismutase(SOD)activity in liver homogenate and pathological changes in liver were also tested．Results Anluohuaxianwan treatment can significantly decrease serum ALT，AST and TC level，decrease the hepatic TG content，increase the hepatic SOD activity，and decrease the hepatic MDA level．The pathological observation results show that Anluohuaxianwan can significantly improve the pathological liver tissue damage of the alcoholic fatty liver．Conclusion Anluohuaxianwan has therapeutic effect on high fatty liver in rats．

Anluohuaxianwan;high fatty liver;rat

R285．5

A

1005-1678(2012)06-0717-04

2012-02-28

山東省科技攻關(guān)計劃(2008GG2NS02014)

靖 旭，女，碩士研究生，主要從事腦血管藥理學(xué)研究，Email:jingxu1990@126．com; 張岫美，男，通信作者，教授，博士生導(dǎo)師，Tel:0531-88383146，E-mail:zhangxm@sdu．edu．cn。