雙黃解毒乳膏對(duì)銀屑病動(dòng)物模型作用的實(shí)驗(yàn)研究

王 萍， 聶繼紅*， 孫玉華

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，新疆烏魯木齊830000；2.新疆維吾爾藥研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830004）

雙黃解毒乳膏對(duì)銀屑病動(dòng)物模型作用的實(shí)驗(yàn)研究

王 萍1， 聶繼紅1*， 孫玉華2

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，新疆烏魯木齊830000；2.新疆維吾爾藥研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830004）

目的 研究雙黃解毒乳膏對(duì)銀屑病動(dòng)物模型的治療作用。方法 采用小鼠陰道上皮病理模型、小鼠尾鱗片上皮病理模型和豚鼠耳部皮膚銀屑病樣皮損模型，觀察雙黃解毒乳膏對(duì)上皮細(xì)胞分裂及表皮細(xì)胞分化的影響。結(jié)果 雙黃解毒乳膏能明顯抑制陰道上皮細(xì)胞有絲分裂、對(duì)小鼠尾鱗片表皮顆粒層形成有顯著促進(jìn)作用、對(duì)豚鼠銀屑病樣模型耳部皮膚有治療作用。結(jié)論 雙黃解毒乳膏為治療銀屑病的有效藥物。

雙黃解毒乳膏；銀屑?。粍?dòng)物模型

銀屑病是一種常見并且易復(fù)發(fā)的慢性、炎癥性、紅斑鱗屑性皮膚病。中醫(yī)稱白疕或疕風(fēng)。銀屑病分為尋常性、關(guān)節(jié)病型、紅皮癥型和膿瘡型四型，以尋常性最常見。目前認(rèn)為，銀屑病表皮典型的病理生理特點(diǎn)主要包括表皮過度增生和分化不全伴角化過度。雙黃解毒乳膏是在我院醫(yī)院制劑的基礎(chǔ)上二次開發(fā)的外用乳膏劑，具有清熱除濕，解毒止癢之功，用于治療白疕，濕瘡，濕毒，頑癬等。為了進(jìn)一步證實(shí)其療效及作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)利用銀屑病動(dòng)物模型對(duì)該制劑進(jìn)行了藥效學(xué)研究，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 雙黃解毒乳膏（外用），新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院研制。規(guī)格：0.2，0.4，0.8 g 生藥/g 乳膏?；|(zhì)對(duì)照，取不含主藥的其它各成分依照雙黃解毒乳膏生產(chǎn)工藝制備，批號(hào)050326。用法與用量：成人每日2次涂于患處，每次10 mg乳膏/cm2（相當(dāng)于4 mg生藥/cm2）。

1.2 陽性對(duì)照藥 丙酸氯倍他索軟膏，規(guī)格：2 mg/10 g，批號(hào)：040320，廣東順峰藥業(yè)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小白鼠，雌雄各半。Wistar大鼠，雌雄各半。豚鼠，雌雄各半，均由新疆醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：新醫(yī)動(dòng)字SCXK（新）2003-0002，均為SPF級(jí)。

1.4 儀器與試藥 己烯雌酚注射液（規(guī)格0.5mg/mL，批號(hào)040109，天津金耀氨基酸有限公司），秋水仙堿（批號(hào)040307，吉林省輝南輝發(fā)制藥股份有限公司），鹽酸普萘洛爾（批號(hào)040512，江蘇常州亞邦制藥有限公司），聚維酮（PVPK30）（批號(hào)040216，河南玉源公司焦作市開源制藥廠），無水乙醇（批號(hào)0411073602，宿州安特生化化學(xué)有限公司），氮酮（批號(hào)20030325，天津市博迪化工有限公司），1、2—丙二醇（批號(hào)20040114，天津市博迪化工有限公司），Sartorius天平（德國產(chǎn)），OLYMPUS生物顯微鏡（日本光電業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 雙黃解毒乳膏對(duì)小鼠雌激素期陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響［1-2］取健康雌性小鼠50只，體質(zhì)量（26.2±1.4）g，腹腔注射己烯雌酚0.2 mg/只，每日1次，連續(xù)3 d，使其處于雌激素期，然后依體質(zhì)量均衡隨機(jī)分為5組，每組10只，即：基質(zhì)對(duì)照組、陽性對(duì)照藥丙酸氯倍他索軟膏組（0.02%）、雙黃解毒乳膏小、中、大（濃度為 0.2、0.4、0.8 g 生藥/g 乳膏）3個(gè)劑量組，每日涂抹陰道兩次，間隔4 h，每次50 μL/20 g，連續(xù)3 d，末次給藥后1 h，腹腔注射秋水仙堿2 mg/kg，6 h后處死小鼠，取其陰道組織，用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，HE染色，光鏡下計(jì)數(shù)300個(gè)陰道上皮基底細(xì)胞的有絲分裂數(shù)，其百分率為有絲分裂指數(shù)。結(jié)果見表1。

