正交實驗優(yōu)選丹參酮ⅡＡ的提取方法

劉蒙蒙　趙　亮　張　萌　劉麗麗

【摘要】目的：探討丹參藥材中丹參酮ⅡA的最佳提取工藝條件。方法：以丹參酮ⅡA為定量指標(biāo)成分，確定提取時間，提取次數(shù)，乙醇倍量及濃度為影響因素，并以L9(33)正交實驗安排實驗。結(jié)果：最佳提取工藝條件為：10倍量85%乙醇浸泡丹參30分鐘后,超聲提取1次，每次40分鐘。結(jié)論：優(yōu)化的提取條件效率高，可增加藥材的利用率。

【關(guān)鍵詞】提取;丹參酮；正交試驗

【中圖分類號】R282.7【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)08-0016-01

丹參酮是丹參中具有橙黃色和橙紅色特征的脂溶性二萜類化合物，按其結(jié)構(gòu)的不同可分為丹參酮I、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB、隱丹參酮、二氫丹參酮I、羥基丹參酮、丹參酮甲酯、異丹參酮、異隱丹參酮等10多種成分，其中丹參酮ⅡA是丹參中脂溶性成分的代表，丹參酮ⅡA還具有天然抗氧化作用，大量的研究表明在抗腫瘤、心腦血管疾病、抗菌消炎等方面均有良好的治療作用^[1～3]。我們采用超聲提取法，運用正交試驗，并通過紫外分光光度計測定含量，以含量為考察指標(biāo)，對丹參酮ⅡA的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。

1儀器與試藥

1.1儀器SHIMADZU UV-2550型紫外可見分光光度儀(日本島津)，KQ-300E型超聲機（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥丹參藥材購于錦州市藥材公司，經(jīng)本院中藥庫鑒定為正品；丹參酮ⅡA對照品（編號110766-200518，中國藥品生物制品檢定所）；所用試劑均為分析純，水為去離子水。

2方法

2.1丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)試液配制精密稱取干燥至恒重的丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品1.1mg置10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,搖勻。

2.2測定波長的選擇準(zhǔn)確移取丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)試液0.4ml置于10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,搖勻。以氯仿為空白對照，變化波長在260nm～600nm，測定吸光度A。結(jié)果表明在270nm時，具有最大A值，所以確定270nm為最大吸收。

2.3丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制^[4]精密吸取丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)試液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml分別置于10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,搖勻。以氯仿為空白對照，在270nm波長處測定吸收度,以吸收度A、濃度C繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。并求出回歸方程為:A=0.0879C+0.0107(r=0.9999)。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的穩(wěn)定性將所配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液放置24h，按2.2項所示方法重新測定吸光度，發(fā)現(xiàn)結(jié)果沒有變化，即吸收曲線穩(wěn)定。

2.5提取方法取丹參粗粉5g,按正交試驗表L9(33)安排實驗,浸泡30min,抽濾收集濾液,量取濾液體積。精密吸取濾液0.25ml置與25ml容量瓶中，加氯仿至刻度，搖勻。以氯仿為空白對照在270nm波長處測定吸收度，根據(jù)回歸方程，將測得的吸光度代入回歸方程A=0.0879C+0.0107(r=0.9999)，計算丹參酮ⅡA濃度，以100g丹參中含丹參酮ⅡA的量g為單位計算，求得丹參酮ⅡA的含量。

2.6正交試驗設(shè)計根據(jù)丹參酮ⅡA的理化性質(zhì)，選擇在提取中三個影響因素，見表1。采用三因素水平的正交試驗表L9(33))設(shè)計試驗方案。

3結(jié)果

3.1根據(jù)表1進(jìn)行正交實驗結(jié)果見表2。為了確定顯著性因子，我們對表2進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗，見表3。

直觀分析和方差分析結(jié)果表明,三種因素對提取結(jié)果影響大小依次為A>C>B。A因素和C因素對超聲波提取法提取丹參酮ⅡA有顯著意義(<0.05)，B因素對提取丹參酮ⅡA影響沒有顯著意義，由此得出丹參超聲法提取的最佳工藝為A₂B₁C₃,即以10倍量85%乙醇浸泡丹參30min后,超聲提取1次，每次40min。

4討論

產(chǎn)地不同的丹參藥材,由于種屬不同，其所含丹參酮ⅡA的量也不相同。2000版《中國藥典》中規(guī)定丹參以丹參酮ⅡA為指標(biāo),含量不得少于0.2%。

目前，工業(yè)上提取丹參主要以熱回流法為主，該方法提取時間長且提取率低。丹參酮類物質(zhì)屬于熱敏性物質(zhì)，長時間受熱易發(fā)生分解，傳統(tǒng)的熱回流法不僅浪費能源還使熱敏性的丹參酮發(fā)生了分解^[5-7]。本文采用超聲波提取法提取丹參酮ⅡA，與許多傳統(tǒng)的提取方法相比，具有能提高有效成分的溶出速度和溶出次數(shù)，縮短提取時間，節(jié)省溶劑的消耗等優(yōu)點。

參考文獻(xiàn)

[1]蔡麗萍，習(xí)志剛，楊紅.丹參酮的藥理作用和臨床研究進(jìn)展[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2008，24(3):321-324.

[2]王冬，田亞平，姜英雁，等．丹參酮ⅡA抑制Hela細(xì)胞生長及誘導(dǎo)凋亡的體外實驗研究[J]．中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2007，17(6)：676-678．

[3]孫學(xué)剛，賈玉華．丹參酮ⅡA對大鼠缺氧及正常心肌細(xì)胞內(nèi)鈣、膜電位和線粒體膜電位的影響[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，9(9)：21．

[4]蔡杰,蘇美霞,吳日明,等.正交試驗法優(yōu)化總丹參酮提取工藝的實驗研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2005，21(12):1493-1494.

[5]凌海燕，魯學(xué)照，趙詠麗，等．丹參水溶性成分的研究概況[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1997，11(1)：76-81．

(收稿日期：2009.02.01)