頸復(fù)康膠囊提取及揮發(fā)油包合工藝的優(yōu)化研究

買買提·吐爾遜，王懷松

(1.新疆喀什師范學(xué)院生命與環(huán)境科學(xué)系，新疆喀什 844000;2.南開大學(xué)化學(xué)學(xué)院，天津 300071)

頸復(fù)康膠囊提取及揮發(fā)油包合工藝的優(yōu)化研究

買買提·吐爾遜1，2，王懷松2，*

(1.新疆喀什師范學(xué)院生命與環(huán)境科學(xué)系，新疆喀什 844000;2.南開大學(xué)化學(xué)學(xué)院，天津 300071)

頸復(fù)康膠囊;提取工藝;β－環(huán)糊精包合物;正交試驗(yàn);HPLC

目的:優(yōu)選頸復(fù)康膠囊的提取工藝和揮發(fā)油的β－環(huán)糊精包合工藝。方法:以葛根素含量和干膏率為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法對(duì)水提工藝進(jìn)行優(yōu)選;以收油率為指標(biāo)，對(duì)揮發(fā)油提取工藝進(jìn)行優(yōu)選;以揮發(fā)油利用率、包合物含油率和包合物收率為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選以飽和水溶液法制備β－環(huán)糊精包合物的工藝。結(jié)果:確定葛根等十六味藥材的水提工藝為8倍量水，提取2次，每次2 h;川芎等五味藥材揮發(fā)油提取工藝為8倍量水，提取時(shí)間為4 h;β－環(huán)糊精包合物的工藝為油與β－環(huán)糊精的比例為1∶6，30℃攪拌2 h。結(jié)論:確定的工藝合理，有效成分提取率高。

頸復(fù)康顆粒收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版第一部，由羌活、川芎和葛根等二十一味藥材組成，具有活血通絡(luò)、散風(fēng)止痛之功效，用于治療頸椎病引起的腦供血不足、頭暈、頸項(xiàng)僵硬、肩背酸痛、手臂麻木等癥［1］。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選水提工藝、揮發(fā)油提取和β－環(huán)糊精包合工藝，為頸復(fù)康顆粒的劑型改進(jìn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

METTLER AE240型電子分析天平(上海)，KQ5200B型超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)，島津LC－10Avp高效液相色譜儀，SPD－10Avp紫外檢測(cè)器，色譜柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。葛根素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110752－200307)。含量測(cè)定試劑為色譜純，其他試劑均為分析純。藥材購(gòu)于河北安國(guó)，經(jīng)鑒定均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法及結(jié)果

2.1 葛根等水提工藝優(yōu)選

黃酮類物質(zhì)是葛根的主要化學(xué)成分，其中葛根素是主要的藥效成分。本實(shí)驗(yàn)將葛根素含量作為提取工藝的一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.1.1 葛根素的HPLC測(cè)定［2］檢測(cè)波長(zhǎng)選擇精密稱取80℃干燥至恒重葛根素對(duì)照品適量，加30%乙醇制成每1 mL含30 μg的溶液，用分光光度法，在波長(zhǎng)200～400 nm的范圍內(nèi)掃描，結(jié)果波長(zhǎng)為250 nm時(shí)葛根素有最大吸收。因此選擇250 nm作為葛根素的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。

色譜條件:用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇－水(25∶75，v/v)為流動(dòng)相;進(jìn)樣量:20 μL;流速:1 mL/min;柱溫:室溫。

對(duì)照品溶液的制備:精密稱取葛根素對(duì)照品14.52 mg，置100 mL量瓶中，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度制成145.2 μg/mL的溶液。

供試品溶液的制備:取干膏約0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，加30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

線性關(guān)系的考察:分別精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL各置10 mL量瓶中，以30%乙醇稀釋至刻度。分別吸取上述對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以色譜峰面積對(duì)樣品進(jìn)樣濃度作曲線，得回歸方程為:Y= 58 728.41X+132.419，r=0.999 9，結(jié)果表明:在7.26～36.30 μg/mL濃度范圍內(nèi)，葛根素峰面積值與進(jìn)樣濃度有良好的線性關(guān)系。

