血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠放療增敏作用及HDAC7/c-Myc通路調(diào)節(jié)作用研究

[摘要]目的：研究血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠放療增敏作用及HDAC7/c-Myc通路的調(diào)節(jié)作用。方法：采用腋下注射B16-F10細(xì)胞法建立黑素瘤小鼠模型，并隨機(jī)分為黑素瘤模型組、血府逐瘀湯低、中、高劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組，10只/組。血府逐瘀湯低、中、高劑量組分別按照12.5、25、50 g/kg灌胃血府逐瘀湯，1次/天，放療組按照3 Gy每只放射治療2次后，按照4 Gy每只放射治療，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組同時(shí)進(jìn)行放射治療和血府逐瘀湯治療，連續(xù)干預(yù)6周，采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒測定小鼠血清血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）、IL-17、IL-6水平，測定腫瘤體積、腫瘤抑制率、腫瘤微血管密度、腫瘤細(xì)胞凋亡率、腫瘤組織的HDAC7、c-myc mRNA和蛋白水平。結(jié)果：與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平、腫瘤體積、腫瘤微血管數(shù)、腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA及蛋白水平顯著降低（P＜0.05），腫瘤抑制率、腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.05），且隨著血府逐瘀湯劑量的增加，各項(xiàng)指標(biāo)變化更顯著；與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平、腫瘤體積、腫瘤微血管數(shù)、腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA及蛋白水平顯著降低（P＜0.05），腫瘤抑制率、腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.05）。結(jié)論：血府逐瘀湯能夠顯著抑制黑素瘤小鼠腫瘤生長，促進(jìn)小鼠黑素瘤組織細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤微血管的生成，調(diào)節(jié)黑素瘤小鼠炎癥反應(yīng)，進(jìn)而抑制小鼠黑素瘤病情進(jìn)展，同時(shí)，血府逐瘀湯能夠顯著增強(qiáng)黑素瘤小鼠放療效果，提高黑素瘤放療敏感性，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)HDAC7/c-Myc通路有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]血府逐瘀湯；黑素瘤；HDAC7/c-Myc通路；放療；腫瘤抑制

[中圖分類號(hào)]R282" " [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A" " [文章編號(hào)]1008-6455（2025）03-0001-06

Effect of Xuefu Zhuyu Decoction on Radiotherapy Sensitization and Regulation of HDAC7/c-Myc Pathway in Melanoma Mice

XU Sijia1， WANG Na2， LI Congying2， SHI Yu2

（ 1.Department of Dermatology， Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine， Shanghai 200025， China; 2. Department of Medical Beauty， Shanghai Dermatology Hospital， Shanghai 200050， China ）

Abstract： Objective" To study the radiosensitization effect of Xuefu Zhuyu Decoction on melanoma mice and the regulation of HDAC7/c-Myc pathway. Methods" The melanoma mouse model was established by armpit injection of B16-F10 cells， and divided into melanoma model group， Xuefu Zhuyu decoction low-dose， medium-dose and high-dose groups， radiotherapy group and Xuefu Zhuyu decoction combined radiotherapy group， 10 mice per group. The low， medium and high dose groups of Xuefu Chuyu Decoction were respectively given the dose of 12.5 g/kg， 25 g/kg and 50 g/kg by intragastric administration， once a day; the radiotherapy group was received radiotherapy at the dose of 3Gy for 2 times， and then was given radiotherapy at 4Gy. Xuefu Zhuyu Decoction combined radiotherapy group was treated with both radiotherapy and Xuefu Zhuyu Decoction， intervention for 6w. The serum levels of VEGF， IL-17 and IL-6 of the mice were measured by enzyme-linked immunosorbent kit， The tumor volume， tumor inhibition rate， tumor microvascular density， tumor cell apoptosis rate， HDAC7， c-myc mRNA and protein levels were measured. Results" Compared with melanoma model group， serum VEGF， IL-17， IL-6 levels， tumor volume， tumor microvascular number， HDAC7， c-myc mRNA and protein levels of mice in Xuefu Zhuyu Decoction dose group， radiotherapy group and Xuefu Zhuyu Decoction combined radiotherapy group were significantly decreased （P＜0.05）. Tumor inhibition rate and tumor cell apoptosis rate were significantly increased （P＜0.05）， and with the increase of the dose of Xuefu Zhuyu Decoction， the changes of all indexes were more significant. Compared with Xuefu Zhuyu decoction high-dose group and radiotherapy group， serum VEGF， IL-17， IL-6 levels， tumor volume， tumor microvascular number， HDAC7， c-myc mRNA and protein levels of tumor tissue in Xuefu Zhuyu Decoction combined radiotherapy group were significantly decreased （P＜0.05）. Tumor inhibition rate and tumor cell apoptosis rate were significantly increased （P＜0.05）. Conclusion" Xuefuzhuyu Decoction can significantly inhibit the tumor growth of melanoma mice， promote the apoptosis of melanoma tissue cells in mice， inhibit the formation of tumor microvessels， regulate the inflammatory response of melanoma mice， and then inhibit the progression of melanoma disease in mice. Meanwhile， Xuefuzhuyu Decoction can significantly enhance the radiotherapy effect of melanoma mice and improve the radiotherapy sensitivity of melanoma mice， and the mechanism may be related to the regulation of the HDAC7/c-Myc pathway.

