• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    嗎啡依賴大鼠不同腦區(qū)肌動(dòng)蛋白及其結(jié)合蛋白的表達(dá)變化

    2011-05-31 08:49:10閆彩珍郝曉玲王天魁
    中國藥理學(xué)通報(bào) 2011年8期
    關(guān)鍵詞:肌動(dòng)蛋白樹突嗎啡

    閆彩珍,于 亮,劉 川,郝曉玲,王天魁

    (河北醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室,河北石家莊 050017)

    阿片類藥物成癮的主要特征表現(xiàn)為強(qiáng)迫性和持續(xù)性藥物使用。目前研究認(rèn)為藥物成癮行為的持久存在,可能與轉(zhuǎn)錄因子短暫調(diào)節(jié)所致的突觸結(jié)構(gòu)及相關(guān)神經(jīng)回路的結(jié)構(gòu)重塑有關(guān)[1]。成癮藥物所致持續(xù)性結(jié)構(gòu)改變的一個(gè)備受關(guān)注的例子是,反復(fù)使用成癮藥物可引起與情感動(dòng)機(jī)、獎(jiǎng)賞和學(xué)習(xí)有關(guān)腦區(qū)神經(jīng)元樹突棘的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生持久改變[2],提示突觸聯(lián)系發(fā)生了可塑性變化。

    樹突棘是神經(jīng)元之間形成興奮性突觸的位置,它們?cè)谏窠?jīng)元中呈現(xiàn)不同的形狀,目前已證實(shí)樹突棘形態(tài)動(dòng)力學(xué)是由肌動(dòng)蛋白動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)的,肌動(dòng)蛋白在棘突形態(tài)形成中發(fā)揮重要作用[3]。肌動(dòng)蛋白是真核細(xì)胞最主要的骨架成份之一,它以單體(G-actin)和纖維狀(F-actin)兩種形式存在,并且單體與纖維狀肌動(dòng)蛋白之間可以相互轉(zhuǎn)換。在神經(jīng)元樹突棘可以觀察到與肌動(dòng)蛋白有關(guān)的運(yùn)動(dòng)性,熒光漂白恢復(fù)技術(shù)分析顯示樹突棘F(xiàn)-actin可以發(fā)生快速的循環(huán)。藥理學(xué)研究顯示,控制肌動(dòng)蛋白循環(huán)可以導(dǎo)致樹突棘發(fā)生形態(tài)學(xué)改變,提示肌動(dòng)蛋白在調(diào)節(jié)神經(jīng)元樹突棘的形態(tài)和動(dòng)力學(xué)中發(fā)揮重要作用[4]。研究顯示,長期嗎啡處理可增加伏隔核F-actin的含量[5],條件性位置厭惡大鼠杏仁核和背側(cè)海馬肌動(dòng)蛋白發(fā)生重構(gòu)[6],但是對(duì)嗎啡依賴不同時(shí)程大鼠不同腦區(qū)肌動(dòng)蛋白的重構(gòu)并不清楚,同時(shí)嗎啡影響細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白表達(dá)及重構(gòu)的分子機(jī)制也尚未闡明。

    本研究擬從影響神經(jīng)元形態(tài)和功能的骨架肌動(dòng)蛋白入手,采用動(dòng)物行為學(xué)、Western blot等方法,研究嗎啡依賴大鼠部分腦區(qū)肌動(dòng)蛋白及其結(jié)合蛋白p-cofilin的表達(dá)變化,探討骨架肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白在嗎啡誘導(dǎo)的神經(jīng)元突觸可塑中的作用,進(jìn)一步深化阿片類藥物成癮的分子生物學(xué)機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1動(dòng)物♂ Sprauge Dawley(SD)大鼠,體質(zhì)量(200±20)g,購自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

    1.1.2藥物及試劑鹽酸嗎啡注射液購自沈陽第一制藥廠;鹽酸納洛酮注射液購自北京華素制藥股份有限公司;Actin抗體購自美國Santa Cruz公司;pcofilin抗體購自美國Cell Signaling公司;BCA蛋白定量試劑盒購自美國PIERCE公司;辣根過氧化酶標(biāo)記的山羊抗小鼠、羊抗兔抗體購自美國KPL公司;DAB顯色試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

    1.1.3主要儀器5417R型低溫離心機(jī),德國Eppendorf公司;超高速離心機(jī),美國 Beckman公司;AG135型電子天平,瑞士Mettler Toledo公司;1004型恒溫水浴箱,德國GFL公司;SHY-200B型水平搖床,德國Leica公司;Millipore純水儀,美國Millipore公司;DYY-11型多用電泳儀、DYC-Z22A型電泳槽,北京六一儀器廠;凝膠成像儀,美國Themo Foma公司。

