β淀粉樣蛋白25－35對BV2細胞TREM2/NF－κB信號通路的影響

摘要 目的：探討不同濃度β－淀粉樣蛋白25－35（Aβ25－35）對小膠質(zhì)細胞髓樣細胞觸發(fā)受體2（TREM2）/核轉(zhuǎn)錄因子－κB（NF－κB）信號通路的影響。方法：將BV2細胞隨機分為5組，分別加入0、5、10、20、40 μmol/L的Aβ25－35，作用24、48 h，鏡下觀察細胞形態(tài)，CCK－8法測定細胞活性，酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）測定腫瘤壞死因子－α（TNF－α）表達，實時熒光反轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）測定NF－κBp65、 TREM2 mRNA表達。結(jié)果：顯微鏡下觀察干預(yù)48 h后Aβ25－35≥10 μmol/L細胞成片死亡，干預(yù)24 h后，CCK－8檢測顯示，不同濃度Aβ25－35干預(yù)BV2細胞的存活率均＞70%，ELISA和RT－PCR檢測顯示，Aβ25－35 20 μmol/L和40 μmol/L組促炎因子TNF－α和TREM2 mRNA的表達均明顯升高，Aβ25－35 20 μmol/L的NF－κB p65 mRNA表達明顯升高，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：Aβ25－35濃度20 μmol/L作用24 h，能夠激活小膠質(zhì)細胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，可能與TREM2/NF－κB信號通路的激活有關(guān)。

關(guān)鍵詞 阿爾茨海默??；炎癥反應(yīng)；BV2細胞；β－淀粉樣蛋白25－35，Aβ25－35；實驗研究

doi：10.12102/j.issn.1672－1349.2024.12.008

Effect of Aβ25－35 on TREM2/NF－κB Signaling Pathway in BV2 Microglia

ZHANG Xiuwen， NI Jingnian， WANG Zongliang， LI Ting， WEI Mingqing， SHI Jing

Dongzhimen Hospital， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100700， China

Corresponding Author SHI Jing， E－mail： sshijing87@163.com

Abstract Objective：To investigate the effects of different concentrations of beta－amyloid peptide 25－35（Aβ25－35） on triggering receptor expressed on myeloidcells 2（TREM2）/nuclear factor－κB（NF－κB） signaling pathway in microglia.Methods：BV2 cells were randomly divided into 5 groups，treated with 0，5，10，20，and 40 μmol/L Aβ25－35 for 24 h and 48 h.Cell morphology was observed under microscope，cell proliferation activity was determined by CCK－8 method，TNF－α expression was determined by enzyme－linked immunosorbent assay（ELISA）.The mRNA expression of NF－κB p65 and TREM2 were determined by reverse transcription－polymerase chain reaction（RT－PCR）.Results：Under the microscope，the cells died in slices after induction by" Aβ25－35≥10 μmol/L for 48 h.After 24 hours of intervention，the survival rate of BV2 cells treated with different concentrations of Aβ25－35 was ＞70%.Compared with the control group，the expression of pro－inflammatory cytokines TNF－α and TREM2 mRNA significantly increased in Aβ25－35 20，40 μmol/L，and the expression of NF－κB p65 mRNA significantly increased in Aβ25－35 20 μmol/L，the difference was statistically significant （P＜0.05）.Conclusion：The concentration of Aβ25－35 at 20 μmol/L for 24 h can activate microglia to induce inflammation，which may be related to the activation of TREM2/NF－κB signaling pathway.

Keywords Alzheimer′s disease; inflammation; BV2 cells; beta－amyloid peptide 25－35， Aβ25－35; experimental study

