鼠曲草化學(xué)成分研究

謝建祥， 王海東， 林偉青*

（1.江西省兒童醫(yī)院，江西　南昌　330006；2.江西省人民醫(yī)院，江西　南昌　330006）

［成分分析］

鼠曲草化學(xué)成分研究

謝建祥1， 王海東2， 林偉青2*

（1.江西省兒童醫(yī)院，江西南昌330006；2.江西省人民醫(yī)院，江西南昌330006）

目的 研究鼠曲草的化學(xué)成分。方法 鼠曲草的乙醇提取物依次經(jīng)石油醚和乙酸乙酯萃取，再經(jīng)硅膠柱色譜法、Sephadex LH-20柱色譜法等進(jìn)行分離純化，并通過波譜技術(shù)及理化性質(zhì)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果 從鼠曲草中分離得到8個(gè)化合物，分別為β-谷甾醇（1），蘆?。?），槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3），異澤蘭黃素（4），5-羥基-6，7，3′，4′-四甲氧基黃酮（5），槲皮素（6），木犀草素（7）和芹菜素（8）。結(jié)論 其中化合物5為首次從鼠曲草屬植物中分離得到，化合物8為首次從該植物中分離得到。

鼠曲草；乙醇提取物；化學(xué)成分；異澤蘭黃素；5-羥基-6，7，3′，4′-四甲氧基黃酮；芹菜素

鼠曲草Gnaphlium affine D.Don又名佛耳草、清明菜、白艾，系菊科鼠曲草屬植物，具有降血脂、降血糖、降血壓、抗衰老、消炎抑菌、增強(qiáng)免疫力等多種功效［1-2］。清明節(jié)前后，民間廣泛利用鼠曲草嫩尖葉加工餌料，故有“清明菜”之稱。為更好地開發(fā)利用該資源，闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)該植物化學(xué)成分進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，從中分離得到8個(gè)化合物，分別鑒定為：β-谷甾醇（1），蘆?。?），槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3），異澤蘭黃素（4），5-羥基-6，7，3′，4′-四甲氧基黃酮（5），槲皮素（6），木犀草素（7）和芹菜素（8）。

1　儀器與材料

Yanaco MP-s3顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（未校正，日本Yanaco公司），Bruker ARX-300/600核磁共振儀（TMS內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司），LCQ Advantage型LC-MS質(zhì)譜儀測(cè)定（美國(guó)Thermofinnigan公司），薄層色譜及柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠），葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia公司），所用試劑均為分析純。

藥材于2009年5月采集自江西省靖安縣，并由江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院龔千峰教授鑒定，標(biāo)本存放于江西省兒童醫(yī)院。

2　提取與分離

將7.5 kg鼠曲草藥材粉末置于滲漏桶中，用95%乙醇浸提7 d，重復(fù)3次，合并提取液并減壓濃縮至無醇味，得總浸膏910 g?？偨嗯c適量水混懸，然后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯部分（179 g）利用硅膠柱層析分離純化，以石油醚-丙酮梯度洗脫（60∶1→1∶1），得到7個(gè)亞組分（EA 1～EA7）。EA3組分經(jīng)硅膠柱層析（石油醚-乙酸乙酯，20∶1→10∶1）得化合物1（200 mg）。EA4用硅膠柱層析（石油醚-乙酸乙酯，10∶1→4∶1）和Sephadex LH-20（EtOH）法，得到化合物4（20 mg）和5（32 mg）。EA 6采用Sephadex LH-20（乙醇）柱層析得化合物6（8 mg），7（24 mg）和8（40 mg）。EA7通過RP-18硅膠柱（MeOHH2O，20∶1→10∶1）和Sephadex LH-20（乙醇）依次層析，得到化合物2（22 mg）和3（10 mg）。

3　結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色針晶（乙酸乙酯），mp 139～140℃。薄層層析TLC檢測(cè)Rf值和顯色行為與β-谷甾醇對(duì)照品一致，與β-谷甾醇對(duì)照品混合后，熔點(diǎn)不下降，故鑒定為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