    1.2 方法

    1.2.1大鼠嗎啡依賴模型建立♂ SD大鼠42只,隨機(jī)分為嗎啡依賴1周組、嗎啡依賴2周組和嗎啡依賴4周組,各依賴組均設(shè)對(duì)照。每組7只大鼠,分籠喂養(yǎng),自由進(jìn)食、飲水,動(dòng)物適應(yīng)新環(huán)境3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用腹腔遞增注射鹽酸嗎啡建立嗎啡依賴模型,連續(xù)注射7 d,每天3次,劑量按5,10,15,20,30,40,50 mg·kg-1逐日遞增,對(duì)照組給予同體積生理鹽水。d 8,在各組大鼠中每組隨機(jī)選取2只,于嗎啡注射前2 h皮下注射鹽酸納洛酮5 mg·kg-1,觀察戒斷癥狀,并進(jìn)行評(píng)分,判斷大鼠嗎啡依賴模型是否建立成功。然后將嗎啡依賴1周組與對(duì)照組大鼠斷頭處死,分離相關(guān)腦區(qū)。嗎啡依賴2周組、4周組繼續(xù)分別給予50 mg·kg-1鹽酸嗎啡,每天1次,連續(xù)注射1或3周。在最后一次給藥后5 h斷頭處死大鼠,迅速分離前額葉皮層、丘腦、海馬及紋狀體,置液氮快速冷凍后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存。

    1.2.2戒斷癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[7]① 跳躍、濕狗樣抖動(dòng)、扭體、搖頭、打哈欠、掃尾:0分=無;1分=1~5次;2分=6~10次;3分 >10次。② 齒顫、咀嚼(次與次之間至少間隔30 s):0分=無;1分=1~10次;2分=11~20次;3分>20次。③ 流涎、流淚、豎毛、眼瞼下垂、激惹和腹瀉:0分=無;1分=輕度;2分=中度;3分=明顯。

    1.2.3腦組織總蛋白的制備腦組織按每100 mg組織加入1 ml的組織蛋白裂解液(50 mmol·L-1Tris-Cl,pH 7.4,150 mmol·L-1NaCl,1 mmol·L-1EGTA,1 mmol·L-1EDTA,1%NP40,1 mmol·L-1DTT,1 mmol·L-1PMSF,1 mg·L-1aprotintin,1 mg·L-1pepstatin A,1 mg·L-1leupeptin),在 DY-89Ⅰ型電動(dòng)勻漿器下勻漿30 s,4℃ 12 000 r·min-1離心20 min,收集上清,其中包含p-cofilin蛋白成分。

    1.2.4蛋白分步提取和Western印跡分析根據(jù)G-actin屬于胞質(zhì)可溶性蛋白,F(xiàn)-actin為細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白,采用不同緩沖液對(duì)這兩種蛋白進(jìn)行分部提取。腦組織按每100 mg組織加入1 ml的組織蛋白裂解液(20 mmol·L-1Tris-Cl,pH 7.5,1 mmol·L-1Na3VO4,1%Triton X-100,5 mmol·L-1EGTA,1 mmol·L-1PMSF,1 mg·L-1aprotintin,1 mg·L-1pepstatin A,1 mg·L-1leupeptin),在 DY-89Ⅰ型電動(dòng)勻漿器下勻漿30 s,冰浴30 min裂解后,4℃12 000 r·min-1離心30 min后取上清,即為G-actin的蛋白組分(含肌動(dòng)蛋白單體G-actin)。沉淀按100 mg加入1 ml裂解液的比例重懸于緩沖液(10 mmol·L-1Tris-Cl,pH 7.5,150 mmol·L-1NaCl,1%Triton X-100,0.1%SDS,1 mmol·L-1脫氧膽酸鈉,2 mmol·L-1EDTA,1 mmol·L-1PMSF,1 mg·L-1aprotintin,1 mg·L-1pepstatin A,1 mg·L-1leupeptin)中冰浴30 min,間斷渦旋混勻,4℃ 12 000 r·min-1離心30 min后取上清,即為F-actin的蛋白組分[8]。BCA法蛋白定量,各取等量 G-actin組分及相應(yīng)體積的F-actin組分,經(jīng)SDS-PAGE電泳分離,電轉(zhuǎn)至PVDF膜上(4 ℃,2h),50 g·L-1脫脂奶粉的TBST封閉1 h,分別加入小鼠β-actin單克隆抗體(1∶500)、兔抗GAPDH多克隆抗體(1∶500),4℃過夜,TBST洗膜3次,每次10 min,然后加入相應(yīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(37℃,1h),DAB顯色。采用凝膠成像分析系統(tǒng)對(duì)Western blot區(qū)帶進(jìn)行定量分析,P-cofilin蛋白的相對(duì)含量用其灰度值與GAPDH的灰度值比值來表示,肌動(dòng)蛋白重構(gòu)用F-actin/G-actin來表示。