阿爾茨海默病（Alzheimer′s disease，AD）是導(dǎo)致癡呆的最常見原因，占癡呆病人總數(shù)的60%～80%［1］。目前研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)炎癥反應(yīng)與AD的發(fā)病關(guān)系密切，是導(dǎo)致AD發(fā)病的重要因素，并參與了AD發(fā)生的各個階段，這一過程依賴于先天免疫系統(tǒng)，其中主要為小膠質(zhì)細胞（microglia，MG）［2］。全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)，大部分AD的遺傳風(fēng)險為小膠質(zhì)細胞表達的髓樣細胞觸發(fā)受體2（TREM2）、CD33及磷脂酰肌醇結(jié)合網(wǎng)格蛋白裝配蛋白（PICALM）等一系列基因。在AD大腦中，大量激活的小膠質(zhì)細胞圍繞在神經(jīng)炎性斑附近［3］；且小膠質(zhì)細胞介導(dǎo)的細胞因子、趨化因子、蛋白酶和花生四烯酸及其代謝物等水平升高［4］。β－淀粉樣肽（Aβ）及其前體蛋白是強大的膠質(zhì)細胞激活劑，研究顯示，小膠質(zhì)細胞激活的程度直接依賴于Aβ的負(fù)載［5－6］，且Aβ通過激活小膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)加速AD的進程，Aβ25－35則具有極快的聚集特性和增強的神經(jīng)毒性。

核轉(zhuǎn)錄因子－κB（NF－κB）信號通路在小膠質(zhì)細胞的激活中發(fā)揮關(guān)鍵作用［7］。NF－κB可由Aβ和淀粉樣前體蛋白等多種因子調(diào)節(jié)。當(dāng)NF－κB通路被激活時，磷酸化的NF－κB二聚體分泌增加，并與DNA序列結(jié)合，激活的NF－κB信號通路可以發(fā)揮保護效應(yīng)，也可依據(jù)細胞類型、刺激物的閾值、持續(xù)時間等情況誘導(dǎo)神經(jīng)元變性和死亡。TREM2是一種主要表達于小膠質(zhì)細胞的脂質(zhì)受體，通過適配器DAP12傳遞細胞內(nèi)激活信號，促進其生存和增殖。研究顯示，TREM2可以通過下調(diào)BV2小膠質(zhì)細胞的NF－κB信號通路來抑制神經(jīng)炎癥［8］，認(rèn)為在AD早期處于高表達狀態(tài)。因此，炎性因子如腫瘤壞死因子－α（TNF－α）、白細胞介素（IL）－1β的表達，促炎因子的釋放、NF－κB通路的激活以及TREM2的表達升高是AD病程中神經(jīng)炎癥反應(yīng)的重要標(biāo)志。 小膠質(zhì)細胞是腦內(nèi)的固有免疫應(yīng)答細胞，在AD神經(jīng)免疫炎癥機制中占據(jù)主導(dǎo)作用，故本研究以小鼠小膠質(zhì)細胞BV2為研究對象，以Aβ25－35為誘導(dǎo)試劑，探討不同濃度Aβ25－35對BV2小膠質(zhì)細胞的TREM2/NF－κB信號通路的影響，為研究AD神經(jīng)炎癥反應(yīng)機制和抗炎治療奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和材料

小鼠小膠質(zhì)細胞系（BV2細胞株，由北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院腦三科提供），人工合成Aβ25－35（萬生昊天），DMEM培養(yǎng)基（HyClone，貨號SH40007.01），澳洲胎牛血清（Gibco，貨號10099－141），青－鏈霉素溶液（Gibco，貨號15140－122），細胞計數(shù)－8（CCK－8）試劑盒（Cell Counting Kit－8，日本同仁化工，貨號CK04），小鼠TNF－α酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）試劑盒（Solarbio，貨號SEKM－0034），總RNA提取試劑盒（天根生化，貨號DP419），F(xiàn)asting一步法除基因組cDNA第一鏈合成預(yù)混試劑（天根生化，貨號KR118－02），SuperReal熒光定量預(yù)混試劑增強版（SYBR Green）（天根生化，F(xiàn)P205－02），CO2恒濕培養(yǎng)箱（Esco，規(guī)格型號170L），超凈工作臺（蘇州金凈，型號JJ－CJ－1FD），離心機（Eppendorf，型號5804），倒置顯微鏡（Olympus，型號CKX41），多功能酶標(biāo)儀（BioTek，型號SYNERGY H1）。

1.2 實驗方法

1.2.1 試劑準(zhǔn)備

1）凝聚態(tài)Aβ25－35的制備：用943 μL無菌水溶解1 mg Aβ25－35，將Aβ25－35配制成1 mmol/L的儲存液，密封后放置于CO2恒濕培養(yǎng)箱中，37 ℃下孵育1周，制成聚集狀態(tài)的Aβ25－35，分裝后放置于－20 ℃冰箱中備用，使用時用基礎(chǔ)培養(yǎng)液稀釋成所需要的濃度。

