高效液相色譜法測定梔子柏皮顆粒中梔子苷含量

陶臘梅 承 偉

[摘要] 目的 采用高效液相色譜法測定梔子柏皮顆粒中梔子苷的含量。方法 色譜柱為KromasilC18柱(150×4.6 mm,5μm),流動相為:乙腈∶水(14∶86),流速:1.0 ml·min-1,檢測波長為238 nm。結(jié)果 加樣回收率為96.28%;RSD為1.21%。梔子苷在0.30～0.27μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9993),結(jié)論 采用高效液相色譜法測定梔子柏皮顆粒中梔子苷的含量,結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好。

[關(guān)鍵詞] 梔子柏皮顆粒;梔子苷;高效液相色譜法;含量

[中圖分類號] R284.1[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B[文章編號] 1004-8650(2009)12-031-01

梔子柏皮顆粒方源自張仲景的《傷寒論》,是以梔子、黃柏、炙甘草3味中藥經(jīng)適當(dāng)加工而成的中藥制劑,用于治療濕熱發(fā)黃、熱重于濕之陽黃癥[1]。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道梔子苷的含量測定方法有薄層色譜—紫外分光光度法[2], 薄層色譜掃描法[3～5], 高效液相色譜法[6]等。本文采用高效液相色譜法測定其主藥梔子中的梔子苷含量。本方法簡便易行,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可用于梔子柏皮顆粒的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

1.1儀器

FL2200液相色譜儀(浙江溫嶺福立分析儀器有限公司),BS223S型電子天平(北京賽多利斯系統(tǒng)有限公司)。

1.2試藥

梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純,其他試劑為分析純;梔子柏皮顆粒(自制)。

2試驗(yàn)方法

2.1色譜條件

KromasilC18柱(150×4.6 mm,5μm),流動相為乙腈∶水(14∶86),流速為1.0 ml·min-1,檢測波長為238 nm。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取梔子苷對照品5.0 mg,置50 ml量瓶中,加95%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻得對照品儲備液。精密量取對照品儲備液1.5 ml,置10 ml量瓶中,加95%乙醇溶解并稀釋至刻度、搖勻,得對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取梔子柏皮顆粒約1.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加95%乙醇25 ml,精密稱定,超聲處理20 min,放冷,以95%乙醇補(bǔ)足損失的量,濾過,精密量取續(xù)濾液1 ml,置25 ml量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度、搖勻,即得供試品溶液。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

在上述色譜條件下,分別吸取對照品溶液2、6、10、14、18 μl進(jìn)樣,記錄峰面積。以梔子苷進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo),回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線:Y=2.0×106X-20438(r=0.9993)。結(jié)果表明:梔子苷在0.03～0.27 μg范圍內(nèi),進(jìn)樣量與其峰面積成良好線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

取對照品溶液(濃度為15.24 μg/ml),連續(xù)進(jìn)樣6次,每次10 μl,記錄色譜圖,計(jì)算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,RSD為0.31%,說明方法精密度良好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品,按照樣品測定法重復(fù)測定6次,計(jì)算RSD為0.80%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液一份,室溫下放置,分別于0、2、4、8、12、24 h,精密吸取10 μl注入液相色譜儀,測定,計(jì)算RSD為0.81%,表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8專屬性試驗(yàn)

取梔子的陰性樣品,按供試品制備方法制備。在上述色譜條件下,分別吸取陰性供試品、對照品、供試品及空白溶劑10 μl進(jìn)樣,記錄色譜圖,結(jié)果表明,其他成分對梔子苷的測定無干擾。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收率法,分別取已知含量的樣品(含量26.54 mg/g)約0.5 g(n=9),精密稱定,分別加入梔子苷對照品溶液(1.10 mg/ml)10 ml、12 ml和14 ml,加95%乙醇稀釋至約25 ml,照“供試品溶液的制備”項(xiàng)下同法操作,得回收率試驗(yàn)溶液,精密吸取10 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,計(jì)算回收率。平均回收率為96.28%,RSD為1.21%。

3樣品含量測定

分別取本品3批各1.0 g,精密稱定,按供試品項(xiàng)下制備方法制備供試液,精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以外標(biāo)法計(jì)算樣品中梔子苷的含量。結(jié)果見下表。

4討論

本文采用高效液相色譜法測定梔子柏皮顆粒中梔子苷的含量,方法簡單,操作方便,重現(xiàn)性好,可以作為梔子柏皮顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定方法。

參考文獻(xiàn):

[1] 苗潤田.傷寒論教程[M].北京:科學(xué)出版社,2000:167.

[2] 許良,王青虎,特木爾巴根.薄層—紫外法測定如達(dá)六散中梔子甙含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,1999,10(9):662.

[3] 方肇年,熊義濤,葉小川,等.薄層掃描法測定石淋止痛劑中梔子甙的含量[J].中國中醫(yī)藥科技,1997,4(4):227.

[4] 梁生旺,張廣強(qiáng),李永軍,等.薄層掃描法測定清肝利膽注射液中4種有效成分的含量[J].藥物分析雜志,1995,15(1):24.

[5] 郜迎晨.用薄層掃描法測定清熱解毒注射液中梔子甙[J].中國藥業(yè),1999,8(9):27.

[6] 徐以亮,李松.高效液相色譜法測定梔子濃縮顆粒中梔子苷含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2000,11(10):881-882.

(收稿日期2009-11-04)