化合物2：黃色粉末（甲醇），mp 176～178℃。鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，酸水解檢出葡萄糖和鼠李糖。1H-NMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：12.58（1H，s，5-OH），6.18（1H，brs，H-6），6.37（1 H，brs，H-8），7.54（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.52（1H，dd，J=8.7，2.0 Hz，H-6'），6.84（1H，d，J=8.7 Hz，H-5′），5.34（1H，d，J=6.3 Hz，H-1′），4.37（1H，brs，H-1″），0.99（3H，d，J=6.0 Hz，Rha-CH3）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：156.4（C-2），133.8（C-3），177.6（C-4），161.5（C-5），99.1（C-6），164.5（C-7），93.8（C-8），156.9（C-9），104.5（C-10），121.3（C-1′），115.2（C-2′），144.9（C-3′），148.5（C-4′），116.3（C-5′），121.3（C-6′），101.2（glc-1），74.3（glc-2），76.5（glc-3），70.1（glc-4），76.2（glc-5），67.1（glc-6），100.8（rha-1），70-5（rha-2），70.7（rha-3），72.0（rha-4），68.5（rha-5），17.8（rha-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］報(bào)道的蘆丁基本一致，故鑒定化合物2為蘆丁。

化合物3：黃色粉末（甲醇），mp 225～227℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性。1HNMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：12.58（1H，s，5-OH），7.58（1H，d，J=1.8 Hz，H-2′），7.56（1 H，dd，J=8.8，1.8 Hz，H-6′），6.84（1 H，d，J=8.8 Hz，H-5′），6.38（1H，d，J=1.5 Hz，H-8），6.20（1 H，d，J=1.5 Hz，H-6），5.47（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：156.3（C-2），133.6（C-3），177.6（C-4），161.7（C-5），98.8（C-6），164.5（C-7），93.6（C-8），156.5（C-9），104.4（C-10），121.3（C-1′），115.4（C-2′），144.8（C-3′），148.6（C-4′），116.5（C-5′），121.6（C-6′），100.8（C-1″），74.2（C-2″），77.7（C-3″），70.4（C-4″），76.6（C-5″），61.2（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：黃色固體，ESI-MS m/z 345［M+ H］+（分子式C18H16O7）。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，提示存在酚羥基，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，三氯化鋁反應(yīng)陽性，提示該化合物為黃酮類化合物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.64（1H，dd，J=2.1，8.5 Hz，H-6′），7.52（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.08（1H，d，J=8.6 Hz，H-5′），6.93（1H，s，H-3），6.61（1H，s，H-8），3.87（6-OCH3），3.84（3′-OCH3），3.76（4′-OCH3）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：182.6（C-4），163.8（C-2），157.7（C-7），153.2（C-5），152.9（C-9），152.6（C-4′），149.4（C-3′），131.8（C-6），123.4（C-1′），120.4（C-6′），112.1（C-5′），109.8（C-2′），104.6（C-10），103.8（C-3），94.8（C-8），60.4，56.3，56.2（each OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5-6］報(bào)道的異澤蘭黃素（eupatilin）基本一致，故鑒定化合物4為5，7-二羥基-6，3′，4′-三甲氧基黃酮，即異澤蘭黃素。