2）完全培養(yǎng)基的配制：DMEM和胎牛血清（FBS）按9∶1的比例混合均勻，加入1%的青－鏈霉素溶液，密封后保存于4 ℃冰箱中。

1.2.2 細胞培養(yǎng)

將BV2細胞接種于含完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃恒溫及5%CO2恒濕的培養(yǎng)箱中，1 d或2 d更換1次新鮮培養(yǎng)液，當(dāng)細胞生長至80%～90%時進行消化傳代或分組處理。

1.2.3 實驗分組

不含Aβ25－35培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞為對照組，含不同濃度Aβ25－35培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞為實驗組，Aβ25－35處理細胞的濃度梯度為5 μmol/L組、10 μmol/L組、20 μmol/L組、40 μmol/L組。

1.2.4 形態(tài)觀察和細胞活力檢測

取對數(shù)生長期的細胞按6 000/孔的密度接種于96孔板中，放置于37 ℃恒溫、5%CO2恒濕的培養(yǎng)箱中過夜使其貼壁，實驗組分別加入含不同濃度Aβ25－35的培養(yǎng)基，每孔100 μL，設(shè)置對照組和無細胞的空白組，放置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育，24、48 h后顯微鏡下觀察并拍照，每孔加入10 μL的CCK－8試劑，包括無細胞的空白組，放置于37 ℃恒溫、5%CO2恒濕的培養(yǎng)箱中避光孵育1～2 h，使用酶標(biāo)儀于450 nm波長處讀取每孔的OD值，細胞存活率＝［（實驗孔OD值－空白孔OD值）/（對照孔OD值－空白孔OD值）］×100%。至少重復(fù)3次。

1.2.5 ELISA法檢測細胞上清中TNF－α的表達

BV2細胞接種于48孔板中，待長至孔底80%時，對照組加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基，實驗組加入含不同濃度Aβ25－35的培養(yǎng)基，37 ℃恒溫、5%CO2恒濕培養(yǎng)箱中孵育24 h后收集細胞培養(yǎng)上清，1 000 r/min，離心15 min，收集上清，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書的步驟操作，檢測細胞培養(yǎng)上清中TNF－α含量。

1.2.6 RT－PCR檢測細胞中NF－κB p65和TREM2 mRNA的表達

BV2細胞接種于6孔板中，待長至孔底80%時，對照組加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基，實驗組加入含不同濃度Aβ25－35的培養(yǎng)基，37 ℃恒溫、5% CO2恒濕培養(yǎng)箱中孵育24 h，棄去上清，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）清洗，總RNA的提取采用離心柱型，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將細胞總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后以引物為介導(dǎo)，再以cDNA為模板進行PCR擴增反應(yīng)。反應(yīng)體系的建立參照說明書。用相對定量 2－△△CT 法分析結(jié)果。引物序列見表1。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，符合正態(tài)分布且方差齊的數(shù)據(jù)用單因素方差分析，多組間比較采用最小顯著差異（LSD）檢驗；若不符合則進行對數(shù)轉(zhuǎn)化后使用方差分析；仍不符合則使用非參數(shù)檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Aβ25－35對細胞形態(tài)及活力的影響

鏡下觀察： Aβ25－35作用24 h后隨著濃度增高出現(xiàn)胞體增大、突起變短甚至消失、細胞形態(tài)呈圓形或桿狀，甚至呈阿米巴樣。詳見圖1。作用48 h后10、20、40 μmol/L細胞成片死亡，高倍鏡下可見明顯細胞碎片，成形細胞不足50%，故后續(xù)實驗不進行48 h相關(guān)檢測。詳見圖2。

Aβ25－35作用24 h后進行CCK－8活力檢測，結(jié)果顯示：40 μmol/L細胞的增殖活力較對照組下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），余濃度對BV2細胞活力的影響與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明并未呈現(xiàn)劑量依賴性下降。詳見表2。

2.2 Aβ25－35對TNF－α表達量的影響

ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清液中TNF－α的表達，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖3）。結(jié)果顯示：TNF－α的表達量在不同濃度Aβ25－35均呈現(xiàn)增高趨勢，在Aβ25－35≤20 μmol/L時存在劑量依賴，20 μmol/L和40 μmol/L的TNF－α表達量較對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），20 μmol/L組的表達量最高，見圖4。表明Aβ25－35能夠促使BV2細胞釋放TNF－α。