Key words： Xuefu Zhuyu decoction; melanoma; HDAC7/c-Myc channel; radiotherapy; tumor inhibition

黑素瘤是臨床中常見的皮膚惡性腫瘤，但由于前期臨床特征并不明顯，所以常常容易被忽略，隨著疾病進(jìn)展，瘤體可能表現(xiàn)為反復(fù)破潰，甚至出現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移、肝、肺等臟器轉(zhuǎn)移，影響患者生存質(zhì)量[1-2]，給患者及其家屬帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。近年來黑素瘤的發(fā)生率及死亡率在臨床中表現(xiàn)出逐年升高趨勢，放療是黑素瘤臨床常用的治療方法，然而其存在有效率低、不良反應(yīng)等缺點(diǎn)，且在臨床治療中常表現(xiàn)出敏感性降低，嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量[3]，因此黑素瘤治療藥物的研發(fā)仍是當(dāng)前的主要任務(wù)之一。HDAC7/c-myc通路是與細(xì)胞增殖、分化密切相關(guān)的信號(hào)通路，近年來研究發(fā)現(xiàn)HDAC7/c-myc通路與黑素瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]。血府逐瘀湯是以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，由中藥飲片制成的中藥制劑，近年來研究發(fā)現(xiàn)其在腫瘤治療，特別是黑素瘤的治療中有較大潛力，然而，血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤的作用及機(jī)制目前尚不清楚，所以本實(shí)驗(yàn)通過研究血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤的藥理作用及機(jī)制，為血府逐瘀湯的藥理研究及黑素瘤的治療藥物研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1" 材料和方法

1.1 藥品及試劑：血府逐瘀湯由桃仁（批號(hào)200908）12 g，赤芍（批號(hào)201011）、枳殼（批號(hào)201210）、甘草（批號(hào)200926）各6 g，紅花（批號(hào)190716）、當(dāng)歸（批號(hào)191019）、生地黃（批號(hào)210818）、牛膝（批號(hào)190523）各9 g，川芎（批號(hào)200913）、桔梗（批號(hào)210515）各4.5 g，柴胡（批號(hào)191017）3 g組成，中藥飲片購自北京同仁堂藥業(yè)公司，藥材飲片置于1 500 ml蒸餾水中浸泡1 h后煎煮40 min，過濾，將藥材殘?jiān)俅沃糜? 000 ml蒸餾水中煎煮30 min，過濾，合并2次濾液，蒸發(fā)濃縮，制成生藥含量為10 g/ml的制劑備用。蛋白測定試劑盒、化學(xué)發(fā)光液、TUNEL染色液購自北京索萊寶科技有限公司；PCR試劑盒購自沈陽萬類生物科技有限公司；CD31兔抗體、DAPI染色液、山羊抗兔二抗、HDAC7、c-Myc、GAPDH兔抗體購自艾博抗貿(mào)易有限公司；免疫染色封閉液、磷酸鹽緩沖液、抗熒光淬滅劑、VEGF、IL-17、IL-6ELISA試劑盒購自碧云天生物科技公司；PCR引物設(shè)計(jì)及合成由賽默飛世爾科技公司完成。