    1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 15.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,Origin7.5軟件進(jìn)行圖像處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示,采用單因素方差分析,Dunnett檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。

    2 結(jié)果

    2.1行為學(xué)觀察大鼠在注射納洛酮30 min后,嗎啡處理大鼠出現(xiàn)明顯的濕狗樣顫抖、吞咽、站立、跳躍、齒顫、上瞼下垂、流涎、腹瀉等戒斷癥狀,對(duì)戒斷癥狀進(jìn)行評(píng)分,結(jié)果見Tab 1。與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),說明嗎啡依賴大鼠模型建立成功。

    Tab 1 The withdrawal score in morphine dependent rats of different groups(±s)

    Tab 1 The withdrawal score in morphine dependent rats of different groups(±s)

    **P <0.01 vs control.C:control;M:morphine treatment

    Group Withdrawal score 3.1 ±2.4 M 27.8 ±5.6 C**

    2.2嗎啡依賴大鼠前額葉皮質(zhì)中F-actin/G-actin、p-cofilin蛋白表達(dá)的變化與對(duì)照組相比,嗎啡依賴各組總actin的表達(dá)無變化,嗎啡依賴1周組大鼠前額葉皮質(zhì)內(nèi)F-actin/G-actin的比值沒有變化,嗎啡依賴2周組和4周組大鼠前額葉皮質(zhì)內(nèi)F-actin/G-actin的比值分別上調(diào)53%(P<0.05)和102%(P<0.01)。嗎啡依賴1周組大鼠前額葉皮質(zhì)內(nèi)pcofilin表達(dá)量沒有變化,嗎啡依賴2周組和4周組大鼠前額葉皮質(zhì)內(nèi)p-cofilin表達(dá)量分別上調(diào)93%(P<0.01)和88%(P<0.01)(Fig 1)。

    2.3嗎啡依賴大鼠海馬中F-actin/G-actin、p-cofilin蛋白表達(dá)的變化與對(duì)照組相比,嗎啡依賴1周組和2周組大鼠海馬中F-actin/G-actin的比值沒有變化,嗎啡依賴4周組海馬中F-actin/G-actin比值上調(diào)94%(P<0.01)。嗎啡依賴1周組大鼠海馬中p-cofilin蛋白表達(dá)量沒有變化,嗎啡依賴2周組和4周組大鼠海馬中p-cofilin蛋白表達(dá)量分別上調(diào)45%(P<0.05)和30%(P<0.05)(Fig 2)。

    2.4嗎啡依賴大鼠紋狀體中F-actin/G-actin、pcofilin蛋白表達(dá)的變化與對(duì)照組相比,嗎啡依賴各組大鼠紋狀體內(nèi)F-actin/G-actin比值沒有變化。嗎啡依賴1周組大鼠紋狀體內(nèi)p-cofilin蛋白表達(dá)量沒有變化,嗎啡依賴2周組和4周組的大鼠紋狀體內(nèi)p-cofilin的蛋白表達(dá)量分別下調(diào)25%(P<0.05)和30%(P<0.05)(Fig 3)。

    Fig 1 Expressions of F-actin/G-actin and p-cofilin in prefrontal cortex of morphine dependent rats(±s,n=5)

    Fig 2 Expressions of F-actin/G-actin and p-cofilin in hippocampus of morphine dependent rats(±s,n=5)

    Fig 3 Expressions of F-actin/G-actin and p-cofilin in striatum of morphine dependent rats(±s,n=5)

    2.5嗎啡依賴1、2和4周組大鼠丘腦中均未發(fā)現(xiàn)F-actin/G-actin、p-cofilin蛋白表達(dá)量發(fā)生明顯變化

    3 討論

    嗎啡濫用可造成神經(jīng)系統(tǒng)突觸的可塑性改變,以往的研究表明[9-10],突觸可塑性包括很多環(huán)節(jié),其中樹突棘的形態(tài)學(xué)改變被認(rèn)為是促成各種刺激事件誘導(dǎo)的行為適應(yīng)性改變的重要基礎(chǔ),各種的刺激性事件就包括嗎啡成癮。這樣,嗎啡等精神藥物誘導(dǎo)的動(dòng)物模型所表現(xiàn)出來的行為的可塑性與成癮性被聯(lián)系到樹突蛋白的持續(xù)性適應(yīng)性改變,現(xiàn)在的研究認(rèn)為樹突棘的形態(tài)學(xué)改變與其骨架肌動(dòng)蛋白的重構(gòu)有密切關(guān)系。肌動(dòng)蛋白以單體和多聚體兩種表型存在,單體的肌動(dòng)蛋白是由一條多肽鏈構(gòu)成的球形分子,又稱球狀肌動(dòng)蛋白(G-actin),肌動(dòng)蛋白的多聚體形成肌動(dòng)蛋白絲,稱為纖維狀肌動(dòng)蛋白(F-actin)。肌動(dòng)蛋白作為一種動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu),持續(xù)進(jìn)行組裝和解聚,而體內(nèi)肌動(dòng)蛋白的裝配及在細(xì)胞中的特性受肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白及上游信號(hào)分子的調(diào)節(jié)[3]。