2.3 Aβ25－35對NF－κB p65、TREM2 mRNA表達的影響

NF－κB p65、TREM2及內(nèi)參β－actin擴增產(chǎn)物的溶解曲線為單一溶解峰，說明所得產(chǎn)物為特異性擴增產(chǎn)物。根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到NF－κB p65、TREM2基因及內(nèi)參β－actin基因表達的相對水平。結(jié)果顯示：與對照組相比，5 μmol/L組NF－κB p65和TREM2 mRNA表達明顯下降（P＜0.05），10、20、40 μmol/L組NF－κB p65和TREM2 mRNA表達均呈現(xiàn)增加趨勢，20 μmol/L組NF－κB p65 mRNA表達呈現(xiàn)明顯差異（P＜0.05），20、40 μmol/L組的TREM2 mRNA表達呈現(xiàn)明顯差異（P＜0.05），兩者均為20 μmol/L組表達量最高。詳見表3、表4。

3 討 論

在AD中，神經(jīng)炎癥不是一個被動由老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)激活的過程，而是與斑塊和纏結(jié)一樣促成發(fā)病機制。AD的病理特征引起炎癥反應(yīng)，包括Aβ1－42，過度磷酸化Tau蛋白（P－Tau）組成的神經(jīng)纖維纏結(jié)，或退化的神經(jīng)元，這些病理改變刺激神經(jīng)膠質(zhì)細胞產(chǎn)生促炎因子，包括TNF－α、IL－1β、IL－6，這些促炎因子又通過刺激神經(jīng)膠質(zhì)細胞和激活神經(jīng)膠質(zhì)細胞發(fā)揮雙重作用［9］。研究顯示，新型非甾體類抗炎藥tepoxalin明顯抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細胞中IL－1β和IL－6的合成，并通過抑制NF－κB通路發(fā)揮抗炎作用［10］。然而，非甾體類抗炎藥的臨床試驗并沒有取得良好的效果，甚至表明存在危害［11］。因此，探討Aβ對小膠質(zhì)細胞的激活機制是從細胞水平探討AD病理機制和藥理作用所必需的基礎(chǔ)研究。NF－κB通路是經(jīng)典炎癥激活通路，尸檢在退變神經(jīng)元和老年斑鄰近的神經(jīng)元及膠質(zhì)細胞內(nèi)檢測出NF－κB p65的免疫活性［12］。在小膠質(zhì)細胞中，Aβ沉積激活NF－κB信號通路，釋放促炎因子IL－1β、TNF－α等，促進神經(jīng)炎癥。TNF－α與NF－κB緊密相連，既是一種激活因子，又是NF－κB基因靶點的受體。在細胞中，TREM2缺乏會提高促炎因子水平［13］；AD病人的腦中以及APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠中的TREM2均為高表達［14－15］。因此，目前對TREM2在AD中發(fā)揮的作用仍存在爭議。值得注意的是，使用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)BV2細胞炎癥反應(yīng)模型時往往會出現(xiàn)TREM2的表達下降［16－17］，這明顯與AD這一疾病的病理改變相反。由Aβ組成的胞外老年斑是目前公認(rèn)的AD的典型病理特征之一［18］，參與了線粒體功能障礙、神經(jīng)細胞凋亡、神經(jīng)炎癥反應(yīng)等過程［19］，并認(rèn)為Aβ的沉積早于AD臨床表現(xiàn)幾十年，Aβ25－35因具有極快的聚集特性和增強的神經(jīng)毒性多用于體外激活小膠質(zhì)細胞的研究。