表1 雙黃解毒乳膏對(duì)小鼠雌激素期陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響（x ± s，n=10）

結(jié)果表明，雙黃解毒乳膏中、大劑量和陽性對(duì)照藥可顯著降低小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂指數(shù)。

2.2 雙黃解毒乳膏對(duì)小鼠尾部表皮顆粒層形成的影響［1-2］

取健康小鼠50只，體質(zhì)量（19.7±1.3）g，雌雄各半，依性別、體質(zhì)量均衡隨機(jī)分為5組，每組10只，分基質(zhì)對(duì)照組，陽性對(duì)照藥丙酸氯倍他索軟膏組（0.02%），雙黃解毒乳膏小、中、大（濃度為 0.2、0.4、0.8 g 生藥/g 乳膏，每次 4、8、16 mg生藥/cm2）3個(gè)劑量組，每日兩次涂抹鼠尾，間隔4 h，20 mg乳膏/cm2，連續(xù)15 d，末次給藥2 h后處死全部小鼠，取距鼠尾根部1.8 cm尾背部皮膚一長條，用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，常規(guī)制片，HE染色，于光鏡下（400X）觀測鼠尾表皮顆粒層形成情況。結(jié)果見表2。

結(jié)果表明，雙黃解毒乳膏中、大劑量和陽性對(duì)照藥可顯著促進(jìn)小鼠尾部表皮顆粒層形成。

2.3 雙黃解毒乳膏對(duì)鹽酸普萘洛爾致豚鼠耳廓皮膚銀屑病樣皮損模型的影響［3］鹽酸普萘洛爾乳擦劑的制備：取鹽酸普萘洛爾5 g加50%乙醇使其溶解，加入Azone-丙二醇5 mL作為復(fù)合促進(jìn)劑，加入PVP-K305 g為成膜材料，補(bǔ)加50%乙醇至100 mL，即可。

表2 雙黃解毒乳膏對(duì)小鼠尾部表皮顆粒層形成的影響（x ± s，n=10）

造模 取健康白色豚鼠55只，雌雄兼用，每只豚鼠用上述5%鹽酸普萘洛爾乳擦劑涂抹兩側(cè)耳廓皮膚（0.1 mL/cm2）每日兩次，連續(xù)兩周。另取10只健康白色豚鼠為空白組。末次給藥后殺死空白組和模型組各5只，分別取雙側(cè)耳廓皮膚標(biāo)本，10%甲醛溶液固定，常規(guī)制片，HE染色，光鏡下觀察以此評(píng)價(jià)造模質(zhì)量。

取銀屑病成模豚鼠50只，體質(zhì)量（412.8±33.8）g，雌雄兼用，依體質(zhì)量、性別隨機(jī)分為模型組，陽性對(duì)照藥（0.02%丙酸氯倍他索）組，雙黃解毒乳膏小、中、大（濃度為0.2、0.4、0.8 g生藥/g乳膏，每次 4、8、16 mg 生藥/cm2）3 個(gè)劑量組，每組10只。模型組不用任何藥物，作為皮膚損害模型自然恢復(fù)組。其余各組20 mg乳膏/cm2（約4～5 cm2）耳廓涂抹，每日給藥2次，右側(cè)涂抹基質(zhì)，左側(cè)抹藥。用藥2周后，處死動(dòng)物，取豚鼠兩側(cè)耳廓皮膚用10%甲醛固定，常規(guī)制片，HE染色，做病理組織學(xué)檢查。觀察耳部皮膚角化層、顆粒層、棘細(xì)胞層、基底細(xì)胞層及固有層的變化。

結(jié)果，模型組豚鼠耳廓有類似人銀屑病的組織病理學(xué)改變，表皮角質(zhì)層過度角化，廣泛或灶狀角化不全，棘層變厚，釘突延長，角質(zhì)層內(nèi)有小膿腫，真皮層中-重度炎細(xì)胞浸潤，并有血管炎表現(xiàn)。雙黃解毒乳膏對(duì)此模型有治療作用，以大劑量作用為佳，詳見下列圖1～圖6。