    Cofilin是中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,Cofilin通過切斷F-actin,增加F-actin末端肌動(dòng)蛋白亞單位的解離速度來調(diào)節(jié)其動(dòng)力學(xué)[11]。Cofilin的活性依賴于它的磷酸化狀態(tài),其受各種激酶及RhoGTPases的調(diào)節(jié)。RhoGTPase可通過 PAK、ROCK2/LIMK通路使cofilin磷酸化而降低其活性[12-13]。NMDA 受體激活后可以通過 NMDA/Ca2+/calcineurin/SSH通路使cofilin脫磷酸化而激活[14-15]。除了受磷酸化的調(diào)節(jié)之外,cofilin還與其它肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白發(fā)生相互作用,共同調(diào)節(jié)棘突的穩(wěn)定性[16]。以上的研究提示,cofilin在樹突棘可塑性中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用。然而p-cofilin在嗎啡依賴形成過程中的變化,國內(nèi)外尚無報(bào)道。

    本研究通過建立大鼠嗎啡依賴模型,選擇與嗎啡依賴關(guān)系密切的腦區(qū):海馬、前額葉皮質(zhì)、丘腦以及紋狀體,測(cè)定了嗎啡依賴狀態(tài)下F-actin、G-actin、p-cofilin在上述腦區(qū)的表達(dá)變化。研究結(jié)果顯示,在慢性嗎啡處理2周和4周大鼠的前額葉皮質(zhì)以及嗎啡處理4周的海馬中F-actin/G-actin的比值均出現(xiàn)明顯上調(diào)。F-actin/G-actin比值的變化提示肌動(dòng)蛋白骨架出現(xiàn)了重構(gòu),但是嗎啡依賴不同時(shí)程其變化不同,不同的腦區(qū)其變化亦不相同。

    本研究顯示,肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白p-cofilin在嗎啡處理2周和4周的海馬和額葉皮質(zhì)中均出現(xiàn)了表達(dá)上調(diào),與F-actin的表達(dá)量增加相一致,提示嗎啡誘導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白重構(gòu)可能與cofilin的磷酸化狀態(tài)有關(guān)。但p-cofilin在紋狀體中的表達(dá)卻減少了,提示不同的腦區(qū)可能存在著不同的調(diào)節(jié)機(jī)制。Cofilin的活性可影響神經(jīng)元特異性肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白drebrin與F-actin的結(jié)合,進(jìn)而影響棘突肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)的穩(wěn)定性[16],而drebrin的異??捎绊懲挥|可塑性,導(dǎo)致機(jī)體不同程度的認(rèn)知障礙[17]。行為學(xué)的研究表明cofilin與認(rèn)知功能存在密切聯(lián)系[18],在阿爾采末病病人大腦的額皮質(zhì)和海馬中,發(fā)現(xiàn)異常的cofilin-actin的棒狀結(jié)構(gòu)。由于應(yīng)激誘導(dǎo)的這種棒狀結(jié)構(gòu)在軸突和樹突的形成,能夠?qū)е律窠?jīng)性變性疾?。?9]。在嗎啡成癮過程中均伴有不同程度的認(rèn)知和行為障礙,提示p-cofilin嗎啡依賴誘導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白重構(gòu)過程中可能發(fā)揮重要作用,但其上游信號(hào)調(diào)節(jié)過程還有待于進(jìn)一步研究。

    總之,我們的研究首次證明,大鼠嗎啡依賴時(shí),伴隨著腦組織中肌動(dòng)蛋白水平的變化,提示嗎啡依賴時(shí)大鼠腦組織中肌動(dòng)蛋白發(fā)生了重構(gòu),肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白p-cofilin在嗎啡誘導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白重構(gòu)中可能發(fā)揮重要作用。我們的結(jié)果對(duì)進(jìn)一步闡明嗎啡成癮的細(xì)胞及分子生物學(xué)機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    [1]Grewal S S,F(xiàn)ass D M,Yao H,et al.Calcium and cAMP signals differentially regulate cAMP-responsive element-binding protein function via a Rap1-extracellular signal-regulated kinase pathway[J].J Biol Chem,2000,275(44):34433 -41.

    [2]Robinson T E,Kolb B.Structural plasticity associated with exposure to drugs of abuse[J].Neuropharmacology,2004,47(Suppl 1):33-46.