因此，本研究采用不同濃度的Aβ25－35（0、5、10、20、40 μmol/L）處理BV2細胞24、48 h，48 h后10～40 μmol/L組鏡下看到細胞成片死亡，故使用24 h為干預(yù)時間進行后續(xù)實驗研究，CCK－8實驗結(jié)果顯示，各組細胞存活率均＞70%，且5～20 μmol/L與對照組相比并無差別。這與小膠質(zhì)細胞是天然的免疫應(yīng)答細胞有關(guān)，其死亡或者凋亡往往在神經(jīng)元之后，在目前選用BV2細胞進行體外實驗研究中，多數(shù)研究者會選擇促炎因子的表達水平作為激活的標(biāo)志。Udomruk等［20］構(gòu)建BV2細胞體外模型時會在細胞活力檢測（MTT）基礎(chǔ)上選擇IL－1β、IL－6、TNF－α等促炎因子的表達以驗證模型的成功。TNF－α和NF－κB信號通路可以調(diào)節(jié)長時程增強效應(yīng)（LTP）［21］，而海馬LTP可能是學(xué)習(xí)記憶的分子基礎(chǔ)。本研究使用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中TNF－α的表達水平，結(jié)果顯示，20、40 μmol/L均能明顯增加其表達水平；使用RT－PCR檢測NF－κB p65 mRNA的表達水平，結(jié)果與TNF－α的表達趨勢相同?？梢妰烧咴贏D神經(jīng)炎癥機制中發(fā)揮作用的一致性。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，TREM2主要表達于小膠質(zhì)細胞［22］，并在AD病人的腦組織、腦脊液及外周血清中高表達。因此，本研究檢測了TREM2的表達水平，結(jié)果與TNF－α、NF－κB p65趨勢相同。隨著Aβ沉積的不斷增加，達到小膠質(zhì)細胞的反應(yīng)界限后，Aβ清除不及時，其毒性作用導(dǎo)致了細胞的增殖活力下降甚至死亡，相應(yīng)檢測到的炎性因子、免疫受體也會隨之下降。因此，Aβ25－35濃度20 μmol/L，作用時間24 h，此條件下的細胞增殖活力未受到明顯影響，TNF－α、NF－κB與TREM2的表達量均較對照組明顯升高，與AD病人及APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦中的變化相符。這與目前研究者常選擇的炎癥反應(yīng)模型相一致［23－24］。因此，本研究下一步將重點探討中藥復(fù)方對Aβ25－35激活BV2細胞的免疫調(diào)控作用。

綜上所述，本研究從Aβ25－35對BV2細胞存活率、促炎因子TNF－α表達、經(jīng)典炎癥通路NF－κB、小膠質(zhì)細胞特異表達的TREM2等幾方面出發(fā)，評估不同濃度Aβ25－35對小膠質(zhì)細胞的影響，20 μmol/L的Aβ25－35干預(yù)24 h成功激活BV2細胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，可能與TREM2/NF－κB信號通路的激活有關(guān)。

參考文獻：

［1］Alzheimer′s Association.2020" Alzheimer′s disease facts and figures［J］.Alzheimers Dement，2020，16（3）：391－460.

［2］MACCIONI R B，ROJO L E，F(xiàn)ERNNDEZ J A，et al.The role of neuroimmunomodulation in Alzheimer′s disease［J］.Ann N Y Acad Sci，2009，1153：240－246.

［3］SAITO T，SAIDO T C.Neuroinflammation in mouse models of Alzheimer′sdisease［J］.Clin Exp Neuroimmunol，2018，9（4）：211－218.

［4］LUE L F，KUO Y M，BEACH T，et al.Microglia activation and anti－inflammatory regulation in Alzheimer′s disease［J］.Molecular Neurobiology，2010，41（2）：115－128.

［5］BARGER S W，HARMON A D.Microglial activation by Alzheimer amyloid precursor protein and modulation by apolipoprotein E［J］.Nature，1997，388：878－881.

［6］PERMANNE B，ADESSI C，SABORIO G P，et al.Reduction of amyloid load and cerebral damage in a transgenic mouse model of Alzheimer′s disease by treatment with a beta－sheet breaker peptide［J］.FASEB Journal，2002，16（8）：860－862.

［7］SHI Z M，HAN Y W，HAN X H，et al.Upstream regulators and downstream effectors of NF－κB in Alzheimer′s disease［J］.Journal of the Neurological Sciences，2016，366：127－134.

［8］LI C X，ZHAO B，LIN C Z，et al.TREM2 inhibits inflammatory responses in mouse microglia by suppressing the PI3K/NF－κB signaling［J］.Cell Biology International，2019，43（4）：360－372.

［9］KAMER A R，CRAIG R G，DASANAYAKE A P，et al.Inflammation and Alzheimer′s disease：possible role of periodontal diseases［J］.Alzheimer′s amp; Dementia，2008，4（4）：242－250.

