組織染色中ＨＥ染色法的改良

李愛紅

[摘要]目的：比較改良蘇木素伊紅(HE)染色法與傳統(tǒng)染色法的染色效果。方法：分別用傳統(tǒng)染色法和改良染色法對(duì)組織切片合細(xì)胞圖片進(jìn)行染色，進(jìn)行比較。結(jié)果：改良染色法較傳統(tǒng)染色法，染色液中沉淀更少，無氧化膜，染色時(shí)間短，不需過濾，使用期限長，染色效果好。結(jié)論：改良染色法克服了傳統(tǒng)染色法的缺點(diǎn)，有利于切片質(zhì)量的提高：

[關(guān)鍵詞]組織染色；HE染色：改良

[中圖分類號(hào)]R446[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1674-4721(2009)05(b)-054-02

在病理組織切片染色中，蘇木素伊紅(HE)染色是其最基本、最常用的一種染色方法，在病理組織制片中占有很重要的位置，HE染色的質(zhì)量優(yōu)劣直接影響病理診斷的準(zhǔn)確性。HE染色中，染色液是決定染色效果和切片質(zhì)量最為重要的因素之一。在長期的實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的HE染液配方有下列弊端，如染液配制步驟復(fù)雜、易形成氧化膜、配方中某種試劑用量不合理產(chǎn)生沉淀、染液有效期短等，這些弊端其嚴(yán)重影響切片質(zhì)量及病理診斷的質(zhì)量。筆者經(jīng)過實(shí)踐摸索，參照文獻(xiàn)資料，在傳統(tǒng)HE染液的原配制方法的基礎(chǔ)上作了一些改良，經(jīng)過比較，明顯提高了染色質(zhì)量，現(xiàn)報(bào)道如下：

1材料與方法

1.1經(jīng)典染液(1000mI)配制

硫酸鋁鉀100g，蒸餾水950mI，加熱溶解；蘇木素5g，無水乙醇50ml；紅色氧化汞1g。配制方法：用蒸餾水溶解硫酸鋁鉀成A液，再倒入已用無水乙醇溶解的蘇木素B液中混合，加熱煮沸1min，冷卻，待溶液不沸騰時(shí)緩慢加入紅色氧化汞1g，繼續(xù)加熱至溶液變紫紅色，冷卻后過濾。使用之前加入16mI冰醋酸。

1.2改良染液(1000 ml)的配制

蘇木素2g，硫酸鋁5g，碘酸鉀0.2g，95％乙醇250ml。蒸餾水700 ml，丙三醇50 ml，檸檬酸0.3 g。配制方法：將蘇木素溶入乙醇充分搖勻?yàn)锳液；將硫酸鋁溶于蒸餾水中，成為飽和B液；將A液與B液混合、搖勻，將氧化劑碘酸鉀加入混合液中，充分搖勻，放置5min后，依次加入中和劑丙三醇和促染劑檸檬酸，充分混合后可使用。

1.3方法

取脫落細(xì)胞學(xué)涂片和病檢組織的石蠟切片，分為兩組，分別用上述兩種染液對(duì)每組在同一時(shí)間、同一染色條件下進(jìn)行染色，對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

2結(jié)果

對(duì)比觀察發(fā)現(xiàn)，改良染液具有明顯優(yōu)越性，見表1。

3討論

蘇木素伊紅染色是組織胚胎學(xué)和病理學(xué)中最常用的染色方法，其中染細(xì)胞核的蘇木素是HE染色過程中的關(guān)鍵，蘇木素染色的好壞決定著細(xì)胞核的著色深淺和著色質(zhì)量。也決定了切片的質(zhì)量，進(jìn)而可以影響對(duì)切片和細(xì)胞涂片的觀察，影響診斷的正確性，因此意義重大。在臨床病理診斷中使用最多的是經(jīng)典Harris蘇木素染液，一直沿用至今，但其在配制中存在以下問題：①蘇木素用量大且易產(chǎn)生大量的氧化物漂浮于染液表面，沾污切片，而且不易洗干凈，以致影響切片的染色質(zhì)量，不利于鏡檢；②使用的氧化劑為氧化汞，汞為對(duì)生物有毒重金屬，易造成環(huán)境污染，在生物體內(nèi)蓄積，進(jìn)而對(duì)人體健康造成傷害；③配制過程需要加熱煮沸，操作不安全；④配制過程復(fù)雜，而且不易掌握氧化程度，配制的染色液染色效果常不理想。相對(duì)比，改良以后的蘇木素染液，其優(yōu)越之處在于：①蘇木素用量少，用藥量得到節(jié)約，每次僅用2g能配制成1000ml染液，分裝成500甜兩瓶，可染片6000余張。②染色效果優(yōu)良，普遍適用于切片和細(xì)胞學(xué)各種涂片。③配制中不需要加熱煮沸，安全性好。④用碘酸鉀代替了有毒的氧化汞作為氧化劑，而且可以很容易的控制氧化程度。

蘇木素能發(fā)揮染料作用的關(guān)鍵，是其變成真正的染料蘇木紅，而這一轉(zhuǎn)變過程的關(guān)鍵是氧化過程，氧化過程的控制決定了蘇木素染液的質(zhì)量。由于氧化汞在水中和乙醇中的溶解性都非常差，所以其作為氧化劑，氧化過程不易控制。氧化不充分，其染色能力差；過度氧化則染液表面會(huì)出現(xiàn)一層氧化膜，該氧化膜非常容易引起切片污染。相比之下，氧化劑碘酸鉀是水溶性氧化劑，在與蘇木素氧化過程中呈均勻反應(yīng)，持續(xù)性增強(qiáng)是其氧化還原作用的特點(diǎn)，加之沒有氧化膜的形成，所以也減少了對(duì)切片的污染，且費(fèi)用比使用氧化汞低廉，最重要的是碘酸鉀無毒性，還能大大減少染色廢液對(duì)環(huán)境的污染月。應(yīng)用丙三醇作為中和劑，可防止氧化過度；用硫酸鋁代替硫酸鋁鉀作為媒染劑，用枸櫞酸作為促染劑都是保證染液氧化程度適中的有力措施，這樣就能進(jìn)一步有效地防止染液表面氧化膜及沉渣形成，不用過濾就可長期貯存，且減少對(duì)切片和涂片的污染。改良的蘇木素染液克服了經(jīng)典染液的缺點(diǎn)，有利于切片質(zhì)量的提高。