    [3]Ethell I M,Pasquale E B.Molecular mechanisms of dendritic spine development and remodeling[J].Prog Neurobiol,2005,75(3):161-205.

    [4]Pollard T D,Borisy G G.Cellular motility driven by assembly and disassembly of actin filaments[J].Cell,2003,112(4):453 -65.

    [5]Toda S,Shen H W,Peters J,et al.Cocaine increases actin cycling:effects in the reinstatement model of drug seeking[J].J Neurosci,2006,26(5):1579 -87.

    [6]Hou Y Y,Lu B,Li M,et al.Involvement of actin rearrangements within the amygdala and the dorsal hippocampus in aversive memories of drug withdrawal in acute morphine-dependent rats[J].J Neurosci,2009,29(39):12244 -54.

    [7]Maldonado R,Koob G F.Destruction of the locus coeruleus decreases physical signs of opiate withdrawal[J].Brain Res,1993,605(1):128-38.

    [8]溫進(jìn)坤,史建紅,鄭 斌,等.SM22α對(duì)血管平滑肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白聚合和交聯(lián)的調(diào)節(jié)[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志,2008,24(4):393-6.

    [8]Wen J K,Shi J H,Zhang B,et al.The molecular mechanisms of SM22α in cytoskeleton remodeling of vascular smooth muscle cells[J].Chin Appl Physiol,2008,24(4):393 -6.

    [9]Fukazawa Y,Saitoh Y,Ozawa F,et al.Hippocampal LTP is accompanied by enhanced F-actin content within the dendritic spine that is essential for late LTP maintenancein vivo[J].Neuron,2003,38(3):447 -60.

    [10]Yuste R,Bonhoeffer T.Morphological changes in dendritic spines associated with long-term synaptic plasticity[J].Annu Rev Neurosci,2001,24:1071 -89.

    [11]DesMarais V,Ghosh M,Eddy R,Condeelis J.Confilin takes the lead[J].J Cell Sci,2005,118(pt 1):19 -26.

    [12]Asrar S,Meng Y,Zhou Z,et al.Regulation of hippocampal longterm potentiation by p-21-activated protein kinase1(PAK1)[J].Neuropharmacology,2009,56(1):73 -80.

    [13]Zhou Z,Meng Y,Asrar S,et al.A critical role of Rho-kinase ROCK2 in the regulation of spine and synaptic function[J].Neuropharmacology,2009,56(1):81 -9.

    [14]Carlisle H J,Manzerra P,Marcora E,Kennedy M B.SynGAP regulates steady-state and activity-dependent phosphorylation of cofilin[J].J Neurosci,2008,28(50):13673 -83.

    [15]Wang Y,Shibasaki F,Mizuno K.Calcium signal-induced cofilin dephosphorylation is mediated by Alingshot via calcineurin[J].J Biol Chem,2005,280(13):12683 -9.

    [16]Kojima N,Shirao T.Synaptic dysfunction and disruption of postsynaptic drebrin-actin complex:a study of neurological disorders accompanied by cognitive deficits[J].Neurosci Res,2007,58(1):1-5.

    [17]賈麗潔,羅 艷,張富軍,等.Drebrin對(duì)突觸可塑性的影響以及認(rèn)知功能障礙的研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2010,26(8):989-92.

    [17]Jia L J,Luo Y,Zhang F J,et al.Advance in research of the effects of Drebrin on synaptic plasticity and related cognitive dysfunction[J].Chin Pharmacol Bull,2010,26(8):989 -92.

    [18]Rust M B,Gurniak C B,Renner M,et al.Learning,AMPA receptor mobility and synaptic plasticity depend on n-cofilin-mediated actin dynamics[J].EMBO J,2010,29(11):1889 -902.

    [19]Peterson T S,Camden J M,Wang Y,et al.P2Y2 nucleotide receptor-mediated responses in brain cells[J].Mol Neurobio,2010,41(2-3):356-66.

