ＨＰＬＣ法測定人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的含量

吳衛(wèi)濤

【摘要】 目的 建立HPLC法測定人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的含量。方法 采用依利特C₁₈色譜柱，甲醇-水(20∶80) 為流動(dòng)相，流速：1.0 ml/min；檢測波長318 nm，柱溫為30℃。結(jié)果 甲硝唑在0.025~0.150 mg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好線性(r=0.999 9)，平均加樣回收率(n=6)為100.67%，RSD為0.33%。結(jié)論 該方法準(zhǔn)確、可靠，與標(biāo)準(zhǔn)法比較，結(jié)果較為滿意，可用于人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的含量測定。

【關(guān)鍵詞】HPLC法；人工牛黃甲硝唑膠囊；甲硝唑；含量測定

Determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules by HPLC

WU Wei-tao.Anyang Institute for Food and Drug Control，Anyang，Henan 455000，China

【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules.Methods Elite C₁₈column was used with a mobile phase composed of methanol-water (20∶80) at a flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was 318nm and the temperature of column was 30℃.Results The calibration curve of metronidazole was linear in the range of 0.025~0.150 mg/ml，r=0.999 9.The average recovery rate was 100.67%,RSD=0.33%(n=6).Conclusion This method is accurate，realiable and can be used for determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules.

【Key words】HPLC；Galculus bovis and metronidazole capsules；Metronidazole；Content determination

人工牛黃甲硝唑膠囊為復(fù)方制劑，是臨床常用的一種抗厭氧菌藥，主要用于急性智齒冠周炎、局部牙槽膿腫、牙髓炎、根尖周炎等的治療。國家標(biāo)準(zhǔn)［1］采用紫外分光光度法測定其含量,該方法影響結(jié)果因素較多。本文介紹的高效液相色譜法,采用優(yōu)化的色譜條件,使甲硝唑的含量測定操作簡便,專屬性高,重現(xiàn)性好,可以替代紫外分光光度法。

1 材料

美國Waters高效液相色譜儀，包括2695型泵，PDA2996型二極管陣列檢測器，全自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱；Mettler AE-240型電子天平； SECOMAM UVIKON XL型雙光束掃描紫外/可見分光光度計(jì)。甲硝唑?qū)φ掌?批號(hào)100191-200305，中國藥品生物制品檢定所)；人工牛黃甲硝唑膠囊(丹東市通遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司 批號(hào)20071111；中諾藥業(yè)石家莊有限公司 批號(hào)08105701；大同市云華藥業(yè)有限公司 批號(hào)080401)。甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱為依利特C₁₈柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(20∶80)，流速為1.0 ml/min，檢測波長318 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10 μl。在此條件下，理論塔板數(shù)按甲硝唑峰計(jì)算不低于10 000，與其他峰的分離度符合要求。色譜見圖1。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取甲硝唑?qū)φ掌?5 mg，置100 ml量瓶中，用適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液5 ml，置25 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量(約相當(dāng)于甲硝唑25 mg)，置100 ml量瓶中，用適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻,濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置25 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液。

2.2.3 空白溶液測試 取流動(dòng)相經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后進(jìn)樣，結(jié)果表明，空白對(duì)測定無干擾。

2.3 線性關(guān)系 精密量取對(duì)照品貯備液2.5，5，7.5，10，15 ml，分別置25 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得含甲硝唑0.025、0.050、0.075、0.100、0.150 mg/ml的對(duì)照品溶液，分別量取10 μl進(jìn)樣，測定峰面積，以濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=31 455 221.938 7×C-57 565.324 3，r=0.999 9，線性范圍為0.025~0.150 mg/ml。

2.4 精密度試驗(yàn) 在上述色譜條件下，取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的RSD為0.16%。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取樣品(批號(hào) 08105701)5份，按照樣品含量測定的方法操作，測得其平均含量RSD為0.09%。

2.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)：08105701)細(xì)粉適量(約相當(dāng)于甲硝唑25 mg)6份，置于100 ml量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置于25 ml量瓶中，再分別精密加入“2.2.1”中的對(duì)照品貯備液5 ml，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。照樣品含量測定項(xiàng)下的方法測定加樣回收率，測得甲硝唑的加樣回收率(n=6)，結(jié)果見表1。

2.7 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn) 選定的色譜條件下，每2 h進(jìn)樣一次，8 h內(nèi)樣品中甲硝唑含量測定的RSD為0.36%(n=5)，表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 樣品含量測定 按“2.2.2”項(xiàng)下制備樣品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過后取10 μl進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。并與國家標(biāo)準(zhǔn)［1］規(guī)定的紫外分光光度法(UV法)測定的結(jié)果比較。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 采用二極管陣列檢測器，在318 nm波長處主峰有最大吸收，溶劑峰干擾較小，故選為測定波長。流動(dòng)相的選擇是參考文獻(xiàn)［2］而確定的，配制簡單，此流動(dòng)相比例能使主峰在較短時(shí)間內(nèi)出峰，且分離較好。

3.2 采用高效液相色譜法，操作簡單易行，線性關(guān)系良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，與紫外分光光度法測定的結(jié)果無明顯差異，可用于人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的含量測定。

參考文獻(xiàn)

［1］ 國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(人工牛黃甲硝唑膠囊).WS-10001-(HD-0204)-2002.

［2］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典二部.化學(xué)工業(yè)出版社，2005:123-124.