測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定。

2.1.2 提取物干膏收率的測(cè)定取提取物在105℃干燥至恒重，稱量，按原藥材量計(jì)算出干膏率。

2.1.3 水提正交試驗(yàn)選擇加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間三個(gè)因素，每因素三個(gè)水平，選用L9(34)正交表進(jìn)行工藝優(yōu)選，因素水平見表1。

表1 水提工藝因素水平

按處方比例準(zhǔn)確稱取藥材495 g，平行兩份，其中川芎、羌活、蒼術(shù)、乳香、沒藥，加8倍量水提取揮發(fā)油，提取揮發(fā)油后的藥渣和濾液與處方中的其它藥材一并加入圓底燒瓶中按表2進(jìn)行試驗(yàn)，以干膏率和葛根素提取量(權(quán)重值分別為70%，30%)作為試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果見表2。由表2和表3分析可知，煎煮次數(shù)與時(shí)間為顯著性因素，且B＞C，而A無(wú)顯著影響。從表2中可以看出，最佳直觀工藝為A3B3C3。B3與B2、C3與C2相當(dāng)，從經(jīng)濟(jì)角度應(yīng)選

表2 水提取正交試驗(yàn)方案及結(jié)果

B2和C2;A無(wú)顯著影響，從生產(chǎn)實(shí)際考慮，優(yōu)選A1，故優(yōu)選工藝為A1B2C2，即:用8倍量水提取2次，每次2 h。注:F0.025(2，2)=39.00;F0.05(2，2)=19.00。

表3 水提工藝方差分析

2.1.4 水提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)按處方比例準(zhǔn)確稱取藥材495 g，按最佳工藝A3B3C3和優(yōu)選工藝A1B2C2分別制備3批樣品，以干膏率和葛根素提取量作為試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行比較，測(cè)定結(jié)果見表4。

表4 水提最佳工藝與優(yōu)選工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果比較

由表4可以看出A3B3C3工藝中葛根素提取量、干膏率略高于A1B2C2，但兩種工藝無(wú)明顯差異。因A1B2C2工藝節(jié)能，省時(shí)，效率高，所以確定最佳工藝為:8倍量水提取2次，每次2 h。

2.2 川芎等提取揮發(fā)油工藝的優(yōu)選

將川芎、蒼術(shù)、羌活、乳香和沒藥五味藥材粉碎成粗粉［3－5］，參照《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版(一部)附錄XD，測(cè)定揮發(fā)油的收油率。本實(shí)驗(yàn)以收油率為指標(biāo)，對(duì)加水量和提取時(shí)間進(jìn)行了考察。

收油率=揮發(fā)油提取量(mL)/藥材量(g)×100%

2.2.1 加水量考察按處方比例準(zhǔn)確稱取川芎等5味藥材，混合粉碎成粗粉，提取揮發(fā)油時(shí)間為4 h，以收油率為指標(biāo)，結(jié)果見表5。4倍量水的收油率與其它倍量水的收油率有較大差異，

表5 揮發(fā)油提取加水量考察表

而6、8、10、12倍量水的收油率相互之間無(wú)明顯差異，為節(jié)省能源，確定加水量為8倍量。

2.2.2 提取時(shí)間考查按處方比例準(zhǔn)確稱取川芎等5味藥材，混合粉碎成粗粉，分別加8倍量水提取揮發(fā)油，并記錄不同時(shí)間的累積收油率，結(jié)果見表6。

表6 提油時(shí)間與收油率考查結(jié)果

結(jié)果表明，4 h的平均收油率為0.93%，為節(jié)省時(shí)間、能源，確定揮發(fā)油提取時(shí)間為4 h。

2.2.3 揮發(fā)油提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)按處方比例準(zhǔn)確稱取川芎等5味藥材250 g，分別制備3批樣品，根據(jù)優(yōu)選工藝，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表7。經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)表明，所確定的揮發(fā)油提取工藝基本穩(wěn)定。

