高效液相色譜法測定石杉堿甲緩釋微丸的含量

王　聰

[摘要] 目的: 建立石杉堿甲緩釋微丸含量測定方法。方法:采用反相高效液相色譜法,以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相,乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀(20:80,含0.02 mol/L三乙醇胺)為流動相;檢測波長:312 nm;流速:1 ml/min;進樣量:20 μl。結(jié)果:利用選定的色譜條件,可使石杉堿甲與其酸、堿分解產(chǎn)物、熱分解產(chǎn)物、石杉堿乙等雜質(zhì)達到有效分離。石杉堿甲的回收率為99.8%。在濃度為5.0～15.0 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為:A=2 022.96+16 192.5C,r=0.999 1。結(jié)論:本方法操作簡便,準確,重現(xiàn)性好,為該制劑的含量測定提供了依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 石杉堿甲;微丸;高效液相色譜法;含量

[中圖分類號]R286[文獻標識碼]B [文章編號]1674-4721(2009)07(b)-139-02

石杉堿甲是從石杉科植物蛇足石杉中分離出的生物堿之一。臨床主要應(yīng)用于治療老年性癡呆癥。石杉堿甲片劑規(guī)格為50 mg/ 片,劑量為1～2 片/次,每天3 次。為了提高患者的順應(yīng)性,更好地發(fā)揮藥效,筆者將石杉堿甲制成1天服用1次的緩釋微丸,使藥物作用時間延長,療效好,患者順應(yīng)性提高。本文在文獻基礎(chǔ)上,建立了石杉堿甲的RP-HPLC含量測定方法,以方便制劑的研究和質(zhì)量的控制。

1 儀器與試藥

HR-120電子天平(日本島津);TU-1901紫外可見分光光度計(北京普析);高效液相色譜儀,日本島津LC-10ATVP;石杉堿甲原料(含量:99.5%;浙江溫嶺制藥廠),石杉堿甲精制品(含量:99.7%;浙江溫嶺制藥廠),石杉堿甲緩釋微丸(自制);試驗中所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測波長的確定

稱取石杉堿甲對照品適量,用甲醇配置成每1毫升中含10 μg的溶液,按紫外分光光度法(《中國藥典》2000版二部附錄IVA)在200～400 nm波長范圍內(nèi),繪制紫外光譜,石杉堿甲在231 nm和312 nm處有最大吸收?？瞻纵o料可能在231 nm波長有干擾,所以將測定波長確定為312 nm。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氫鉀(20∶80含0.02 mol/L三乙醇胺)為流動相;檢測波長:312 nm;流速:l ml/min;進樣量:20 μl。理論塔板數(shù)按石杉堿甲計應(yīng)不低于1 500。

2.3 準確度試驗

石杉堿甲對照品溶液的配制:精密稱取石杉堿甲對照品約10 mg,置10 ml量瓶中,以乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻。

按處方比例精密稱取石杉堿甲對照品溶液及輔料分別配制成每包約含石杉堿甲0.08、0.1、0.12 mg的三種樣品各3份,按含量測定項下所述方法測定回收率。結(jié)果見表1。

2.4 線性關(guān)系試驗

精密稱取石杉堿甲對照品,以流動相配制成每毫升約含5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μg的溶液,分別精密量取上述各溶液20 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,將測定結(jié)果以峰面積為縱坐標,濃度為橫坐標進行線性回歸,計算回歸方程為:A=2 022.96+16 192.5C,r=0.999 1。

2.5 精密度試驗結(jié)果

可取線性關(guān)系試驗中,中間濃度的溶液,重復(fù)進樣5次,記錄峰面積,結(jié)果石衫堿甲峰面積的RSD[2]為1.26%,表明方法的精密度良好[1]。

2.6方法的專屬性試驗

2.6.1取石杉堿甲約10 mg,加0.5 mol/L硫酸10 ml,加熱煮沸約10 min,使分解再取該溶液1 ml以流動相稀釋成每毫升約含20 μg的溶液。按上述色譜條件測定。

2.6.2取石杉堿甲約10 mg,加0. 5 mol/L氫氧化鈉10 ml,加熱煮沸約10 min,使分解再取該溶液1 ml以流動相稀釋成每毫升約含20 μg的溶液。按上述色譜條件測定[2-3]。

2.6.3取石杉堿甲約10 mg,直火加熱使分解,再取該破壞后的殘渣以流動相稀釋成每毫升約含20 μg的溶液。按上述色譜條件測定。

試驗結(jié)果表明,石杉堿甲在用上述條件破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì),可在本色譜系統(tǒng)得到較好的分離,說明本色譜系統(tǒng)適用于石杉堿甲緩釋微丸的質(zhì)量控制。

2.7 測定法

取本品10個包裝,傾出內(nèi)容物,研細。精密稱取該細粉適量(約相當于石杉堿甲0.1 mg),置錐形瓶中,精密加入流動相10 ml使溶解搖勻,濾過,濾液作為供試液。另精密稱取105℃干燥至恒重的石杉堿甲對照品10 mg,以流動相稀釋成每1毫升含10 μg的溶液,作為對照液。分別精密量取供試液和對照液各20 μl,注入液相色譜儀中,按上述條件測定,外標法計算,即得。

3 討論

為了使主成分與相關(guān)的雜質(zhì)達到有效分離,我們主要調(diào)整了流動相中強沖洗組分乙腈的比例:如20%、25%、30%,觀察石杉堿的分離情況。結(jié)果表明增大乙腈的比例石杉堿甲的保留時間由原來的約10 min縮小至約5 min。這樣將不利于與相關(guān)的雜質(zhì)的分離[4]。而將乙腈的比例定為20∶80則比較合適。

[參考文獻]

[1]劉小林,程春榮,曹威,等.石杉堿甲的藥理作用與臨床應(yīng)用研究進展[J].醫(yī)藥導報,2006,25(2):90-95.

[2]孫遠明,余紅英,楊躍生,等. HPLC法測定蛇足石杉中石杉堿甲含量[J].中草藥,2002,33(12):1078-1079.

[3]孫建緒,翁駿,高永良.高效液相色譜法測定石杉堿甲片的含量[J].解放軍藥學雜志,2002,18(4):52-53.

[4]趙志剛,哈伯因.石杉堿甲片[J].中國新藥雜志,1998,7(3):193.

(收稿日期:2009-06-01)