1.2 設(shè)備與儀器：IX83熒光倒置顯微鏡購自日本奧林巴斯公司；BioTek SynergyH1酶標(biāo)儀購自安捷倫細(xì)胞分析事業(yè)部；150i細(xì)胞培養(yǎng)箱購自賽默飛世爾科技公司；Gel Doc EZ凝膠成像儀購自美國BIO-RAD公司；TC1000-G PCR擴(kuò)增儀購自大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器股份公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞：60只雄性C57BL/6小鼠6～8周齡，體重18～20 g，購自上海交通大學(xué)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（滬）2018-0007，動(dòng)物房溫度20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～70%，明暗交替12 h。小鼠B16-F10黑素瘤細(xì)胞購自中科院上海細(xì)胞庫。

1.4 方法

1.4.1 造模：B16-F10細(xì)胞解凍后置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)增長期，調(diào)整細(xì)胞密度為1×107個(gè)/毫升，按照0.2毫升/只接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下，待小鼠荷瘤小鼠體積≥100 mm3視為造模成功[5]。

1.4.2 給藥：造模完成后，小鼠隨機(jī)分為黑素瘤模型組、血府逐瘀湯低、中、高劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組，10只/組。血府逐瘀湯低、中、高劑量組分別按照12.5、25、50 g/kg[6]（以生藥含量計(jì)）的劑量給予小鼠血府逐瘀湯灌胃，1次/天，放療組按照3 Gy每只的劑量進(jìn)行局部放射治療，3天/次，放療2次后，第3次按照4 Gy每只進(jìn)行放射治療[7]，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組對(duì)小鼠進(jìn)行局部放射治療的同時(shí)，按照50 g/kg（以生藥含量計(jì)）的劑量灌胃給予小鼠血府逐瘀湯，1次/天，連續(xù)干預(yù)6周，黑素瘤模型組灌胃給予生理鹽水。末次給藥24 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平的測定：斷頭法處死小鼠，取血至離心管，4℃靜置30 min，4℃，6 000 r/min離心10 min，取上清液，使用試劑盒測定VEGF、IL-17、IL-6水平。

1.5.2 小鼠腫瘤體積及腫瘤抑制率的測定：小鼠斷頭法處死后分離腫瘤組織，測量腫瘤組織長度，記為L，寬度記為W，計(jì)算腫瘤體積及腫瘤抑制率。腫瘤體積=L×W2×0.5。

1.5.3 小鼠腫瘤微血管密度的測定：小鼠斷頭法處死后取腫瘤組織，石蠟包埋后制成4μm切片，經(jīng)脫蠟及抗原修復(fù)后，使用免疫染色封閉液封閉，使用CD31兔抗體4℃孵育過夜，使用磷酸緩沖液清洗3次后，使用山羊抗兔二抗室溫避光孵育40 min，磷酸緩沖液再次清洗3次后，滴加DAPI室溫避光孵育5 min，滴加抗熒光淬滅劑，置于熒光顯微鏡下觀察拍照，進(jìn)行微血管計(jì)數(shù)。

1.5.4 小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率的測定：小鼠斷頭法處死后取腫瘤組織，石蠟包埋后制成4μm切片，使用TUNEL試劑盒染色后使用DAPI復(fù)染，置于顯微鏡下觀察拍照，計(jì)算腫瘤組織細(xì)胞凋亡率。細(xì)胞凋亡率=TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.5.5 小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA水平的測定：小鼠斷頭法處死后取腫瘤組織，使用試劑盒提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后，使用PCR試劑盒測定HDAC7、c-myc mRNA水平，引物序列見表1。反應(yīng)體系為：模版DNA 1 μl，正反向引物各0.8 μl，PCR Master Mix 10 μl，使用蒸餾水補(bǔ)充至20 μl；反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃起始變性3 min，94℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，共計(jì)30個(gè)循環(huán)，72℃最終延伸10 min，結(jié)果以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔct法測定HDAC7、c-myc mRNA相對(duì)水平。

