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    冬瓜種子粗提物對白菜種子萌發(fā)和幼苗生長的影響及其內(nèi)源抑制物分析

    2024-12-31 00:00:00葉新如張前榮陳敏氡王彬朱海生溫慶放
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2024年11期
    關(guān)鍵詞:冬瓜

    摘要:探究內(nèi)源抑制物對冬瓜種子萌發(fā)的影響,為揭示冬瓜種子的休眠原因及解除種子休眠的方法具有重要意義。以冬瓜種子為材料,采用系統(tǒng)溶劑分離法對冬瓜種子種皮和種胚的甲醇粗提液進(jìn)行分離得到不同有機(jī)相(石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相、甲醇相)和水相,測定各分離相的浸提液對白菜種子萌發(fā)及幼苗生長的影響;結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)和模擬研究法,分析冬瓜種子內(nèi)源抑制物種類、含量及有機(jī)化合物的抑制活性。采用55~75 ℃熱水浸泡30 min或250~1 000 mg/L GA3浸泡20~120 min,能有效解除冬瓜種子休眠。冬瓜種子的種皮和種胚分離得到的各分離相對白菜種子萌發(fā)和幼苗生長均有不同程度的抑制作用,其中乙酸乙酯相、甲醇相和乙醚相抑制作用最強(qiáng)。采用GC-MS技術(shù)檢測到冬瓜種皮、種胚分別存在34、39種有機(jī)化合物,主要為有機(jī)酸類、醇類等物質(zhì),其中相對含量較高的有機(jī)化合物包括2-羥基吡啶、棕櫚酸、十八烷酸、2-羥基丙酸等物質(zhì),研究結(jié)果可為冬瓜種子的休眠解除和休眠機(jī)制提供理論依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:冬瓜;休眠特性;內(nèi)源抑制物;GC-MS

    中圖分類號(hào):S642.301文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1002-1302(2024)11-0141-09

    冬瓜(Benincasa hispida Cogn.)為葫蘆科冬瓜屬的一年生草本植物,原產(chǎn)于我國南部地區(qū),是調(diào)節(jié)蔬菜淡季供應(yīng)的重要蔬菜,具有貨架期長、耐貯藏等優(yōu)點(diǎn)。冬瓜種子由種皮和種胚2個(gè)部分構(gòu)成,種皮堅(jiān)硬且厚,表面富含角質(zhì)層,泡水后不易下沉[1]。根據(jù)種皮形狀和結(jié)構(gòu),可分為有棱扁籽和無棱光籽2種類型。

    冬瓜繁殖方式主要是種子繁殖,但由于種子休眠或休眠解除不徹底,導(dǎo)致冬瓜育種過程中存在發(fā)芽率低、出苗不齊等問題,直接影響冬瓜的繁種與育種工作。種子休眠是指完整的具有生活力的種子在適宜的環(huán)境條件下不能正常萌發(fā)的現(xiàn)象[2]。種子休眠的原因復(fù)雜多樣,大體上可以分為外部因素和內(nèi)部因素。外部因素包括溫度、濕度、光、水分等。內(nèi)部因素包括種殼障礙、內(nèi)源抑制物等。內(nèi)源抑制物是由植物種子產(chǎn)生的某些化學(xué)物質(zhì),通過影響種子生理活動(dòng)或代謝,從而抑制種子萌發(fā)。近年來,關(guān)于內(nèi)源抑制物的研究報(bào)道不斷增多。謝朋等研究發(fā)現(xiàn),假色槭種子的種皮和種胚中存在內(nèi)源抑制物,種胚的抑制活性最強(qiáng),是導(dǎo)致種子休眠期長、不易發(fā)芽的主要原因[3]。張躍進(jìn)等對黃精種子存在內(nèi)源抑制物的部位進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),種皮的抑制作用高于胚乳[4]。宋會(huì)興等的研究表明,四川省牡丹種皮和胚乳內(nèi)存在抑制物,隨著該物質(zhì)濃度增加,抑制作用增強(qiáng)[5]。另外,采用系統(tǒng)溶劑法對種子內(nèi)源抑制物進(jìn)行研究也有大量報(bào)道[6-8]。通過測定不同溶劑提取的斧形沙芥種子浸提液的活性,發(fā)現(xiàn)甲醇和乙酸乙酯抑制性較強(qiáng)[9]。返魂草種子中也存在內(nèi)源抑制物,不同浸提液抑制作用為甲醇浸提液依次強(qiáng)于乙醚浸提液和水浸提液[10]。GC-MS技術(shù)可用于對內(nèi)源抑制物進(jìn)行定性定量分析。Blake等利用GC-MS技術(shù)對歐洲白蠟種子內(nèi)源抑制物進(jìn)行鑒定,推測脫落酸(ABA)、吲哚乙酸(IAA)等物質(zhì)可能影響種子休眠[11]。朱銘瑋等通過GC-MS檢測油用牡丹品種鳳丹的種子生物活性,推測鳳丹種皮和種胚主要的抑制物是酚類物質(zhì)和有機(jī)酸類物質(zhì)[12]。