［10］FIEBICH B L，HOFER T J，LIEB K，et al.The non－steroidal anti－inflammatory drug tepoxalin inhibits interleukin－6 and alpha1－anti－chymotrypsin synthesis in astrocytes by preventing degradation of IkappaB－alpha［J］.Neuropharmacology，1999，38（9）：1325－1333.

［11］JORDAN F，QUINN T J，MCGUINNESS B，et al.Aspirin and other non－steroidal anti－inflammatory drugs for the prevention of dementia［J］.The Cochrane Database of Systematic Reviews，2020，4（4）：CD011459.

［12］O′NEILL L A J，KALTSCHMIDT C.NF－κB：a crucial transcription factor for glial and neuronal cell function［J］.Trends in Neurosciences，1997，20（6）：252－258.

［13］LI J T，ZHANG Y.TREM2 regulates innate immunity in Alzheimer′s disease［J］.Journal of Neuroinflammation，2018，15（1）：107.

［14］GIRALDO M，LOPERA F，SINIARD A L，et al.Variants in triggering receptor expressed on myeloid cells 2 are associated with both behavioral variant frontotemporal lobar degeneration and Alzheimer′s disease［J］.Neurobiology of Aging，2013，34（8）：2077.e11－2077.e18.

［15］王子奇.阿爾茨海默病TREM2腦組織表達及其與Aβ病變相關(guān)性研究［D］.北京：北京交通大學(xué)，2021.

［16］賀春香，于文靜，楊苗，等.黃芩苷通過TREM2/TLR4/NF－κB信號通路抑制脂多糖/干擾素γ誘導(dǎo)的BV2細胞炎癥反應(yīng)［J］.中國中藥雜志，2022，47（6）：1603－1610.

［17］徐靜嫻，劉森，高欣冉，等.白藜蘆醇通過調(diào)節(jié)BDNF/Akt/CREB及TREM1/2表達失衡抑制脂多糖誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)［J］.中國藥理學(xué)通報，2021，37（10）：1402－1408.

［18］LI S M，JIN M，LIU L，et al.Decoding the synaptic dysfunction of bioactive human AD brain soluble Aβ to inspire novel therapeutic avenues for Alzheimer′s disease［J］.Acta Neuropathologica Communications，2018，6（1）：121.

［19］AGOSTINI A，DING Y C，BAI L，et al.Sex－specific hippocampal metabolic signatures at the onset of systemic inflammation with lipopolysaccharide in the APPswe/PS1dE9 mouse model of Alzheimer′s disease［J］.Brain，Behavior，and Immunity，2020，83：87－111.

［20］UDOMRUK S，WUDTIWAI B，HLA SHWE T，et al.Sesamin suppresses advanced glycation end products induced microglial reactivity using BV2 microglial cell line as a model［J］.Brain Research Bulletin，2021，172：190－202.

［21］ALBENSI B C，MATTSON M P.Evidence for the involvement of TNF and NF－kappaB in hippocampal synaptic plasticity［J］.Synapse，2000，35（2）：151－159.

［22］OWENS R，GRABERT K，DAVIES C L，et al.Divergent neuroinflammatory regulation of microglial TREM expression and involvement of NF－κB［J］.Frontiers in Cellular Neuroscience，2017，11：56.

［23］李建光，陽瑩，劉倩蕓，等.黑果小檗總花色苷對Aβ25－35誘導(dǎo)的AD小鼠及小膠質(zhì)細胞神經(jīng)炎性反應(yīng)模型的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2017，32（2）：822－825.

［24］RAHA S，LEE H J，YUMNAM S，et al.Vitamin D2 suppresses amyloid－β25－35 induced microglial activation in BV2 cells by blocking the NF－κB inflammatory signaling pathway［J］.Life Sciences，2016，161：37－44.

（收稿日期：2022－09－11）

（本文編輯王麗）

基金項目 國家自然科學(xué)基金項目（No.82074362）；中醫(yī)藥傳承與創(chuàng)新“百千萬”人才工程項目（岐黃工程）岐黃學(xué)者項目；國家重點研發(fā)計劃項目（No.2018YFC1704100）

通訊作者 時晶，E－mail：sshijing87@163.com

引用信息 張秀文，倪敬年，王宗亮，等.β淀粉樣蛋白25－35對BV2細胞TREM2/NF－κB信號通路的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2024，22（12）：2164－2168.