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    纖維素酶水解玉米秸稈的影響因素研究

    2011-07-25 12:36:10王娜娜楊翔華姚秀清
    化學與生物工程 2011年6期
    關鍵詞:濾紙水解纖維素

    王娜娜,楊翔華,張 全,姚秀清

    (1.遼寧石油化工大學環(huán)境與生物工程學院,遼寧 撫順 113001;2.撫順石油化工研究院,遼寧 撫順 113001)

    目前,由木質纖維素生物轉化為乙醇的研究非?;钴S,已取得許多新的進展[1,2]。木質纖維素的生物轉化一般包括3個過程:原料的預處理、水解和發(fā)酵,其中利用纖維素水解產生可發(fā)酵糖是最關鍵的步驟。酸法水解對設備要求高,副產物對后續(xù)反應有抑制作用[3];而酶法水解具有條件溫和、產品質量高、對環(huán)境友好等優(yōu)點,是纖維素糖化工藝今后的發(fā)展方向[4]。

    作者考察了預處理方式、纖維素酶加量、初始葡萄糖含量等因素對纖維素酶水解玉米秸稈的影響。為優(yōu)化利用玉米秸稈為原料生產燃料乙醇的工藝提供了依據。

    1 實驗

    1.1 材料與儀器

    玉米秸稈、稀酸預處理玉米秸稈、蒸汽爆破預處理玉米秸稈,分別編號為:A、B、C。

    3種纖維素酶分別編號為:1#、2#、3#。

    722S型分光光度計,SB-A型水浴振蕩器;SBA-40型生物傳感分析儀。

    1.2 方法

    將玉米秸稈置于125 mL旋蓋三角瓶中,加入纖維素酶0.2 mL·g-1(以每克底物計,未標明均指1#纖維素酶),調節(jié)pH值至4.8,使玉米秸稈質量分數(shù)為5%~20%,于50 ℃下恒溫振蕩反應,取樣離心,測定水解液中的葡萄糖含量。

    1.3 分析測試

    纖維素含量采用硝酸乙醇法[5]測定。

    葡萄糖含量:采用SBA-40型生物傳感分析儀測定。

    酶解得率按下式計算[6]:

    式中:c葡為水解液中葡萄糖含量;c纖為原料干基中纖維素含量;c原為水解體系的底物濃度,即總固濃度,A、B、C 3種底物分別為13.7%、10.3%和9.5%。

    濾紙酶活:將1 min內水解waterman 1#纖維素酶濾紙產生1 μmol還原糖所需要的酶量定義為1個酶活單位,按照IUPAC(國際理論和應用化學聯(lián)合會)推薦的國際標準方法測定,以FPIU·mL-1表示[7]。

    2 結果與討論

    2.1 原料纖維素含量

    采用硝酸乙醇法測得原料A、原料B和原料C中的纖維素含量分別為36%、78%和45%。

    2.2 纖維素酶濾紙酶活

    測得1#、2#、3#纖維素酶液的濾紙酶活分別為99.8 FPIU·mL-1、94.0 FPIU·mL-1和1.5 FPIU·mL-1。

    2.3 預處理方式對玉米秸稈酶解效果的影響

    采用1#纖維素酶,分別對經不同預處理方式得到的原料A、原料B和原料C進行酶解,50 ℃下恒溫振蕩反應5 d,測定水解液中的葡萄糖含量,并計算酶解得率,結果見表1。

    表1 預處理方式對玉米秸稈酶解效果的影響/%

    由表1可看出,未經過預處理玉米秸稈(原料A)的酶解得率僅6.8%,而經過稀酸預處理(原料B)和經過蒸汽爆破預處理(原料C)的玉米秸稈的酶解得率可達到90%以上??梢?,玉米秸稈在酶解之前需經過預處理才能獲得較高的酶解得率。由表1還可看出,原料中纖維素的含量越高,說明預處理過程中半纖維素水解越徹底,更利于纖維素酶水解,水解液中葡萄糖含量也就越高。