    猜你喜歡
    肌動(dòng)蛋白樹突嗎啡
    勘誤:
    科學(xué)家揭示大腦連接的真實(shí)結(jié)構(gòu) 解決了樹突棘保存難題
    海外星云(2021年6期)2021-10-14 07:20:40
    褪黑素和嗎啡聯(lián)合使用能提高嗎啡鎮(zhèn)痛效果
    肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能的研究進(jìn)展
    siRNA干預(yù)樹突狀細(xì)胞CD40表達(dá)對(duì)大鼠炎癥性腸病的治療作用
    樹突狀細(xì)胞疫苗抗腫瘤免疫研究進(jìn)展
    肌動(dòng)蛋白清除系統(tǒng)與凝血—纖溶系統(tǒng)在子癇前期患者外周血中的變化
    μ阿片受體在嗎啡鎮(zhèn)痛耐受中的研究進(jìn)展
    徽章樣真皮樹突細(xì)胞錯(cuò)構(gòu)瘤三例
    嗎啡耐受機(jī)制的研究進(jìn)展及其治療方法
    午夜老司机福利剧场| 91精品国产九色| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 一个人看的www免费观看视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产男女内射视频| 国产亚洲精品久久久com| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产精品999| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 色吧在线观看| 久久午夜福利片| 大片免费播放器 马上看| 亚洲av男天堂| 久久精品久久久久久久性| 久久久久网色| 美女内射精品一级片tv| 91精品国产国语对白视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产精品国产三级国产专区5o| 插阴视频在线观看视频| 色视频www国产| 丝瓜视频免费看黄片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av综合色区一区| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 欧美区成人在线视频| 网址你懂的国产日韩在线| 在线播放无遮挡| 不卡视频在线观看欧美| 成人亚洲精品一区在线观看 | 伦理电影大哥的女人| 成人免费观看视频高清| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲中文av在线| 亚洲色图av天堂| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日韩av不卡免费在线播放| 美女主播在线视频| 高清日韩中文字幕在线| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产精品熟女久久久久浪| 精品人妻熟女av久视频| 欧美成人午夜免费资源| 久久亚洲国产成人精品v| 在线观看av片永久免费下载| 黄片wwwwww| 欧美精品国产亚洲| 国产免费视频播放在线视频| 一级av片app| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 欧美精品一区二区免费开放| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲av.av天堂| 精品久久久久久久久亚洲| av在线观看视频网站免费| 久久热精品热| 人妻夜夜爽99麻豆av| 熟女电影av网| 免费av不卡在线播放| 黄色配什么色好看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲国产精品999| 亚洲国产精品999| 色5月婷婷丁香| 熟女av电影| 久久久精品免费免费高清| 中文字幕久久专区| 精品亚洲成国产av| 中文资源天堂在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 中文资源天堂在线| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品一区二区性色av| 亚洲av欧美aⅴ国产| 我的老师免费观看完整版| 午夜福利网站1000一区二区三区| 永久网站在线| 全区人妻精品视频| av福利片在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 少妇人妻久久综合中文| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产一级毛片在线| 波野结衣二区三区在线| 国产亚洲91精品色在线| 精品人妻熟女av久视频| 色5月婷婷丁香| 日韩中字成人| 嫩草影院入口| 国产成人a区在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 黑人猛操日本美女一级片| 免费黄色在线免费观看| 在线播放无遮挡| 中文欧美无线码| 久久久久久久精品精品| 日日啪夜夜爽| 中文天堂在线官网| 激情五月婷婷亚洲| 久热久热在线精品观看| av福利片在线观看| 九色成人免费人妻av| 国产片特级美女逼逼视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 制服丝袜香蕉在线| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产在线免费精品| 大码成人一级视频| 韩国高清视频一区二区三区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美成人a在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品一区二区性色av| 一边亲一边摸免费视频| 欧美丝袜亚洲另类| 国产精品.久久久| 欧美日韩在线观看h| 国产综合精华液| 国产精品伦人一区二区| 内射极品少妇av片p| 久久精品国产自在天天线| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲国产精品国产精品| 午夜福利网站1000一区二区三区| 在线观看国产h片| 妹子高潮喷水视频| 欧美区成人在线视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 中文字幕久久专区| 国产 一区精品| 久久6这里有精品| 亚洲图色成人| 边亲边吃奶的免费视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久99热6这里只有精品| 十八禁网站网址无遮挡 | 在线观看免费高清a一片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 波野结衣二区三区在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲,欧美,日韩| 日本午夜av视频| 国产成人a∨麻豆精品| 少妇精品久久久久久久| 天天躁日日操中文字幕| 久久这里有精品视频免费| 久久99精品国语久久久| 一级毛片我不卡| 国产91av在线免费观看| 国产av码专区亚洲av| 97在线视频观看| 美女高潮的动态| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日韩av免费高清视频| 国产乱来视频区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 我的女老师完整版在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 成人免费观看视频高清| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产精品99久久久久久久久| 亚洲怡红院男人天堂| 久久久色成人| 亚洲经典国产精华液单| 国产男人的电影天堂91| 晚上一个人看的免费电影| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 男女无遮挡免费网站观看| 男人舔奶头视频| 国产高清有码在线观看视频| 黄色欧美视频在线观看| 国产 一区精品| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av不卡在线播放| 