紫檀芪對(duì)腦缺血/再灌注損傷大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

胡向陽， 舒曉春*， 馬 義

(1.中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣東珠海519000;2.暨南大學(xué)生命科學(xué)院，廣東廣州510632)

腦缺血/再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)的發(fā)生依賴于血管病變、血液成分和血液流變?nèi)齻€(gè)因素，是一個(gè)系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，包括能量障礙、炎性反應(yīng)、細(xì)胞內(nèi)鈣失穩(wěn)態(tài)、凋亡基因激活等，腦缺血/再灌注損傷多伴有血液流變學(xué)指標(biāo)的改變［1-2］。紫檀芪(pterostilbene)是白藜蘆醇衍生物，在藍(lán)莓、黑莓等漿果中含量豐富，研究顯示紫檀芪具有預(yù)防氧化應(yīng)激反應(yīng)、抗真菌、抗細(xì)胞增值等作用［3-4］。紫檀芪對(duì)腦缺血/再灌注損傷血液流變學(xué)影響的研究較少，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行初步的探索。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠，體質(zhì)量220～260 g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):粵檢證字2009A318。

1.2 試劑與儀器 紫檀芪(日本富士株式會(huì)社，98%，HPLC)，CBY-N6A自清洗旋轉(zhuǎn)式黏度計(jì)、LBY-NW1血漿黏度計(jì)(北京普利生科學(xué)儀器公司)，DVM-4200型二道血流速度流量儀(日本島津公司)，真空采血管(廣州楊普公司)，LDZ5-2型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。

1.3 動(dòng)物分組、給藥途徑及藥量 健康雄性SD大鼠36只，數(shù)字隨機(jī)分組法分為4組，即假手術(shù)組、缺血/再灌注組、紫檀芪低劑量組、紫檀芪高劑量。紫檀芪低劑量組(15 mg/kg)、紫檀芪高劑量(30 mg/kg)均于術(shù)前、術(shù)后連續(xù)灌胃給藥6 d，1次/d，假手術(shù)組和缺血/再灌注組給予等量的生理鹽水灌胃。

1.4 動(dòng)物模型制備 在Longa等［5］方法上改進(jìn)制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，用10%水合氯醛溶液(350 mg/kg，ip)麻醉，采用頸外動(dòng)脈插入線栓法，進(jìn)行左側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞，線栓采用石蠟線栓，線栓直徑約0.27 mm，插入深度約18 mm，此時(shí)線栓頭位于大腦中動(dòng)脈起始部。缺血90 min時(shí)，抽提線栓實(shí)現(xiàn)再灌注。神經(jīng)功能缺陷評(píng)分:按照Longa等［5］評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，各組分別在再灌注24 h進(jìn)行評(píng)分。0分:正常，無神經(jīng)學(xué)征象;1分:動(dòng)物不能完全伸展右前肢;2分:動(dòng)物右側(cè)肢體癱瘓，行走時(shí)向右側(cè)轉(zhuǎn)圈，出現(xiàn)追尾現(xiàn)象;3分:動(dòng)物行走向右側(cè)跌倒，或動(dòng)物不能站立或動(dòng)物打滾;4分:無自發(fā)活動(dòng)，有意識(shí)障礙。神經(jīng)功能缺陷評(píng)分在1～3分為模型成功。

1.5 血液流變學(xué)檢測 造模后治療6 d，禁食8 h后分離頸總動(dòng)脈取血，全血快速流入事先用肝素包被的抗凝試管中，輕輕搖動(dòng)，2 h內(nèi)測定全血黏度、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積，計(jì)算紅細(xì)胞(RBC)聚集指數(shù)、變形指數(shù)和剛性指數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)復(fù)測量資料的方差分析，定量指標(biāo)以(±s)表示，方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以P＜0.05為顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 各組全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積變化 與假手術(shù)組比較，缺血/再灌注組低、中、高切全血黏度、紅細(xì)胞壓積均不同程度升高，血漿黏度沒有明顯變化。紫檀芪低劑量組低、中、高切全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積均低于缺血/再灌注組，其血漿黏度低于假手術(shù)組。紫檀芪高劑量組中、高切全血黏度低于紫檀芪低劑量組，其低切全血黏度、紅細(xì)胞壓積低于缺血/再灌注組，血漿黏度低于假手術(shù)組;其低、中、高切全血黏度明顯低于假手術(shù)組。見表1。

表1 各組鼠全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積比較(±s)

表1 各組鼠全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積比較(±s)

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與缺血/再灌注組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01;與紫檀芪低劑量治療組比較，▲P ＜0.05。下同。

組別 n 全血黏度/(mPa·s)低切 中切 高切全血黏度/(mPa·s)紅細(xì)胞壓積/%假手術(shù)組 9 9.34 ±1.65 6.45 ±1.14 3.23 ±0.16 1.27 ±0.11 36.3 ±1.28缺血/再灌注組 9 11.61 ±0.73* 7.67 ±0.83* 4.48 ±0.51* 1.38 ±0.13 38.1 ±0.78*紫檀芪低劑量組 9 10.15±0.64△ 6.13±1.36△ 3.05±0.26△ 1.08±0.10＊△ 35.4±1.36△紫檀芪高劑量組 9 7.31±1.22＊＊△ 4.16±1.37＊△ 1.48±0.20＊△△▲ 1.04±0.16* 32.3±1.27＊△