    2.4 纖維素酶對原料C的酶解效果

    以水解液中葡萄糖含量作為酶解效果的評價指標,比較1#、2#纖維素酶對原料C的酶解效果,結果見圖1。

    圖1 1#、2#纖維素酶對原料C的酶解效果比較

    由圖1可以看出,1#和2#纖維素酶對原料C的酶解趨勢一致。酶解時間為5 h時,1#和2#水解液中葡萄糖含量分別為4.45%和4.50%,2#較1#酶解效率高1.1%;酶解時間超過5 h后,由于葡萄糖的反饋抑制作用,酶解速率減慢,并趨于停止。

    比較1#、3#纖維素酶加量對原料C水解液中葡萄糖含量的影響,結果見圖2。

    圖2 1#和3#纖維素酶加量對原料C水解液中葡萄糖含量的影響比較

    由圖2可以看出,要得到2.0%葡萄糖含量,需1#纖維素酶0.31 mL·g-1、3#纖維素酶3.2 mL·g-1,兩者相差約10倍。而1#纖維素酶的濾紙酶活為3#纖維素酶的66.5倍,可見不同纖維素酶對同一種物料進行酶解,要達到相同的纖維素酶解得率,其纖維素酶加量與濾紙酶活不成正比關系。這是由于纖維素酶液的水解能力不僅取決于濾紙酶活,還取決于纖維素酶的酶系組成是否合理,因此需要針對水解物料最大化來優(yōu)化纖維素酶的酶系組成。

    2.5 酶加量和初始葡萄糖含量對玉米秸稈酶解效果的影響

    在反應體系中分別加入1 mL、2 mL和3 mL 1#纖維素酶,以前8 h平均葡萄糖生成速率(GR)作為評價指標,考察1#纖維素酶加量和初始葡萄糖含量對玉米秸稈酶解效果的影響,結果見圖3。

    圖3 酶加量和初始葡萄糖含量對玉米秸稈酶解效果的影響

    由圖3可以看出,在初始葡萄糖含量相同的情況下,酶加量越多,體系中前8 h平均葡萄糖生成速率越大,當初始葡萄糖含量為0%、纖維素酶加量分別為1 mL、2 mL和3 mL時,體系的GR分別為158 mg·h-1、240 mg·h-1和340 mg·h-1,酶加量每增加1 mL,GR平均增加91 mg·h-1;當酶加量相同時,體系中初始葡萄糖含量越大,GR越小??梢娖咸烟菍w維素酶水解具有反饋抑制作用。

    3 結論

    對玉米秸稈酶解的影響因素進行了研究。結果發(fā)現(xiàn),玉米秸稈在酶解之前需要經過預處理才能獲得較高的酶解得率,且纖維素含量越高,越有利于酶解;纖維素酶液的水解能力不僅取決于濾紙酶活,還取決于纖維素酶中酶系組成是否合理;不同纖維素酶對同一種物料進行酶解,達到相同的酶解得率,其纖維素酶加量與酶液的濾紙酶活不成正比關系;纖維素酶加量越多,體系中的平均葡萄糖生成速率(GR)越大;葡萄糖對纖維素酶水解具有反饋抑制作用,隨著初始葡萄糖含量的增大,體系中的GR呈遞減趨勢。為優(yōu)化利用玉米秸稈為原料生產燃料乙醇的工藝提供了依據。

    [1] 孫亞東,蔣建新,孫冉,等.纖維乙醇及滲透汽化原位分離技術研究進展[J].中國能源,2008,30(9):17-24.

    [2] 劉洪斌.燃料乙醇非糧化——我國發(fā)展纖維乙醇的挑戰(zhàn)與對策[J].生物加工過程,2008,6(1):7-11.

    [3] Choteborska P,Palmarola-Adrados B,Galbe M,et al.Processing of wheat bran to sugar solution[J].Journal of Food Engineering,2004,61(4):561-565.

    [4] Rivas B,Moldes A B,Dominguez J M,et al.Lactic acid production from corn cobs by simultaneous saccharification and fermentation:A mathematical interpretation[J].Enzyme and Microbial Technology,2004,34(7):627-634.

    [5] 北京造紙研究所.造紙工業(yè)化學分析[M].北京:輕工業(yè)出版社,1975:109-154.

    [6] 詹小明,夏黎明.纖維素酶在玉米芯上的吸附及其水解作用[J].林產化學與工業(yè),2005,25(3):76-80.

    [7] Ghose T K.Measurement of cellulase activities[J].Pure & Appl Chem,1987,59(2):257-268.

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