HPLC法測定益腎調(diào)經(jīng)口服液中阿魏酸的含量

張 穎，王偉麗，朱明偉

河南省商丘市食品藥品檢驗所，河南 商丘 476000

益腎調(diào)經(jīng)口服液由當(dāng)歸、紫石英、柴胡、赤芍、白芍、枸杞子、菟絲子等十七味藥組成，具有補腎疏肝、活血化瘀、調(diào)經(jīng)的功效，用于調(diào)節(jié)垂體卵巢垂體功能，促進卵泡發(fā)育。多年的臨床應(yīng)用也證明了其在治療月經(jīng)不調(diào)，無排卵性不孕癥上功效顯著。原質(zhì)量標(biāo)準中尚未收載含量測定項，為提高該藥品質(zhì)量，保證制劑的可控性，本實驗采用高效液相色譜法測定制劑中阿魏酸的含量，旨在為其進一步的研究提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent1220高效液相色譜儀；Agilent1220紫外檢測器，AUW-220D電子天平；阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110773-200611）；益腎調(diào)經(jīng)口服液（商丘市柘城縣人民醫(yī)院制劑科提供， 批號：110317、110426、110521）；乙腈為色譜純，磷酸為化學(xué)純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗[1]

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Agilent-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）， 流動相： 乙腈-0.085%磷酸溶液（14∶86），檢測波長為 316 nm，柱溫為 35℃，流速為 1.0 ml/min，進樣量為10 μl。理論塔板數(shù)按阿魏酸峰面積計不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備

取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成12.38 μg/ml的溶液，即得對照品溶液。搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 供試品溶液的制備[2]

取重量差異項下的供試品適量，混勻，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加70%甲醇70 ml，超聲處理（功率240 W，頻率 45 kHz）30 min，放冷，加 70%甲醇至刻度，搖勻，用 0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

除當(dāng)歸外，其他各藥按益腎調(diào)經(jīng)口服液處方量投料，制備成陰性對照，然后按供試品的處理方法，制成陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

取上述陰性對照溶液、對照品溶液、供試品溶液適量，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果顯示，阿魏酸保留時間為6.97 min，陰性對照溶液在阿魏酸峰處未見明顯峰，表明其對含量測定無干擾。

2.5.1 線性關(guān)系考察 分別吸取對照品溶液（12.38 μg/ml）1.0、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 μl各進樣兩次，記錄峰面積分值。 以對照品質(zhì)量濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線?；貧w方程為Y=63.209X+0.2933，r=0.9999。表明阿魏酸的進樣量在0.0124～0.2477 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

2.5.2 精密度試驗 同一供試品溶液重復(fù)測定6次，測定峰面積，RSD=0.44%。

2.5.3 重復(fù)性試驗 取同一批樣品6份，照“2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定。結(jié)果，平均含量為0.0707 mg/ml，RSD為1.04%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12 h，依法測定，記錄峰面積。 結(jié)果顯示，峰面積 RSD為0.77%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品9份，精密量取3 ml，置100 ml量瓶中，精密加入阿魏酸對照品，依法測定，計算阿魏酸的加樣回收率。見表1。

2.6 樣品含量測定

依法測定 3 批（110317、110426、110521）益腎調(diào)經(jīng)口服液中阿魏酸含量。見表2。

3 討論

由于其他處方中其他成分的存在和影響[3]，筆者設(shè)計了多種因素水平，不同甲醇濃度提取、超聲和回流[4-7]，不同提取時間，結(jié)果用純甲醇提取溶劑，發(fā)現(xiàn)樣品呈絮狀，提取效果較差，阿魏酸含量僅為0.0251 mg/ml，而甲醇濃度越低，提取越不完全。經(jīng)摸索，以70%甲醇提取效果最佳。提取時間就回流和超聲提取來說，30 min時效果最好，隨著回流和超聲時間的延長，樣品中阿魏酸含量并沒有太大變化，考慮到操作的方便性及可操作性，所以采取了超聲提取30 min。綜合以上因素，本實驗最終采用70%甲醇超聲提取30 min的樣品處理方法。

表1 益腎調(diào)經(jīng)口服液中阿魏酸的加樣回收率試驗結(jié)果

表2 3批益腎調(diào)經(jīng)口服液中阿魏酸含量的測定結(jié)果

益腎調(diào)經(jīng)口服液是經(jīng)批準生產(chǎn)的醫(yī)院中藥制劑[8]（豫藥制字Z04140022）處方，在長期的臨床實踐中證明，其治療月經(jīng)不調(diào)及無排卵性不孕癥療效顯著，但是長期以來，只有定性的檢查標(biāo)準，沒有具體的定量控制標(biāo)準。本實驗通過用HPLC法對益腎調(diào)經(jīng)口服液中阿魏酸的含量進行測定，為進一步提高益腎調(diào)經(jīng)口服液制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。

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[8]河南省食品藥品監(jiān)督管理局.河南省醫(yī)療機構(gòu)制劑標(biāo)準[S].豫藥制字:Z04140022,2004.