香附醋炙前后總黃酮含量研究

李英霞， 韓 莉， 藏 曄， 武玉婷

(1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟南250014;2.淄博市中心醫(yī)院，山東淄博25500)

香附異名莎草根、香附子，是中醫(yī)常用的中藥之一，尤其在婦科用藥中使用廣泛，《本草綱目》稱之為“氣病之總司，女科之主帥”［1］。其植物來源為莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖，味辛、微苦、性甘、平。能理氣解郁，調經(jīng)止痛。治療肝郁氣滯，胸肋脹痛，消化不良，月經(jīng)不調，經(jīng)閉育經(jīng)之癥［2］。香附歷代炮制方法甚多，目前臨床常用的炮制飲片多為醋炙香附，2010版《中國藥典》只收載了醋香附一種炮制規(guī)格［3］。香附中主要化學成分有揮發(fā)油類、三萜類、生物堿類、黃酮類、甾醇類等［4-5］。以往香附炮制方面的研究多側重于揮發(fā)性成分，如炮制對揮發(fā)油及α-香附酮含量的影響等［6-10］，對其它化學成分影響研究尚未見報道。近年來，對香附非揮發(fā)性成分的研究逐漸得到重視，國外報道香附總黃酮和乙酸乙酯提取物或水醇提取物均具有較強的藥理活性［11-12］。本研究采用紫外分光光度法，對醋炙前后香附飲片中總黃酮的含量進行了測定，旨在全面探討香附炮制的目的，為揭示香附炮制的科學內涵提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

UV-265FW紫外可見分光光度計(日本島津)，XS205DU電子天平(上海梅特勒—托里多儀器有限公司)。蘆丁對照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號10008-200306，供含量測定用)。香附藥材購于山東泰安、濰坊及浙江、河南等7個產(chǎn)地，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院李英霞副研究員鑒定為莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖。龍門米醋(北京王致和味滋康食品有限公司)，總酸≥3.95 g/100 mL。其余試劑均為分析純。

2 炮制方法

生品香附:取香附藥材，除去雜質，以水浸潤后，切片，干燥。

醋炙香附:取香附切片適量，加米醋拌勻，潤悶1 h至吸盡，置鍋中文火炒至微帶焦斑，取出，攤晾。

3 含量測定

采用紫外分光光度法對香附醋炙前后總黃酮含量進行了測定。

3.1 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品適量，置100 mL量瓶中，加95%的乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含0.100 mg的對照品溶液。

3.2 供試品溶液的制備 取香附粉末1 g，精密稱定，置三角瓶中，加70%乙醇25 mL，80℃水浴回流提取2次，每次2 h，放冷，過濾，濾液合并，減壓回收乙醇，分別以石油醚(30℃ ～60℃)萃取以除去揮發(fā)油，再以乙酸乙酯萃取6次(15、15、15、15、10、10 mL)，減壓回收乙酸乙酯，殘渣以 70% 乙醇溶解，定容于10 mL量瓶中，作為供試品溶液。

3.3 波長的選擇 取對照品溶液2 mL，供試品溶液2 mL，在5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液，在400～600 nm波長范圍內掃描，結果對照品與樣品均在507 nm左右有最大吸收，故確定測定波長為507 nm。

3.4 線性關系考察 精密量取蘆丁對照液(質量分數(shù)為0.100 mg/mL)0.3、0.5、3、6、9、12、15 mL 分別置于 10 mL 量瓶中，分別加5%亞硝酸鈉0.3 mL，搖勻，靜置6 min，再加10%的硝酸鋁0.3 mL，搖勻，靜置6 min，再加4%的氫氧化鈉4 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min。以試劑作為空白參比液，于507 nm波長處測吸光度。以濃度(C)為橫坐標，以吸光度(A)為縱坐標，繪制標準曲線并進行回歸分析，得回歸方程為:A=0.084 7C-0.004 8，相關系數(shù)r=0.999 8。結果表明，蘆丁在3.0 μg/mL ～150.0 μg/mL 范圍內線性關系良好。

3.5 精密度、穩(wěn)定性、重復性試驗及回收率試驗 詳見有關文獻［13］。

3.6 樣品測定 取香附粉末1 g，精密稱定，按3.2項下方法制備樣品溶液，按3.1項下方法制備對照品溶液，精密吸取0.5 mL供試品溶液于10 mL量瓶中，加顯色劑顯色，以試劑為空白參比液，于507 nm處測定吸光度，計算含量。結果見表1。

表1 不同地區(qū)生品香附與醋炙香附總黃酮含量測定結果(n=3)

(續(xù)表1)

4 討論

4.1 在測定香附總黃酮過程中，發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油對測定有一定影響，未去除揮發(fā)油的溶液加亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉顯色時，會產(chǎn)生紅色絮狀沉淀，影響吸光度的測定。作者對比了兩種去除揮發(fā)油方法的顯色效果，即先以石油醚索式提取脫除和以石油醚萃取去除，結果兩種方法效果基本一致，故選取了后一種去除方法。

4.2 不同產(chǎn)地香附生品和醋炙品中總黃酮含量均較高，其中河南社旗的最高，生品為2.33%，醋炙品為2.64%。大多數(shù)地區(qū)含量在1.00%以上。

4.3 各地香附經(jīng)醋炙后總黃酮含量均明顯升高，按炮制后收率計算，多數(shù)升高率在12.45% ～19.84%，說明醋炙能增加香附有效部位總黃酮的溶出。本研究從非揮發(fā)性成分方面為探討香附醋炙的目的提供了一定參考。

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