陳皮不同提取工藝橙皮苷提取率分析

蔡慶順， 鐘小群， 余 華

(1.江西省婦幼保健院，江西南昌330006;2.江西省藥物研究所，江西南昌330029)

陳皮為蕓香科植物橘Citrμs reticμlata Blanco及其栽培變種的干燥熟果皮［1］。富含揮發(fā)油如α-側(cè)柏烯、α-三茚烯、辛醛、α-水芹烯等，含量達(dá)1.5% ～2.0%。另還含橙皮苷，新橙皮苷、柑橘素、右旋檸檬烯、枸櫞醛麝香草酚、β-谷甾醇、對(duì)羥福林及其它3種黃酮等成分。具有理氣健脾，燥濕化痰的功效。用于胸脘脹滿，食少吐瀉，咳嗽痰多等癥。其提取工藝一般為提取揮發(fā)油后再水煎煮、直接水煎煮、乙醇回流或滲漉等方法，一般用中國(guó)藥典的檢測(cè)成分橙皮苷為指標(biāo)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。作者亦以橙皮苷為指標(biāo)對(duì)陳皮進(jìn)行系統(tǒng)的提取工藝研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用上述工藝提取藥材，橙皮苷的提取率均比較低，大部分的橙皮苷依然殘留在陳皮藥渣中;對(duì)其中的水提取工藝進(jìn)行了過(guò)程監(jiān)控，發(fā)現(xiàn)各過(guò)程中橙皮苷的提取率很低，大部分還殘留在藥渣里;作者分析了2005年后發(fā)表的多篇相關(guān)文獻(xiàn)資料，發(fā)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)中成藥中橙皮苷最大提取率為從3%至30%，顯示用橙皮苷為指標(biāo)成分來(lái)控制中成藥質(zhì)量有不妥之處。

1 儀器與試藥

儀器:高效液相色譜儀(大連依利特P200Ⅱ.高壓恒流泵;大連依利特UV200Ⅱ紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器;千譜色譜工作站)。色譜柱:Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×200 mm，大連依利特)。

對(duì)照品:橙皮苷(購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所。供含量測(cè)定用，編號(hào)為110721-200512)。陳皮藥材:購(gòu)于本省南華醫(yī)藥公司。試劑:流動(dòng)相所用溶劑為色譜純，其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)方法 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-醋酸-水(30∶4∶66)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備 取相當(dāng)生藥材0.1～1.5 g的供試品粉末或供試品溶液，精密稱(chēng)定(或量取)。粉末置圓底燒瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流30 min，放冷，密塞，精密稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得;溶液至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱(chēng)橙皮苷對(duì)照品適量，用甲醇制成每1 mL中401.76 μg對(duì)照品溶液。從對(duì)照品溶液中吸取 0.25、0.5、1.0、1.5、2、10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列對(duì)照品溶液。分別吸取上述對(duì)照品系列溶液各10 μL，在相同色譜條件下測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程。結(jié)果回歸方程為:y=1216247.201x+5731.9，r=0.9996，說(shuō)明橙皮苷進(jìn)樣量在0.1004～0.8035 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

2.3 供試品的制備

2.3.1 不同提取工藝提取的供試品制備 取經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)合格的陳皮生藥材500 g若干份。采用如下工藝進(jìn)行提取，平行2份。工藝1:水煎煮法(12倍水煎煮2 h，3次，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至4000 mL，備用);工藝2:提取揮發(fā)油法(加8倍水提取揮發(fā)油5 h后，濾出藥液，藥渣再加12倍水煎煮2 h，2次，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至4000 mL，備用);工藝3:70%乙醇回流法(12倍70%乙醇回流2 h，3次，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至4000 mL，備用);工藝4:70%乙醇滲漉法(藥材粉碎成粗粉，加70%乙醇浸泡24 h后滲漉，收集滲漉液至濾液幾乎無(wú)色，約20倍生藥量，回收乙醇，濃縮至4000 mL)，依上述法進(jìn)行橙皮苷含量測(cè)定，并分別計(jì)算轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見(jiàn)表1。分別收集各藥渣，烘干，粉碎稱(chēng)定重量，依上述法進(jìn)行橙皮苷含量測(cè)定，并分別計(jì)算殘留率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 陳皮藥材不同提取工藝含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