化合物5：黃色晶體，C19H18O7。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.50（1H，dd，J=8.4，1.6 Hz，H-6′），7.31（1H，d，J=1.6 Hz，H-2′），6.96（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.58（1H，s，H-8），6.53（1H，s，H-3），3.91（3H，s，OCH3），3.95（3H，s，OCH3），3.96（3H，s，OCH3），3.97（3H，s，OCH3）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：164（s，C-2），104.4（d，C-3），182.5（s，C-4），153.2（s，C-5），132.7（s，C-6），158.7（s，C-7），90.6（d，C-8），153.2（s，C-9），106.1（s，C-10），123.8（s，C-1′），111.2（d，C-2′），149.3（s，C-3′），152.3（s，C-4′），108.8（d，C-5′），120.1（d，C-6′），60.8（OCH3），56.3（OCH3），56.1（OCH3），56.0（OCH3）；ESI-MS m/z 356［M-H］-。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道［7］的5-hydroxy-6，7，3′，4′-tetramethoxyflavone（HTF）基本一致，故鑒定化合物5為5-羥基-6，7，3′，4-四甲氧基黃酮。

化合物6：黃色粉末，mp 313～315℃，ESIMS m/z 301［M-H］-，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。1HNMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.48（1H，5-OH），7.67（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.52（1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.41（1H，d，J=1.6 Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.6 Hz，H-6）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8-9］報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故確定該化合物為槲皮素。

化合物7：黃色粉末，mp＞300℃，TLC紫外燈下顯色，噴AlCl3有黃色熒光，提示可能為黃酮。EI-MS m/z 286（M+，100），258，229，153，134。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.41（1H，dd，J=7.6，2.0 Hz，H-6′），7.39（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.88（1H，d，J=7.6 Hz，H-5′），6.66（1H，s，H-3），6.44（1H，brs，H-8），6.18（1H，brs，H-6）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：181.7（C-4），164.3（C-7），163.9（C-2），161.5（C-9），157.3（C-5），149.8（C-4′），145.8（C-3′），121.4（C-6′），119.0（C-1′），116.0（C-5′），113.3（C-2′），103.6（C-10），102.8（C-3），98.9（C-6），93.9（C-8）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10-11］報(bào)道的木犀草素（luteolin）一致。

化合物8：淡黃色粉末，mp＞300℃，TLC紫外燈下顯色，噴AlCl3有黃色熒光，提示可能為黃酮。EI-MS出現(xiàn)分子離子峰m/z270（M+，100），碎片峰為242、153、121。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.95（1H，5-OH），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.78（1H，s，H-3），6.50（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.20（1H，d，J= 1.2 Hz，H-6）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：181.9（C-4），164.3（C-2），164.0（C-7），161.6（C-5），161.3（C-4′），157.5（C-9），128.7（C-2′，C-6′），121.3（C-1′），116.2（C-3′，C-5′），103.8（C-10），103.0（C-3），99.0（C-6），94.2（C-8）。其波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11-12］報(bào)道的芹菜素（apigenin）一致。

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Chem ical constituents of Gnaphlium affine

XIE Jan-xiang1， WANG Hai-dong2， LINWei-qing2*
（1.Jiangxi Proυincial Children's Hospital，Nanchang 330006，China；2.Jiangxi Proυincial People's Hospital，Nanchang 330006，China）

AIM To study the chemical constituents of Gnaphlium affine.METHODS 95%ethanolic extract of G.affine was extracted with petroleum ether and ethyl acetate in turn and then was separated extensively by silica gel，Sephadex LH-20 chromatography.Their structures were elucidated by means of spectral data analysis. RESULTS Eight compoundswere isolated and identified asβ-sitosterol（1），rutin（2），quercetin-3-O-β-D glucopyranoside（3），eupatilin（4），5-hydroxy-6，7，3′，4′-tetramethoxyflavone（5），quercetin（6），luteolin（7）and apigenin（8）.CONCLUSION Compound 5 is isolated from the genus for the first time.Compound 8 is isolated from this plant for the first time.

Gnaphalium affine D.Don；ethanolic extract；chemical constituent；eupatilin；5-hydroxy-6，7，3′，4′-tetramethoxyflavone；apigenin

R284.1

A

1001-1528（2015）03-0553-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.020

2014-03-15

謝建祥，教授，主任醫(yī)師，研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合。E-mail：xiejianx@gmail.com

林偉青 Tel：13576107806，E-mail：lwq1977@126.com