紫外可見分光光度法檢測聚維酮K30中的肼

譚冬梅 張育勝 段仙絨

（1.浙江全金藥業(yè)股份有限公司，浙江 杭州 310019；2.西安科力康醫(yī)藥科技有限公司，陜西 西安 710000）

肼是一種劇毒物質(zhì)，同時也是一種比較強的還原物質(zhì)，聚維酮K30中的肼來源于其偶氮類引發(fā)劑，偶氮類引發(fā)劑也是毒性物質(zhì)，因此檢測并控制聚維酮K30中肼的含量，有助于提高聚維酮K30的安全使用，提高以聚維酮K30為輔料藥品的穩(wěn)定性，保證人民群眾的用藥安全。目前，我國藥典尚未要求對聚維酮K30中的肼進行檢測和控制，而《歐州藥典》和《美國藥典》對聚維酮K30中的肼采用薄層色譜法，樣品在薄層色譜上展開后，以水楊酸嗪為對照品，與肼的顯色色斑目視比色，限量為不得過百萬分之一，此法只能作限量判定，而不能作定量檢測，且分析過程中用到甲醇，甲苯等強毒性試劑，本文嘗試使用紫外分光光度法檢測此樣品中的肼，分析快速準確，重現(xiàn)性較好，且能定量分析，靈敏度高，同時避免了使用強毒性試劑，效果較好。

1 主要儀器與試劑

TU-1810紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）

對二甲氨基苯甲醛，鹽酸，95％乙醇，硫酸肼（均為分析純），聚維酮K30（河南博愛新開源制藥有限公司，批號：3DY101229086）

原理：樣品中的肼與對二甲氨基苯甲醛作用，生成對二甲氨基芐連氮，在酸性條件下，形成醌式結(jié)構(gòu)的黃色化合物，在457nm處有最大吸收，在測定范圍內(nèi)黃色深度與肼含量成正比，可以定量測量。

2 標準溶液的配制

肼標準貯備溶液：稱取0.4060g硫酸肼（N2H4·H2SO4），加水溶解，并用水稀釋為1000mL。此溶液1.0mL含100ug肼。

肼標準溶液：吸取1.0mL肼標準貯備溶液，用水稀釋為100mL，此溶液為1.0μg/mL肼標準溶液，此溶液應(yīng)臨用新配。

對二甲氨基苯甲醛溶液：稱取4.0g對二甲氨基苯甲醛，溶于200mL 20％乙醇及15mL鹽酸中，存放于棕色瓶中。

3 波長的選擇

（1）取5.0mL肼標準溶液（1.0μg/mL），相當于5.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻，5min后，以相同試劑為空白，上機作光譜掃描。

（2）稱取1.0g K30，加適量水溶解，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻5min后，以除顯色劑外的相同量的樣品和試劑為空白，上機作光譜掃描。

（3）稱取1.0g K30，加適量水溶解，加入2.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻，5min后，以除顯色劑外的相同量的樣品和試劑為空白，上機作光譜掃描。掃描如圖1：

圖1 波長掃描

掃描結(jié)果顯示：肼經(jīng)顯色反應(yīng)后，在457nm處有最大吸收，且無其它吸收峰影響，故以此波長為檢測波長。

4 時間掃描

取5.0mL肼標準溶液（1.0μg/mL），相當于5.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻后，以相同試劑為空白，在457nm作時間掃描。

圖2 時間掃描

可見自開始掃描至60min期間吸光度一直穩(wěn)定，可以在此時間段內(nèi)測定（本試驗未對60min后的穩(wěn)定性作考察）。

5 鹽酸量對吸光度的影響

于6支25mL容量瓶中各加入0.1860g對二甲氨氨苯甲醛（相當于10mL顯色劑中的對二甲氨基苯甲醛）、6.8mL乙醇（10mL顯色劑中含有1.8mL，另加5mL）和5.0mL肼標準溶液（1.0μg/mL），分別加入0.0mL，0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，0.9mL鹽酸，用水稀釋至25mL，搖勻，放置5min，以相應(yīng)量的試劑為各自空白（6個空白），在457nm檢測吸光度，得如表1的數(shù)據(jù)。

表1 鹽酸的量對吸光度的影響

可見，加入的鹽酸量在0.2～0.8mL間吸光度A隨鹽酸量增加而增大，超過0.8mL，則有下降趨勢，鹽酸量在0.6～0.9mL范圍內(nèi)的A值相對穩(wěn)定。鹽酸可以加入于顯色劑溶液中，隨顯色劑的加入一起進入待測溶液中。按4.0g對二甲氨基苯甲醛，溶于200mL 20％乙醇及一定量濃鹽酸中，此鹽酸的加入量應(yīng)在12.9～19.4mL之間，本文取15.0mL。

6 顯色劑量的選擇

稱取一定量對二甲氨基苯甲醛，各溶于6.8mL乙醇及0.7mL鹽酸中，加入5.0μg肼，用水定容至25mL，以相應(yīng)量的試劑為各自空白（7個空白），放置5min在457nm檢測吸光度，得如表2的數(shù)據(jù)。

表2 顯色劑的量對吸光度的影響

可見對二甲氨基苯甲醛溶液取10mL時，A有最大值。

7 乙醇量對吸光度的影響

取5.0mL肼標準溶液（1.0μg/mL），相當于5.0μg肼，加入不同量乙醇，加10mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻，以相應(yīng)量的試劑為各自空白，5min后在457nm檢測吸光度，數(shù)據(jù)如表3。

表3 乙醇的量對吸光度的影響

可見乙醇量在5mL時吸光度已經(jīng)趨于穩(wěn)定。

8 標準曲線

取一系列肼標準溶液，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻，5min后，在457nm檢測吸光度.結(jié)果如表4。

表4 標準曲線系列

用上述數(shù)據(jù)進行線性擬合，得圖3。

圖3 標準曲線

可見本法中，肼在0～20μg范圍內(nèi)有良好的線性，相關(guān)系數(shù)達到0.9994（本文未做20μg以上的線性）。

9 樣品檢測及回收率實驗

樣品組：于6個25mL容量瓶中精確稱取1g K30樣品，加適量水溶解，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻。5min后，以除顯色劑外的相同量的樣品和試劑為空白，在457nm檢測吸光度。

回收率實驗：于6個25mL容量瓶中精確稱取1g K30樣品，加適量水溶解，加入2.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻。5min后，以除顯色劑外的相同量的樣品和試劑為空白在457nm檢測吸光度。

對照樣：取25mL容量瓶加入2.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL顯色劑，用水稀釋至25mL，搖勻。5min后，以相同量試劑為空白，在457nm檢測吸光度。

經(jīng)計算得如表5的數(shù)據(jù)。

表5 樣品檢測結(jié)果及回收率實驗

樣品中肼檢測結(jié)果的相對標準偏差RSD為3.7％，可見此法有較好的重現(xiàn)性和回收率。

10 討論

（1）通過上述實驗，此法對于聚維酮K30中肼的檢測優(yōu)于薄層色譜法，能準確定量，重現(xiàn)性好。

（2）對于日常檢測，可以不做標準曲線，而采用與樣品中肼含量相近的肼標準溶液（須在線性范圍內(nèi)）作單點對照。

［1］GB 18061-2000.水源水中肼衛(wèi)生標準［S］.

［2］中國藥典2010年版二部［S］.2010：294.

［3］歐洲藥典EP5.0［S］.2005：1999.