以鹽酸普萘洛爾乳液涂豚鼠耳廓，引起皮膚角化過度，或角化不全，角質(zhì)層間有多個(gè)小膿瘡，棘突增厚，釘突延長，毛血管炎等銀屑病性改變。每次分別外用雙黃解毒乳膏4、8、16 mg生藥/cm2，Bid，連續(xù)使用 14 d 后，上述病理特征依劑量增加得到改善，尤其中、大劑量組僅有輕度過度角化，角質(zhì)層的小膿瘡減少，棘突細(xì)胞增厚或釘突延長、毛血管炎等明顯減輕。雙黃解毒乳膏對(duì)處于雌激素期的小鼠陰道上皮細(xì)胞的有絲分裂有明顯抑制作用；對(duì)小鼠尾部皮膚表皮顆粒層形成有促進(jìn)作用。上述3項(xiàng)試驗(yàn)不但支持雙黃解毒乳膏除濕、解毒止癢，用于白疕的治療，而且說明了部分作用機(jī)制：抑制細(xì)胞有絲分裂和促進(jìn)顆粒層形成。

所用劑量為8、16、32 mg生藥/（cm2·d）；最小有效量為每次4 mg生藥/cm2，每日2次。

圖1 空白對(duì)照組（放大倍數(shù)40×10）

圖3 模型組過度角化、角化不全（放大倍數(shù)10×10）

圖5 中劑量組小膿腫（放大倍數(shù)10×10）

3 討論

3.1 目前銀屑病病因尚不明確?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病與遺傳、感染、免疫、精神、內(nèi)分泌、外傷、飲食及代謝障礙等因素有關(guān)。中醫(yī)認(rèn)為，外感內(nèi)邪，搏于肌膚，郁久化熱，或肝腎不足，營血虧虛，而致血熱內(nèi)留或血虛風(fēng)燥等是本病發(fā)生的主要機(jī)制［4］。長期以來，臨床上多采用腎上腺皮質(zhì)激素和免疫抑制劑等治療銀屑病，但由于銀屑病本身的復(fù)雜性以及上述藥物長期使用的嚴(yán)重副作用，故尋找有效、安全、副作用小的治療藥物仍為當(dāng)務(wù)之急。

3.2 銀屑病的組織病理學(xué)主要表現(xiàn)為角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增生、炎癥細(xì)胞聚集和真皮乳頭部血管增生擴(kuò)張三大特征，從而出現(xiàn)角化過度、角化不全、顆粒層消失、棘細(xì)胞層增厚等。研究提示，治療銀屑病模型有效的中藥普遍具有抑制陰道上皮基底細(xì)胞有絲分裂、促進(jìn)鼠尾鱗片表皮顆粒層形成的作用。在實(shí)驗(yàn)中常利用雌激素周期中小鼠陰道上皮細(xì)胞增生活躍的特點(diǎn)，模擬銀屑病表皮增生過快的特點(diǎn)；而將鼠尾鱗片表皮角化缺少顆粒層形成的過程，模擬銀屑病表皮分化不全的特點(diǎn)［5］。再如心得安（鹽酸普萘洛爾）誘導(dǎo)銀屑病動(dòng)物模型，是利用心得安可阻斷角朊細(xì)胞的β-腎上腺能受體而降低細(xì)胞內(nèi)cAMP水平這一特有的藥理作用，導(dǎo)致動(dòng)物表皮角化過度、角化不全和棘層肥厚等類似銀屑病的組織病理改變，其皮損并非是刺激性皮炎［6］。

圖2 基質(zhì)組過度角化（放大倍數(shù)10×10）

圖4 陽性對(duì)照組過度角化（放大倍數(shù)10×10）

圖6 大劑量組過度角化（放大倍數(shù)10×10）

3.3 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，雙黃解毒乳膏局部外用對(duì)小鼠雌激素期陰道上皮細(xì)胞的有絲分裂有抑制作用，中、大劑量與基質(zhì)對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。對(duì)小鼠尾部顆粒層形成有促進(jìn)作用，中、大劑量與基質(zhì)對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。說明雙黃解毒乳膏有抑制表皮細(xì)胞過度增生并誘導(dǎo)表皮顆粒細(xì)胞生成，抑制表皮過度不全角化，提示可能有抗銀屑病作用。對(duì)鹽酸普萘洛爾所致豚鼠耳廓皮膚銀屑病樣模型，雙黃解毒乳膏對(duì)其病理有改善和逆轉(zhuǎn)作用。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果為雙黃解毒乳膏臨床治療白疕提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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R285.5

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1001-1528（2011）07-1227-03

2010-05-17

新疆維吾爾自治區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)（含攻關(guān)）計(jì)劃“中成藥二次開發(fā)研究”項(xiàng)目（200333112B1）

王 萍（1965—），女，主任藥師，碩士，從事中藥新藥研發(fā)。Tel：13999926696，（0991）5814127，E-mail：wpzyyyys@sina.com

*通信作者：聶繼紅，女，教授，從事中藥新藥研發(fā)。Tel：13579209276，E-mail：xjNjH411@163.com