表2 陳皮藥材不同提取工藝后藥渣中的橙皮苷含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

2.3.2 水提取工藝各過(guò)程樣品的制備 取經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)合格的 陳皮生藥材500 g，加12倍水煎煮2 h，3次，濾過(guò)，濾液分別濃縮至4000 mL，2000 mL、1500 mL，分別取出50 mL備用;藥渣烘干，粉碎成細(xì)粉，稱(chēng)定重量;除備用外的濾液合并(相當(dāng)藥材490 g)，濃縮至500 mL時(shí)，加乙醇調(diào)含醇量為50%，放置24 h，濾過(guò)，沉淀烘干，粉碎，稱(chēng)定重量(45.5 g);上清醇液1500 mL，取20 mL備用，余下醇液，回收乙醇后濃縮得清膏(相對(duì)密度為1.20，60℃)，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，稱(chēng)定重量(120.2 g)，將上述的各個(gè)樣品溶液、藥渣粉末、沉淀粉末、浸膏粉末依法測(cè)定橙皮苷含量，記錄HPLC色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 陳皮水提醇沉工藝中各過(guò)程的含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果顯示:水煎煮第1次、與第2次、第3次的提取率幾乎相似為6%左右，3次總的提取率為18.94%，而藥渣中的橙皮苷含量依然達(dá)到69.097 mg/g，相當(dāng)于80.83%的橙皮苷還殘留在藥渣里，說(shuō)明陳皮藥材的提取工藝單純以橙皮苷含量為檢測(cè)指標(biāo)是不合適的。

2.4 對(duì)2005年后發(fā)表的一些文獻(xiàn)資料進(jìn)行分析處理，以藥典規(guī)定陳皮的橙皮苷最低含量為3.5%計(jì)，計(jì)算了含陳皮中成藥橙皮苷最大提取率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)最大提取率從3.65%至31.78%，還有一些不可信的數(shù)據(jù)，說(shuō)明流通中的相關(guān)中成藥橙皮苷含量限度參差不齊，橙皮苷作為控制藥品質(zhì)量的指標(biāo)是不妥的。結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

3.1 本文采用的HPLC法測(cè)定橙皮苷含量，是參照中國(guó)藥典2005年版一部陳皮項(xiàng)下的方法，流動(dòng)相做了適當(dāng)調(diào)整，對(duì)照品濃度及供試品濃度是原標(biāo)準(zhǔn)的十分之一左右，目的是使樣品在能達(dá)到有效分離，峰型好。標(biāo)準(zhǔn)曲線研究也顯示橙皮苷進(jìn)樣量在0.1004～0.8035 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

3.2 各提取工藝是常規(guī)工藝，亦為中成藥制備中常采用的方法。不同工藝含量測(cè)定結(jié)果顯示:用常規(guī)工藝，常規(guī)溶劑及常規(guī)用量很難將橙皮苷從陳皮藥材中提取出來(lái)，用橙皮苷作為指標(biāo)來(lái)指示陳皮的提取過(guò)程作者認(rèn)為不妥。

表4 一些含陳皮藥材的中成藥橙皮苷含量測(cè)定結(jié)果

3.3 水提取工藝的過(guò)程監(jiān)控及HPLC圖顯示:橙皮苷與其相鄰未知峰的比例(以峰高之比來(lái)表示)不是恒定的:藥材比例最大，第1次的提取物中比例最小，第2次提取物比例較第1次大，第3次提取物較第2次大，在藥渣中的比例最大，說(shuō)明橙皮苷提取率不及其相鄰成分。

3.4 文獻(xiàn)資料中的一些相關(guān)中成藥橙皮苷含量結(jié)果分析顯示:最大提取率為3.65%至31.78%，結(jié)果相差比較大。作者認(rèn)為陳皮為價(jià)格便宜的常用藥材，橙皮苷含量還都比較高，都會(huì)足量投料，但是成品中的橙皮苷含量的確不會(huì)很高，成品質(zhì)量的好壞不能以橙皮苷含量高低來(lái)確定。

［1］中國(guó)藥典［S］.一部.2005，132.

［2］傅 軍，陳曉穎，李煥丹，等.保和口服液中橙皮苷的HPLC測(cè)定［J］.中藥材，2005，28(12):1115-1116.

［3］蔣 平，王文清，王 晨.高效液相色譜法測(cè)定保和口服液中橙皮苷含量［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25(8):780-781.

［4］錢(qián)星文，何 雁，羅曉健，等.高效液相色譜法測(cè)定藿香正氣制劑中橙皮苷的含量［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，13(3):38-39.

［5］祝德秋，羅啟劍，崔 嵐.舒膽顆粒的研制與質(zhì)量控制［J］.中國(guó)藥師，2005，8(3):206-208.

［5］蘇健俊，丁 野.婦科白帶片中橙皮苷的含量測(cè)定［J］.中國(guó)藥業(yè)，2005，14(11):34-35.

［7］段 瑞.高效液相色譜法測(cè)定四季感冒片中橙皮苷含量［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2006，33(3):356.

［8］金 陽(yáng).反相高效液相色譜法測(cè)定解痙鎮(zhèn)痛酊中橙皮苷的含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，4(4):37-40.

［9］張?jiān)螺x，王冬梅，王安達(dá)，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定益胃口服液中芍藥苷和橙皮苷的含量［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，8(8):495-498.

［10］李 方，張清波，張孝晨.高效液相色譜法測(cè)定止嗽片中橙皮苷的含量［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2007，35(5):37-40.

［11］樸春香，金東日，張善玉.HPLC法測(cè)定金果飲咽喉片中橙皮苷的含量［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，4(23):86-87.