表7 揮發(fā)油提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

2.3 揮發(fā)油包合工藝

2.3.1 飽和水溶液法制備揮發(fā)油包合物正交試驗(yàn)對(duì)影響較明顯的工藝條件:揮發(fā)油與β－環(huán)糊精的投料配比、包合溫度、包合時(shí)間3個(gè)因素進(jìn)行了考察，每因素取3個(gè)水平，見表8。

表8 揮發(fā)油包合工藝因素

精密稱取一定量的β－環(huán)糊精，加入適量的蒸餾水，制成飽和水溶液后，冷至室溫。在恒溫磁力攪拌器上慢慢滴加精密量取的揮發(fā)油無(wú)水乙醇溶液，在適當(dāng)溫度下攪拌規(guī)定的時(shí)間后，置冰箱中冷藏24 h，抽濾，用少量蒸餾水及石油醚洗滌包合物，至無(wú)揮發(fā)油氣味，40℃干燥至恒重，即得揮發(fā)油β－環(huán)糊精包合物［6］。選用L9(34)正交表，以包合物收率、油利用率和含油率(權(quán)重值分別為50%，25%和25%)為指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)選，結(jié)果見表9。

2.3.2 揮發(fā)油包合物收率、油利用率及含油率的計(jì)算

表9 揮發(fā)油包合正交試驗(yàn)方案及結(jié)果

含油率(X3)=包合物中實(shí)際含油量(g)/包合物重量(g)×100%

由表9和表10分析可知，顯著性因素為油與β－環(huán)糊精的比例，且A＞B＞C。優(yōu)選工藝為A1B2C2，即油與β－環(huán)糊精的比例為1∶6，30℃攪拌2 h。

表10 揮發(fā)油包合工藝方差分析

2.3.3 揮發(fā)油包合工藝驗(yàn)證試驗(yàn)取3份揮發(fā)油各1 mL，按優(yōu)選工藝為A1B2C2制備包合物，測(cè)定各指標(biāo)，結(jié)果見表11。

表11 揮發(fā)油包合工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

結(jié)果表明，優(yōu)選的揮發(fā)油包合工藝條件穩(wěn)定、可行。

3 結(jié)論

3.1 川芎、蒼術(shù)、羌活，乳香和沒藥5味藥材富含揮發(fā)油，且是發(fā)揮藥效的主要成分，故在進(jìn)行制劑研究時(shí)對(duì)以上5味藥材進(jìn)行了揮發(fā)油提取研究。由于揮發(fā)油具有味苦、易揮發(fā)損失等特點(diǎn)，故對(duì)其進(jìn)行β－環(huán)糊精包合，可使液體粉末化，有效減少揮發(fā)油的揮散，保證了揮發(fā)油的利用率，并提高療效。

3.2 葛根等十六味藥材所含有效成分多易溶于水，本實(shí)驗(yàn)中采用HPLC測(cè)定葛根素的含量，具有專屬性好、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選了水提工藝，為工業(yè)化生產(chǎn)提供了可靠的參考數(shù)據(jù)。

［1］中國(guó)藥典［S］.一部.2005:624－625.

［2］遲霽菲，張國(guó)剛.高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地葛根中葛根素的含量［J］.中南藥學(xué)，2006，4(4):307－309.

［3］朱雪榮.蒼術(shù)揮發(fā)油的提取與β－環(huán)糊精包合研究［J］.中國(guó)藥師，2007，10(7):646－648.

［4］張斌，唐偉中.九味羌活顆粒提取工藝的優(yōu)化研究［J］.江西科學(xué)，2005，23(6):747－749，767.

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R284.1

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1001－1528(2010)04－0675－03

2009－01－15

買買提·吐爾遜(1971－)，男(維吾爾族)，講師，碩士，從事中藥分析。Tel:15822683766 E－mail:maimaiti@mail.nankai.edu.cn

*通訊作者:王懷松(1982－)，男，博士研究生，中藥分析及色譜分離科學(xué)。Tel:13752516422 E－mail:wanghuaisong@mail.nankai.edu.cn