    目前,關(guān)于冬瓜種子的研究主要集中在打破種子休眠[13-17]、種子純度[18-19]等方面,對種子內(nèi)源抑制物種類、相對含量等方面研究甚少。本研究以冬瓜種子為材料,對種子內(nèi)源抑制物進(jìn)行分離與鑒定,測定不同分離相的生物活性指標(biāo),結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)和模擬研究法探究冬瓜種子種皮和種胚中提取的內(nèi)源抑制物種類、含量及有機(jī)化合物的抑制活性,以期為冬瓜種子休眠機(jī)制的深入研究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    試驗(yàn)于2022年8—12月在福建省蔬菜遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。供試冬瓜種子取自福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所蔬菜研究中心,4 ℃儲(chǔ)藏備用。白菜種子品種為君川美格,購自福州農(nóng)嘉種子科技有限公司,純度≥95%,凈度≥98%,發(fā)芽率≥85%,含水量≤7%。

    1.2 冬瓜形態(tài)指標(biāo)

    隨機(jī)選取206粒成熟的冬瓜種子,使用游標(biāo)卡尺測量種子的長、寬、厚,取平均值。隨機(jī)選取冬瓜種子1 000粒,用1/1 000電子天平測定千粒重,3次重復(fù)。

    1.3 冬瓜種子休眠解除方法

    1.3.1 熱水對種子發(fā)芽的影響 隨機(jī)選取3組種子,每組50粒,分別用55、65、75 ℃熱水浸泡 30 min,蒸餾水處理的種子為對照,30 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng),3次重復(fù)。于培養(yǎng)9 d后統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率。

    1.3.2 GA3處理對種子發(fā)芽的影響 隨機(jī)選取50粒種子,分別配制濃度為250、500、1 000 mg/L赤霉素(GA3)溶液,分別浸泡20、30、60、120 min,蒸餾水處理的種子為對照,30 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng),3次重復(fù)。于培養(yǎng)9 d后統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽率。

    發(fā)芽率=發(fā)芽種子數(shù)/種子總數(shù)×100%。

    1.4 冬瓜種子內(nèi)源抑制物提取

    選取飽滿的冬瓜種子,分別將種皮和種胚研磨成粉末。稱取種皮、種胚各10 g置于錐形瓶中,加入100 mL 體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇,4 ℃密閉浸提,浸提24 h,每隔24 h過濾上清液,重復(fù)3次,混合所有濾液。將粗提液利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,最終定容至100 mL。

    1.5 冬瓜種子內(nèi)源抑制物分離

    采用系統(tǒng)溶劑法對“1.4”節(jié)提取的冬瓜種子種皮和種胚甲醇粗提液進(jìn)行提取分離,粗提液分離為石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相、甲醇相和水相5個(gè)組分。將分離后所得的冬瓜種子各部分的有機(jī)相溶液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮蒸發(fā),最后將上述有機(jī)相溶液用蒸餾水定容至100 mL,置于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.6 冬瓜種子分離相生物活性測定

    以白菜種子為內(nèi)源抑制物活性測定材料,其無休眠特性,易萌發(fā)。取“1.5”節(jié)提取的各有機(jī)相浸提液3 mL加入培養(yǎng)皿中進(jìn)行生物活性測定,每皿50粒白菜種子,待有機(jī)溶液完全蒸發(fā)后(除水相外),再向培養(yǎng)皿加入3 mL蒸餾水,以蒸餾水作為對照,3次重復(fù)。將培養(yǎng)皿于恒溫培養(yǎng)箱中(設(shè)置條件:溫度25 ℃、相對濕度70%、12 h光照/12 h黑暗),于培養(yǎng)48 h后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率(以露出子葉為標(biāo)準(zhǔn)),72 h用直尺測量根長。

    1.7 冬瓜種子分離相的GC-MS法鑒定

    分別取冬瓜種子各有機(jī)相浸提液原液60 mL,濃縮蒸干,得到干物質(zhì),再用相應(yīng)的有機(jī)溶劑溶解定容至2 mL,即得到濃縮樣品,樣品送至蘇州帕諾米克生物醫(yī)藥科技有限公司,鑒定條件:代謝物提?。阂迫颖?00 μL于2 mL EP管中,濃縮儀濃縮至盡干;在濃縮盡干的樣品中,加入80 μL甲氧胺吡啶溶液復(fù)溶,渦旋振蕩30 s,60 ℃孵育60 min;加100 μL BSTFA-TMCS衍生化試劑,渦旋振蕩30 s,70 ℃條件下孵育90 min,14 000 r/min 離心3 min,取上清液90~100 μL加入到檢測瓶中,并于24 h內(nèi)完成上機(jī)檢測。氣質(zhì)檢測:毛細(xì)管柱:DB-5MS;樣品分流比為1 ∶10;進(jìn)樣口溫度:280 ℃;傳輸線和離子源溫度:320 ℃和230 ℃;升溫程序:50 ℃為初始溫度,持續(xù)0.5 min,以15 ℃/min 的速率上升到320 ℃,并在320 ℃停留9 min。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 冬瓜種子形態(tài)指標(biāo)