亚洲欧美成人精品一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日本黄色日本黄色录像| 亚州av有码| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久久久久久久成人| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 婷婷色av中文字幕| 日本-黄色视频高清免费观看| 精品一区在线观看国产| av黄色大香蕉| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产成人精品一,二区| 中文字幕av成人在线电影| 综合色丁香网| 青春草视频在线免费观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 91精品国产国语对白视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 日韩欧美精品免费久久| 91狼人影院| 最近最新中文字幕免费大全7| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 看十八女毛片水多多多| 国产精品人妻久久久影院| 97精品久久久久久久久久精品| 国产一区二区三区综合在线观看 | 午夜免费观看性视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 夫妻午夜视频| 十分钟在线观看高清视频www | 五月天丁香电影| 国产黄色视频一区二区在线观看| 一级爰片在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 中文天堂在线官网| 国产av码专区亚洲av| 国产精品av视频在线免费观看| 国国产精品蜜臀av免费| 97热精品久久久久久| 免费看日本二区| a级一级毛片免费在线观看| 免费观看在线日韩| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲精品日本国产第一区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 欧美日韩在线观看h| 亚洲欧美清纯卡通| 免费大片黄手机在线观看| 国产亚洲91精品色在线| av线在线观看网站| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 免费观看无遮挡的男女| 18+在线观看网站| 日本wwww免费看| 国产精品一区www在线观看| 成人免费观看视频高清| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 在线观看一区二区三区激情| 精品一区二区免费观看| 欧美3d第一页| 两个人的视频大全免费| 午夜老司机福利剧场| 高清视频免费观看一区二区| 多毛熟女@视频| 又爽又黄a免费视频| 在线观看免费日韩欧美大片 | 大片免费播放器 马上看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲国产精品专区欧美| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 性色avwww在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 国产男女内射视频| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲国产精品专区欧美| 丝瓜视频免费看黄片| 久久99蜜桃精品久久| 一本一本综合久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 大片免费播放器 马上看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚州av有码| 久久久久久久国产电影| 国产精品国产三级专区第一集| 日韩亚洲欧美综合| 高清午夜精品一区二区三区| av卡一久久| 中文资源天堂在线| 国产男女内射视频| 国产成人精品一,二区| 99热国产这里只有精品6| 最近的中文字幕免费完整| 国产熟女欧美一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 赤兔流量卡办理| 亚洲av.av天堂| 一级av片app| 亚洲精品aⅴ在线观看| 91精品国产国语对白视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲综合色惰| 内地一区二区视频在线| 亚洲欧美精品专区久久| 久久久久国产精品人妻一区二区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品一区二区三卡| 色吧在线观看| 内地一区二区视频在线| 日本av免费视频播放| 国产片特级美女逼逼视频| h日本视频在线播放| 久久ye,这里只有精品| 国产成人精品一,二区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 成年免费大片在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲久久久国产精品| 久久久国产一区二区| 亚洲av在线观看美女高潮| 只有这里有精品99| 99热6这里只有精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品,欧美精品| 最近的中文字幕免费完整| 天堂中文最新版在线下载| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 高清欧美精品videossex| 亚洲中文av在线| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久热这里只有精品99| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产精品伦人一区二区| av在线观看视频网站免费| 亚洲人与动物交配视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产高清不卡午夜福利| 精品久久久久久久末码| 黄色日韩在线| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| av福利片在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲久久久国产精品| 久久久久人妻精品一区果冻| kizo精华| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 午夜免费男女啪啪视频观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲国产欧美在线一区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 成人国产av品久久久| 热99国产精品久久久久久7| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美+日韩+精品| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产片特级美女逼逼视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 51国产日韩欧美| 国产成人精品久久久久久| 99久久综合免费| 日韩国内少妇激情av| 国产高清国产精品国产三级 | 国产av国产精品国产| 国产探花极品一区二区| 91在线精品国自产拍蜜月| 91狼人影院| 久久影院123| 久久久欧美国产精品| 一级毛片电影观看| a级一级毛片免费在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 99久久精品热视频| 高清毛片免费看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲欧洲国产日韩| av黄色大香蕉| 欧美精品国产亚洲| 午夜免费观看性视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 中文字幕久久专区| 一级毛片电影观看| 亚洲,欧美,日韩| 色视频在线一区二区三区| 高清视频免费观看一区二区| 