1.5.6 小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc蛋白水平的測定：小鼠斷頭法處死后取腫瘤組織，組織裂解液充分裂解后，8 000 r/min，4℃離心10 min，取上清，使用蛋白含量測定試劑盒測定蛋白總含量，取相當(dāng)于40μg蛋白的上清液，依次經(jīng)電泳分離、轉(zhuǎn)膜后，使用脫脂牛奶室溫封閉1 h，分別使用GAPDH、HDAC7、c-myc兔抗體（1∶1 000稀釋）4℃孵育過夜，使用含吐溫的磷酸鹽緩沖液清洗3次，使用辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗（1∶2 000稀釋）室溫孵育1 h，再次清洗3次，使用化學(xué)發(fā)光液在凝膠成像儀中拍照，并以GAPDH為內(nèi)參，計(jì)算HDAC7、c-myc相對(duì)水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)使用SPSS 26.0軟件處理分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1 血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6的影響：結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平顯著降低（P＜0.05），且隨著血府逐瘀湯劑量的增加，小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平逐漸降低；與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平顯著降低（P＜0.05）。見表2。

2.2 血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠腫瘤體積及腫瘤抑制率的影響：結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組腫瘤體積顯著降低（P＜0.05），腫瘤抑制率顯著升高（P＜0.05），且隨著血府逐瘀湯劑量的增加，腫瘤體積逐漸降低，腫瘤抑制率逐漸升高；與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組腫瘤體積顯著降低（P＜0.05），腫瘤抑制率顯著升高（P＜0.05）。見表3。

2.3 血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠腫瘤微血管的影響：結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組微血管數(shù)顯著降低（P＜0.05），且隨著血府逐瘀湯劑量的增加，微血管數(shù)逐漸降低；與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組微血管數(shù)顯著降低（P＜0.05）。見圖1。

2.4 血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率的影響：結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.05），且隨著血府逐瘀湯劑量的增加，小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率逐漸升高；與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.05）。見圖2。

2.5 血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA的影響：結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA水平顯著降低（P＜0.05），且隨著血府逐瘀湯劑量的增加，小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA水平逐漸降低；與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA水平顯著降低（P＜0.05）。見表4。

2.6 血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc蛋白的影響：結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc蛋白水平顯著降低（P＜0.05），且隨著血府逐瘀湯劑量的增加，小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc蛋白水平逐漸降低；與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc蛋白水平顯著降低（P＜0.05）。見圖3。

3" 討論

黑素瘤作為臨床常見的皮膚惡性腫瘤，其發(fā)病早期無明顯臨床特征，但以表面不規(guī)則扇形皮損為臨床表現(xiàn)，同時(shí)隨著病情進(jìn)展，黑素瘤中期可表現(xiàn)為菜花狀瘤體，甚至破潰出血，并向周圍擴(kuò)散，晚期黑素瘤患者則表現(xiàn)為瘤體反復(fù)破潰，遷延不愈，并伴隨骨、肺、腦等多器官轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響患者生命質(zhì)量，甚至危及患者生命[8]。目前，黑素瘤的治療主要采用外科手術(shù)治療、藥物治療及放射治療等多種手段，然而，上述治療手段均存在有效率低、患者預(yù)后差、不良反應(yīng)多等缺點(diǎn)，所以黑素瘤治療藥物的研發(fā)仍是目前臨床的主要工作重點(diǎn)。放射治療是目前用于治療黑素瘤的主要手段之一，但由于在治療過程中腫瘤細(xì)胞敏感性降低，極易出現(xiàn)放療抵抗，尤佳等[9]研究表明，黑素瘤細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白及多種通路蛋白表達(dá)異常均會(huì)導(dǎo)致黑素瘤放療抵抗的發(fā)生；翟雪松等[10]臨床研究證實(shí)，單純放療聯(lián)合手術(shù)切除并不能降低頭頸部黏膜惡性黑素瘤患者死亡風(fēng)險(xiǎn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，所以在黑素瘤治療過程中，加快放療增敏藥物的研發(fā)可能是提高黑素瘤治療有效率的有效途徑和方法。

