萬孚瘧疾快速檢測試劑在蘇丹維和任務區(qū)的應用

薛成軍，張勝利，翟慎軍，陳治水

近年來，我國已派出多批維和部隊在非洲數(shù)個國家和地區(qū)執(zhí)行維和任務。由于非洲一直是瘧疾疫情高發(fā)區(qū)，每年因瘧疾病死人數(shù)近一百萬，因此各任務區(qū)維和部隊在做好預防工作的前提下，及時準確的對瘧疾感染者作出診斷尤為重要。目前，瘧原蟲顯微鏡檢查仍是確診瘧疾的最可靠方法，但其費時，耗力，且需要熟練的專業(yè)技術(shù)人員及一定的實驗室條件，因此具有快速、簡便等特點基于免疫層析技術(shù)的瘧疾快速診斷測試（RDTs）逐漸普及應用?，F(xiàn)利用廣州萬孚瘧疾快速檢測試劑對RDTs在蘇丹瓦烏維和任務區(qū)的應用效果進行評估和探討。

1 材料與方法

1.1 試劑 由廣州萬孚生物技術(shù)有限公司開發(fā)的瘧疾快速檢測試劑盒（膠體金法）。包裝規(guī)格：鋁箔袋單人份包裝測試卡，25 人份/盒。

1.2 一般資料 2009-10～2010-07聯(lián)合國蘇丹維和團第二戰(zhàn)區(qū)（瓦烏）中國二級醫(yī)院門診和當?shù)匾患夅t(yī)院的215例門診發(fā)熱患者（包括各出兵國軍事人員，民事人員和當?shù)毓蛦T等）血液樣本共236份，男193份，女43份；年齡19～54歲。其中個別患者血液樣本采集2～3次。血液樣本皆用EDTAK2抗凝真空管采集保存。

1.3 方法

1.3.1 顯微鏡鏡檢 每份血液樣本制作厚、薄2張涂片，采用快速瑞氏染液進行染色，高倍油鏡下查找瘧原蟲，并進行分類，結(jié)果作為瘧疾診斷的金標準。

1.3.2 萬孚瘧疾快速診斷試劑檢測 每份血液樣本嚴格按照試劑盒說明書進行操作，在規(guī)定時間內(nèi)判斷結(jié)果并記錄。

2 結(jié) 果

2.1 試劑效果 共使用萬孚瘧疾快速檢測試劑進行測試標本246份次，樣本檢測236次，重復試驗10次，其中0次無效。隨機抽取10例瘧疾快速檢測試劑陽性血樣進行重復試驗，符合率100%。

2.2 檢測結(jié)果 共檢測發(fā)熱患者236例次。顯微鏡檢查陽性39例次，陰性197例次；萬孚瘧疾快速檢測試劑檢測陽性37例次，陰性199例次。具體檢測結(jié)果見表1。

2.3 試劑檢測效果 以顯微鏡檢查結(jié)果為標準，萬孚瘧疾快速檢測試劑檢測靈敏度92.3%，特異性99.5%，總有效率98.3%。

3 討 論

瘧原蟲泛乳酸脫氫酶（panLDH）是其有性生殖階段在糖酵解途徑中產(chǎn)生的一種可溶性終端酶，它的產(chǎn)生和積累可以作為瘧原蟲體內(nèi)或體外活動的指標，屬于廣譜瘧原蟲抗原（pan-malaria antigen，PMA）?？筛腥救祟惖乃姆N類型的瘧原蟲都可產(chǎn)生這種酶，但分別是四種不同的乳酸脫氫酶異構(gòu)體。惡性瘧原蟲特異性乳酸脫氫酶（pfLDH）就是其中的一種異構(gòu)體。作為瘧疾快速診斷測試（RDTs）商品試劑的一種，萬孚瘧疾快速檢測試劑則是通過采用雙抗夾心法檢測紅細胞中或釋放與紅細胞外的panLDH和pfLDH來檢測血液中是否存在瘧原蟲。