久久青草综合色| 国产欧美亚洲国产| 久久国产亚洲av麻豆专区| 岛国毛片在线播放| 国产免费一区二区三区四区乱码| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日韩亚洲欧美综合| 日韩一本色道免费dvd| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 久久99热6这里只有精品| 日本与韩国留学比较| 久久99热6这里只有精品| 日本av免费视频播放| 国产一级毛片在线| 亚洲av成人精品一二三区| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 直男gayav资源| 亚洲av男天堂| 黄色欧美视频在线观看| 97在线视频观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 黄色一级大片看看| 亚洲高清免费不卡视频| 男女免费视频国产| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲av国产av综合av卡| 色视频www国产| 国产真实伦视频高清在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 成人国产麻豆网| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品人妻久久久影院| 精品视频人人做人人爽| 中国国产av一级| 中文资源天堂在线| 国产精品女同一区二区软件| 国产在线视频一区二区| 欧美zozozo另类| 国产成人精品福利久久| 国产成人a∨麻豆精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 一区二区三区免费毛片| 国产av码专区亚洲av| 婷婷色综合www| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 春色校园在线视频观看| 日韩欧美 国产精品| 水蜜桃什么品种好| av在线观看视频网站免费| 色视频www国产| 国产 一区精品| 麻豆成人av视频| 中国国产av一级| 麻豆成人av视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产黄片美女视频| 春色校园在线视频观看| 欧美精品一区二区大全| 少妇熟女欧美另类| av免费观看日本| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲欧洲国产日韩| tube8黄色片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久精品夜色国产| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美成人午夜免费资源| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 丝袜喷水一区| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲性久久影院| 一区二区三区四区激情视频| h日本视频在线播放| 一级毛片我不卡| 大话2 男鬼变身卡| 国产中年淑女户外野战色| 国产真实伦视频高清在线观看| 中文字幕制服av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久久午夜欧美精品| 国产69精品久久久久777片| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 午夜激情久久久久久久| 日韩在线高清观看一区二区三区| 免费观看无遮挡的男女| 日本黄大片高清| 99热全是精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产高清三级在线| av一本久久久久| 久久鲁丝午夜福利片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久国产精品大桥未久av | 国产一区有黄有色的免费视频| 日韩av免费高清视频| 久久亚洲国产成人精品v| av在线播放精品| 色网站视频免费| 国产片特级美女逼逼视频| 国产黄色免费在线视频| 亚洲av不卡在线观看| 日韩大片免费观看网站| 国产av一区二区精品久久 | 赤兔流量卡办理| 综合色丁香网| 岛国毛片在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 免费人妻精品一区二区三区视频| 99热这里只有精品一区| xxx大片免费视频| 免费看不卡的av| 久久99热这里只频精品6学生| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲综合色惰| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产黄片视频在线免费观看| 国产av码专区亚洲av| 国产成人aa在线观看| 日本与韩国留学比较| 欧美成人午夜免费资源| 国产精品三级大全| 国产成人freesex在线| 嫩草影院入口| 中文天堂在线官网| 亚洲精品456在线播放app| 一区二区av电影网| 久久这里有精品视频免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 人体艺术视频欧美日本| 51国产日韩欧美| 五月伊人婷婷丁香| 99热这里只有是精品50| 久久久久人妻精品一区果冻| h日本视频在线播放| 久久久久网色| 国产 一区精品| 中文在线观看免费www的网站| 夫妻午夜视频| 看十八女毛片水多多多| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 日本欧美国产在线视频| 欧美精品一区二区免费开放| 丝袜喷水一区| 超碰av人人做人人爽久久| 天堂中文最新版在线下载| 国产69精品久久久久777片| 我的女老师完整版在线观看| 日韩成人伦理影院| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产黄色免费在线视频| 国产久久久一区二区三区| 国国产精品蜜臀av免费| 少妇高潮的动态图| 五月天丁香电影| 国产真实伦视频高清在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 激情 狠狠 欧美| 国产黄片美女视频| 丝袜脚勾引网站| 日韩中字成人| 成人综合一区亚洲| 国产综合精华液| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日韩一区二区三区影片| 色吧在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 精品久久久精品久久久| 国产精品国产三级专区第一集| av线在线观看网站| 久久久精品94久久精品| 国产成人精品福利久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日本欧美视频一区| 欧美一区二区亚洲| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 香蕉精品网在线| 2018国产大陆天天弄谢| 成人免费观看视频高清| 少妇 在线观看| 亚洲国产av新网站| 另类亚洲欧美激情| 最后的刺客免费高清国语| 国产黄频视频在线观看| 99热这里只有是精品50| 日韩成人av中文字幕在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 超碰97精品在线观看| 黑人高潮一二区| 亚洲性久久影院| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品亚洲成a人片在线观看 | 高清午夜精品一区二区三区| 韩国高清视频一区二区三区| 五月玫瑰六月丁香| 国产一区二区三区综合在线观看 | 边亲边吃奶的免费视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 色综合色国产| 秋霞在线观看毛片| 亚州av有码| 国产成人精品福利久久| 97精品久久久久久久久久精品| av免费在线看不卡| 日韩国内少妇激情av| a 毛片基地| 色婷婷av一区二区三区视频| 99国产精品免费福利视频| 精品一区二区三区视频在线| 一区二区av电影网| 久久av网站| 亚洲国产色片| 在线观看一区二区三区|