血府逐瘀湯是以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，由桃仁、紅花等中藥材制成的制劑，具有活血化瘀、行血止痛之功效，用于治療血瘀氣滯之癥。方中，桃仁味苦性平，起活血化瘀、消腫止痛之功，紅花味辛性溫，起散瘀止痛、活血消腫之功，兩者共為君藥，赤芍消腫止痛、清熱涼血，川芎活血行氣、祛風(fēng)止痛，牛膝利尿消腫、逐瘀通經(jīng)，共為臣藥，當(dāng)歸活血止痛，生地黃養(yǎng)陰生津、清熱涼血，桔梗開宣肺氣、枳殼理氣寬中、柴胡疏散退熱，疏肝解郁，共為佐藥，桔梗并能載藥上行，甘草調(diào)和諸藥，兩者共為使藥，全方共奏活血化瘀、行氣止痛之功效?，F(xiàn)代研究表明[11-12]，血府逐瘀湯對(duì)于宮頸癌、肺癌、肝癌均有顯著的治療作用，此外，血府逐瘀湯在腫瘤的常規(guī)治療中起到提高療效及降低不良反應(yīng)發(fā)生率的作用，劉春秋等[13]研究證實(shí)血府逐瘀湯能夠有效降低肺癌患者放療后不良反應(yīng)的發(fā)生率，降低肺纖維化的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)；趙悅欣等[14]臨床研究證實(shí)血府逐瘀湯能夠顯著降低鼻咽癌患者放療后口腔黏膜炎的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)；彭婷婷[15]研究發(fā)現(xiàn)，血府逐瘀湯能夠顯著提高非小細(xì)胞肺癌患者常規(guī)放化療有效率并降低不良反應(yīng)的發(fā)生。由此可見，血府逐瘀湯在腫瘤的常規(guī)放療中起到減毒增效的作用。因此，本實(shí)驗(yàn)通過研究血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤的治療作用及機(jī)制，為黑素瘤臨床治療方案的開發(fā)及血府逐瘀湯的藥理作用研究提供新的參考和依據(jù)。

VEGF、IL-17、IL-6在黑素瘤的發(fā)生及發(fā)展中起到重要作用，段文超等[16]研究表明，血清VEGF、IL-17水平與黑素瘤患者腫瘤組織微血管密度密切相關(guān)，血清VEGF、IL-17水平升高會(huì)加重黑素瘤患者病情進(jìn)展；張濛等[17]研究證實(shí)，血清VEGF水平是影響黑素瘤患者疾病進(jìn)展的重要危險(xiǎn)因素，血清VEGF水平升高嚴(yán)重影響患者疾病預(yù)后及生存狀態(tài)；房東亮等[18]研究表明，血清IL-6水平升高會(huì)誘導(dǎo)黑素瘤小鼠的腫瘤生長；吳越等[19]研究表明，血清IL-6水平影響黑素瘤小鼠體內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)，IL-6水平升高與腫瘤生長及腫瘤組織血管生成密切相關(guān)。由此可見，調(diào)節(jié)VEGF、IL-17、IL-6水平可能是抑制黑素瘤發(fā)生發(fā)展的有效途徑和方法。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平顯著降低，提示血府逐瘀湯能夠呈劑量依賴性顯著抑制黑素瘤小鼠血清VEGF、IL-17、IL-6水平，同時(shí)，與血府逐瘀湯高劑量組及放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組VEGF、IL-17、IL-6水平顯著降低，提示血府逐瘀湯能夠顯著調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)狀態(tài)，進(jìn)而抑制黑素瘤的生長，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

