RP-HPLC法測(cè)定獨(dú)一味膠囊中木犀草苷的含量

陳 林（江蘇如皋市人民醫(yī)院，如皋市 226500）

RP-HPLC法測(cè)定獨(dú)一味膠囊中木犀草苷的含量

陳 林＊（江蘇如皋市人民醫(yī)院，如皋市 226500）

目的：建立測(cè)定獨(dú)一味膠囊中木犀草苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Ultimate XB-C18，流動(dòng)相為甲醇（A相）-0.2%醋酸溶液梯度洗脫（0～35m in，A相33%；35～37m in，A相33%～70%；37～47m in，A相70%；47～50 m in，A相70%～33%），檢測(cè)波長(zhǎng)為349 nm，流速為1.0m L·m in－1，進(jìn)樣量為10μL，柱溫為30℃。結(jié)果：木犀草苷進(jìn)樣量在0.041 1～2.056 0μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好（r＝0.999 8）；平均加樣回收率為98.06%、96.71%、95.75%，RSD＝1.70%。結(jié)論：該法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便，可用于獨(dú)一味膠囊的質(zhì)量控制。

獨(dú)一味；木犀草苷；黃酮；反相高效液相色譜；含量測(cè)定

獨(dú)一味膠囊收載于2005年版《中國(guó)藥典》（一部）中[1]，具有活血止痛、化瘀止血的作用[2]。臨床用于多種外科手術(shù)后的刀口疼痛、出血，外傷骨折，筋骨扭傷，風(fēng)濕痹痛以及崩漏、痛經(jīng)、牙齦腫痛、出血等。本文報(bào)道筆者對(duì)獨(dú)一味膠囊中黃酮苷類成分木犀草苷進(jìn)行測(cè)定，旨在為該藥的質(zhì)量控制研究提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀、Chemstationsys工作站（美國(guó)安捷倫公司）；Sartorius CP225D分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

獨(dú)一味膠囊（甘肅獨(dú)一味生物制藥股份有限公司，批號(hào)：20100218，規(guī)格：每粒0.3 g）；木犀草苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111720-200604）；甲醇、磷酸為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品溶液；B.樣品；C.陰性對(duì)照溶液；1.木犀草苷Fig 1 HPLC chromatogram sA.control solution；B.sample；C：negative control solution；1.galuteolin

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇（A相）-0.2%醋酸溶液梯度洗脫（0～35m in，A相33%；35～37 m in，A相33%～70%；37～47 m in，A相70%，47～50min，A相70%～33%）；流速：1.0m L·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：349 nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃。在此條件下，木犀草苷能達(dá)到基線分離。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過(guò)夜的木犀草苷對(duì)照品約10mg，置于50m L容量瓶中，用70%乙醇溶液溶解并定容至刻度，作為對(duì)照品貯備液。精密量取上述對(duì)照品貯備液1m L，置于10m L容量瓶中，用33%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取獨(dú)一味膠囊內(nèi)容物（碾碎，過(guò)40目篩）8份，每份約1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入50倍70%乙醇，密塞，稱定重量，超聲60m in，放冷，70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。取續(xù)濾液2m L，置于10m L容量瓶中，加33%甲醇稀釋至刻度，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 取缺少獨(dú)一味藥材的陰性對(duì)照樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品貯備液0.2、0.4、1.0、2.0、5.0、10.0m L，分置于10m L容量瓶中，加33%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為4.11、8.22、20.56、41.12、102.80和205.60μg·m L－1的溶液。分別精密吸取10μL注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，木犀草苷進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程Y＝2 732.5X－19.337。結(jié)果表明，木犀草苷進(jìn)樣量在0.041 1～2.056 0μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好（r＝0.999 8）。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，按“2.1”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果，木犀草苷峰面積值的RSD＝0.43%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一樣品溶液10μL，于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣。結(jié)果，木犀草苷峰面積值的RSD＝0.83%，表明處理后的樣品室溫放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取獨(dú)一味膠囊內(nèi)容物適量，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)峰面積，并計(jì)算木犀草苷的含量。結(jié)果，木犀草苷的平均含量為8.016mg·g－1，RSD＝1.02%，表明重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取獨(dú)一味膠囊樣品（批號(hào)：20100218）內(nèi)容物9份，每份約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，按樣品含量的80%、100%、120%分別加入對(duì)照品，每份平行3份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算木犀草苷的含量。結(jié)果，木犀草苷平均回收率為96.90%，RSD＝1.69%，結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測(cè)定

樣品按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中木犀草苷的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery test of galuteolin in Lam iophlom is capsules

表2 木犀草苷的含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determ ination of galuteolin in Lam iophlom is capsules（n＝3）

筆者比較了甲醇、50%甲醇、70%乙醇等不同的提取溶劑對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明，3種溶劑對(duì)分析成分的提取率從高到低分別為：70%乙醇＞甲醇＞50%甲醇，故選擇70%乙醇為提取溶劑。

3.2 提取時(shí)間的選擇

筆者比較10、20、30、60m in不同超聲時(shí)間對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明，超聲提取60m in木犀草苷的含量較其他3個(gè)提取時(shí)間均高，故選擇60m in為超聲提取時(shí)間。

3.3 溶劑用量的選擇

筆者比較了20、30、40、50倍體積的提取溶劑對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果表明，不同溶劑體積對(duì)待分析成分的含量無(wú)明顯影響，因此選擇20倍體積70%乙醇進(jìn)行提取試驗(yàn)。

綜上所述，筆者建立了RP-HPLC測(cè)定獨(dú)一味膠囊中木犀草苷含量的方法，該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于獨(dú)一味膠囊的質(zhì)量控制。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：184-185.

[2] 張 鳳，孫連娜，陳萬(wàn)生.獨(dú)一味的化學(xué)成分及藥理作用[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2008，26（3）：169.

Content Determ ination of Galuteolin in Lam iophlom idis Capsules by HPLC

CHEN Lin（Rugao Municipal People’s Hospital of Jiangsu Province，Rugao 226500，China）

OBJECTIVE：To establish themethod for the content determ ination of galuteolin in Lam iophlom is capsules.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The samples were separated on Ultimate XB-C18column w ith mobile phase consisted of methanol（phase A）-0.2%acetic acid（gradient elution）at 30℃.The ratio of phase A constant of 33%from 0 to 35 m in，and increased to 70%during 2 m in，then kept constant from 37 to 47 m in，and decreased from 70%to 33%in 3 m in.The detection wavelength was set at 349 nm and the flow rate was 1.0 m L·min－1.The injection volume was 10μL and column temperature was 30℃.RESULTS：The linear range of galuteolin in Lam iophlom is capsuleswas 0.041 1～2.056 0mg·g－1（r＝0.999 8）w ith an average recorery of 98.06%，96.71%，95.75%（RSD＝1.70%）.CONCLUSION：Themethod is stable and convenient.Themethod is suitable for the quality control of Lam iophlom is capsules.

Lam iophlom is；Galuteolin；Flavonoids；RP-HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2011）36-3447-02

＊主管藥師，本科。研究方向：醫(yī)院制劑和藥品質(zhì)量監(jiān)控。電話：0513-87537126。E-mail：chenlin19766@163.com

2011-04-22

2011-05-13）

·藥學(xué)教育·