2.2 各組RBC聚集指數(shù)、變形指數(shù)和剛性指數(shù)變化 缺血/再灌注組RBC聚集指數(shù)、RBC剛性指數(shù)均不同程度高于假手術(shù)組，表明造模成功。紫檀芪低劑量組RBC聚集指數(shù)、RBC剛性指數(shù)均不同程度低于與缺血/再灌注組，其RBC變形指數(shù)低于假手術(shù)組。紫檀芪高劑量組RBC變形指數(shù)低于紫檀芪低劑量組，其RBC變形指數(shù)高于缺血/再灌注組，RBC剛性指數(shù)低于缺血/再灌注組，RBC聚集指數(shù)明顯低于缺血/再灌注組;并低于假手術(shù)組。提示紫檀芪可明顯改善缺血/再灌注損傷后紅細(xì)胞應(yīng)激能力，并存在正效應(yīng)的量效依賴關(guān)系。見表2。

表2 各組鼠RBC聚集指數(shù)、RBC變形指數(shù)、RBC剛性指數(shù)比較(±s)

表2 各組鼠RBC聚集指數(shù)、RBC變形指數(shù)、RBC剛性指數(shù)比較(±s)

剛性指數(shù)假手術(shù)組組別 n RBC聚集指數(shù) RBC變形指數(shù) RBC 2.17 ±0.03 1.04 ±0.13 6.05 ±0.33缺血/再灌注組 9 3.08 ±0.06* 0.92 ±0.27 6.38 ±0.26*紫檀芪低劑量組 9 2.26±0.02△ 0.98±0.21* 5.80±0.14△紫檀芪高劑量組 9 1.93±0.04＊△△ 1.27±0.20△▲ 5.32±0.299＊＊△

3 討論

血液流變學(xué)檢測在疾病的預(yù)防、診斷、預(yù)后判斷中有重要的應(yīng)用價(jià)值，特別是人類死亡率及致殘率最高的心腦血管病。血液在外力(血壓)的作用下，在血管內(nèi)流動(dòng)，并隨著血管性狀(血管壁情況和血管形狀等)及血液成分(黏度)的變化而變化，維持正常的血液循環(huán);當(dāng)血液黏度變大時(shí)，血液流動(dòng)性就變差，也就最容易發(fā)生腦血栓性疾病［6］。大腦中動(dòng)脈(MCA)是臨床上腦缺血及腦梗死的易患部位，在腦梗死患者中，MCA主干分布區(qū)梗死占82.2%，其中70%有明顯的栓子來源，所以對(duì)MCA主干閉塞的研究占有較重要的地位，線栓大鼠大腦中動(dòng)脈法制作腦缺血后再灌注模型是較成熟的造模方法［7］。

腦組織缺血后再灌注是腦缺血性疾病最主要的損傷原因，目前對(duì)腦缺血/再灌注損傷發(fā)病機(jī)制仍有爭議，已有的防治方法遠(yuǎn)不令人滿意。早期對(duì)缺血性腦損傷的研究多關(guān)注于腦組織壞死所造成的損傷，近年來，腦缺血再灌注損傷引起的血液流變學(xué)改變研究日益受到重視。血液流變學(xué)研究血液及其有形成分的流動(dòng)性、血流變學(xué)的變化規(guī)律等，血液流變學(xué)異常是腦缺血/再灌注損傷的病理基礎(chǔ)，并與其嚴(yán)重程度密切相關(guān)［8］。血液黏度是衡量血液流動(dòng)性的指標(biāo)，血液黏度的高低主要取決于血細(xì)胞比容、血流的切率、血細(xì)胞的變形性、聚集性和黏附性等因素，而且這些因素又具有切變依賴性，故使血液具有非牛頓流動(dòng)特性［9］。

研究發(fā)現(xiàn)在缺血性中風(fēng)發(fā)生之前，血液黏度已經(jīng)出現(xiàn)升高趨勢，這與紅細(xì)胞的聚集能力和變形能力有關(guān)，腦缺血后紅細(xì)胞變形能力降低，聚集性提高，可促進(jìn)腦缺血后微栓子的形成和微循環(huán)血流停止的發(fā)生［10］。微循環(huán)是組織血流灌注的基本單位，又是腦缺血/再灌注損傷時(shí)關(guān)鍵作用條件，腦缺血/再灌注損傷與再灌注后微循環(huán)障礙密切相關(guān)，因此，改善腦微循環(huán)是維持大腦血液灌注量、減輕再灌注損傷的重要手段［11］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺血/再灌注組RBC聚集指數(shù)、RBC剛性指數(shù)均不同程度高于假手術(shù)組，結(jié)合造模后神經(jīng)功能缺陷評(píng)分情況分析，表明腦缺血/再灌注損傷造模成功。紫檀芪能降低腦缺血/再灌注損傷大鼠全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積，提高紅細(xì)胞的應(yīng)激能力，提示紫檀芪通過對(duì)腦缺血/再灌注損傷后血液流變學(xué)指標(biāo)的影響，并有一定正效應(yīng)的量效依賴關(guān)系，具有改善再灌注后微循環(huán)障礙的潛在效應(yīng)，但其具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

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