表1 萬孚試劑和鏡檢結(jié)果（例次）

萬孚瘧疾快速檢測試劑的總體靈敏度92.3%，特異性99.5%，表現(xiàn)出很好的檢測效能，符合文獻報道[1]。其中，萬孚試劑對惡性瘧、非惡性瘧和混合感染的靈敏度分別為91.7%、90%和100%，表現(xiàn)出一定的差異。雖然由于樣本的基礎(chǔ)統(tǒng)計量多少不等，不能完全說明真實狀況，但是其影響其靈敏度的假陰性結(jié)果是確實存在的。當血液中的瘧原蟲密度>200/μl時，RDTs對惡性瘧原蟲診斷的靈敏度通常>90%，如果低于這個密度，RDTs的靈敏度會顯著降低[2，3]。而且由于該統(tǒng)計樣本來源多為聯(lián)合國工作人員，部分長期服用預防量的抗瘧藥物，導致部分陽性血液樣本中的瘧原蟲的密度偏低，影響快速檢測試劑的靈敏度。同時，當?shù)氐母邷貪駸岘h(huán)境也可能對其靈敏度產(chǎn)生影響[4]，因此良好的試劑保存條件也是保證RDTs試劑檢測效能的關(guān)鍵因素之一。雖然非惡性瘧的陽性標本較少，不能完全反映萬孚試劑的靈敏度，但有文獻報道，非惡性瘧相對惡性瘧在RDTs的檢測效能上都表現(xiàn)出較低的靈敏度[5]，可能與其檢測抗原的不同或試劑所含抗體的不同有關(guān)。

由于采用免疫層析技術(shù)，并利用特異性抗體捕獲瘧原蟲抗原，使萬孚瘧疾快速診斷試劑表現(xiàn)出很高的特異性（99.5%）。RDTs的特異性都能保持在較高的水平，多數(shù)保持在95%～100%[1,6]。表1中出現(xiàn)的1例假陽性樣本，影響了該試劑的特異性。經(jīng)詢問病史得知，該患者2周前曾瘧疾發(fā)作，并經(jīng)過治療好轉(zhuǎn)。因此，出現(xiàn)假陽性可能由于患者血液中的游離瘧原蟲特異性乳酸脫氫酶未被完全清除所造成[7]；也可能是患者血液中瘧原蟲未被完全清除，而因藥物的作用表現(xiàn)出很低的密度，并低于顯微鏡檢出底線的緣故。

RDTs由于存在多種影響因素，在可能的情況下，應該對其結(jié)果的準確性做出專業(yè)評估，并進一步實施有效的驗證方法。RDTs的陽性結(jié)果可信度較高，陰性結(jié)果不能排除瘧疾感染的可能。RDTs在血液中的瘧原蟲密度>40 000/μl時可能會因前帶現(xiàn)象而產(chǎn)生假陰性[8]。因此在出現(xiàn)臨床癥狀而RDTs結(jié)果陰性的情況下，可適當稀釋血液樣本進行重新檢測，并盡可能的通過其它檢測方法得到確認診斷，避免對致命性瘧疾發(fā)作患者的治療延誤。

綜上所述，雖然萬孚瘧疾快速檢測試劑在蘇丹瓦烏維和任務區(qū)的現(xiàn)場應用中存在一定的假陽性和假陰性，但仍保持了較好的敏感性和很高的特異性，以及良好的穩(wěn)定性和重復性，可以為顯微鏡檢查提供有用的信息。國內(nèi)外文獻也報道了數(shù)種商品試劑，在現(xiàn)場試驗中檢測效能都表現(xiàn)優(yōu)秀[3,9,10]。再者，由于我國部分維和官兵分散在多個地點長期執(zhí)行任務，而當?shù)厝狈嶒炇覘l件和技術(shù)人員，這給瘧疾及時正確的診斷帶來困難。瘧疾快速診斷試劑因其操作簡便，結(jié)果易于判斷，可用于維和部隊長期在外執(zhí)行任務人員的現(xiàn)場檢測，并結(jié)合臨床癥狀作出初步診斷。

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