腫瘤微血管數(shù)是影響黑素瘤病情進(jìn)展的重要影響因素，腫瘤微血管數(shù)的升高嚴(yán)重影響黑素瘤患者疾病進(jìn)展及預(yù)后[20]。王鳳華等[21]研究表明，腫瘤微血管數(shù)與黑素瘤患者腫瘤體積、腫瘤分期、黑素瘤轉(zhuǎn)移侵襲強(qiáng)度密切相關(guān)；王悅申等[22]臨床研究證實(shí)，抑制黑素瘤患者腫瘤組織微血管密度能夠顯著提高化療效果，改善黑素瘤患者生活質(zhì)量，降低化療過程不良反應(yīng)率的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組小鼠腫瘤微血管數(shù)顯著降低，且與血府逐瘀湯高劑量組及單獨(dú)放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組腫瘤微血管數(shù)顯著降低，提示血府逐瘀湯聯(lián)合放療較單獨(dú)放療組，能夠呈劑量依賴性顯著抑制黑素瘤小鼠腫瘤微血管的生長，抑制腫瘤生長，進(jìn)而提高黑素瘤組織細(xì)胞凋亡率，抑制黑素瘤小鼠疾病進(jìn)展。

HDAC7/c-myc通路是與細(xì)胞增殖、分化等生理活動(dòng)密切相關(guān)的信號(hào)通路，近年來研究表明，HDAC7/c-myc通路與黑素瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。張益萌等[23]研究表明，HDAC7、c-myc水平的升高與黑素瘤C918細(xì)胞增殖活力及周期調(diào)節(jié)密切相關(guān)，而抑制HDAC7、c-myc蛋白水平能夠顯著抑制C918細(xì)胞增殖；Xu J等[24]研究表明c-myc水平與黑素瘤的增殖、遷移和侵襲密切相關(guān)；Mou K等[25]研究表明，抑制c-myc水平能夠顯著抑制黑素瘤細(xì)胞增殖和遷移。由此可見，調(diào)節(jié)HDAC7/c-myc通路相關(guān)蛋白水平可能是治療黑素瘤的有效途徑和方法。本研究結(jié)果表明，與黑素瘤模型組比較，血府逐瘀湯各劑量組、放療組及血府逐瘀湯聯(lián)合放療組小鼠腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA及蛋白水平顯著降低，且與單獨(dú)放療組比較，血府逐瘀湯聯(lián)合放療組腫瘤組織HDAC7、c-myc mRNA及蛋白水平降低更明顯，提示血府逐瘀湯能夠呈劑量依賴性的顯著抑制黑素瘤小鼠HDAC7/c-myc通路，同時(shí)，血府逐瘀湯能夠顯著增強(qiáng)放療對(duì)HDAC7/c-myc通路的抑制作用，進(jìn)而顯著誘導(dǎo)黑素瘤細(xì)胞凋亡，抑制黑素瘤的進(jìn)一步增長。由此可見，血府逐瘀湯能夠呈劑量依賴性的顯著抑制黑素瘤的進(jìn)展，促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞凋亡，抑制黑素瘤細(xì)胞的凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移能力，進(jìn)而能夠發(fā)揮對(duì)黑素瘤的治療作用。同時(shí)，與單純放療相比，血府逐瘀湯能夠顯著增強(qiáng)放療的臨床效果，進(jìn)而顯著抑制黑素瘤的疾病進(jìn)展，由此可見，血府逐瘀湯在抑制黑素瘤細(xì)胞增殖及侵襲的同時(shí)，能夠顯著增強(qiáng)放療效果，增強(qiáng)放療敏感性。

綜上所述，血府逐瘀湯能夠顯著抑制黑素瘤小鼠腫瘤生長，促進(jìn)小鼠黑素瘤組織細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤微血管的生成，調(diào)節(jié)黑素瘤小鼠炎癥反應(yīng)，進(jìn)而抑制小鼠黑素瘤病情進(jìn)展，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)HDAC7/c-Myc通路有關(guān)。

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[收稿日期]2023-09-01

本文引用格式：徐思嘉，王娜，李聰穎，等.血府逐瘀湯對(duì)黑素瘤小鼠放療增敏作用及HDAC7/c-Myc通路調(diào)節(jié)作用研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2025，34（3）：1-6.