    冬瓜為一年生草本植物,莖上有茸毛,葉片寬大?;ㄆ跁r(shí),花軸開出8 cm左右黃色花朵,雌雄同株。果實(shí)大小因品種而異,從數(shù)斤到數(shù)十斤均有。果實(shí)肉質(zhì)柔軟,味道清淡,可作蔬菜食用。果實(shí)成熟后,表皮變硬,具有極好的耐貯性。種子在果實(shí)中發(fā)育成熟,為黃色(圖1)。本試驗(yàn)所用種子為有棱扁籽,呈水滴狀。冬瓜種子形態(tài)基本統(tǒng)一,長約1.15 cm,寬約0.69 cm,厚約0.23 cm。

    2.2 種子休眠解除方法

    根據(jù)筆者所在課題組前期研究發(fā)現(xiàn),冬瓜種子屬于綜合性休眠,種皮機(jī)械束縛和內(nèi)源抑制物是造成休眠的重要原因。對于種皮束縛引起的休眠,通過熱水處理可以軟化種皮,增強(qiáng)種皮透性并浸出部分種內(nèi)萌發(fā)抑制物。內(nèi)源抑制物是由植物種子生產(chǎn)的化學(xué)物質(zhì),它會(huì)阻礙種子的生理活動(dòng),通過GA3處理可以平衡種子的內(nèi)源抑制物,刺激種子發(fā)育。通過休眠解除方法的試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證前期研究結(jié)果,為后續(xù)內(nèi)源抑制物的研究提供理論依據(jù)。

    2.2.1 熱水對種子萌發(fā)的影響 由表1可知,55 ℃ 和65 ℃處理的冬瓜種子發(fā)芽率顯著高于對照。55 ℃處理后,種子發(fā)芽率最高,達(dá)81.11%。之后依次為65 ℃處理和75 ℃處理,發(fā)芽率分別為80.00%和43.33%。

    2.2.2 GA3處理對種子發(fā)芽的影響 由表2可知,冬瓜種子經(jīng)不同濃度GA3和不同時(shí)間處理后,種子發(fā)芽率均有提升。種子經(jīng)過250 mg/L GA3不同時(shí)間處理后,發(fā)芽率均達(dá)到70%以上。250 mg/L GA3處理種子20 min和60 min后,發(fā)芽率分別達(dá)到7111%和80.00%。當(dāng)GA3濃度達(dá)到500 mg/L時(shí),處理種子30 min和120 min后,發(fā)芽率較對照分別提高5002%和72.22%。1 000 mg/L GA3處理的種子發(fā)芽率隨浸種時(shí)間的增加整體呈升高趨勢,其中,1 000 mg/L GA3浸種120 min后發(fā)芽率最高,達(dá)9444%。

    2.3 冬瓜種子不同分離相生物活性測定

    2.3.1 各有機(jī)相對白菜種子萌發(fā)的影響 冬瓜種子的種皮和種胚各有機(jī)相對白菜種子萌發(fā)的影響結(jié)果如表3所示。種皮的石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相、甲醇相、水相的浸提液分別使白菜種皮發(fā)芽率較對照降低3.29、36.63、98.85、26.63、13.29百分點(diǎn),只有石油醚相浸提液處理與對照無顯著差異;種胚的石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相、甲醇相、水相的浸提液使發(fā)芽率降低6.67、64.41、98.85、7577、7.60百分點(diǎn),石油醚相浸提液處理、水相浸提液處理與對照相比差異不顯著,乙酸乙酯相浸提液處理的白菜種子發(fā)芽率為0。綜上,冬瓜種子的種皮浸提液各分離相的敏感性表現(xiàn)為乙酸乙酯相>乙醚相>甲醇相>水相>石油醚相,種胚浸提液各分離相的敏感性表現(xiàn)為乙酸乙酯相>甲醇相>乙醚相>水相>石油醚相。

    2.3.2 各有機(jī)相對白菜生長的影響

    2.3.2.1 各有機(jī)相對白菜根長的影響 由表4可知,各有機(jī)相對白菜根長抑制作用不同,冬瓜種子的種皮乙酸乙酯相浸提液對白菜根長抑制作用最強(qiáng),達(dá)到100%。與對照相比,種皮的石油醚相、乙醚相、甲醇相、水相浸提液處理的白菜根長分別降低50.89%、55.38%、46.53%、33.06%。綜上,種皮浸提液各分離相的敏感性表現(xiàn)為乙酸乙酯相>乙醚相>石油醚相>甲醇相>水相。種胚同樣也是乙酸乙酯相浸提液處理的白菜根長抑制作用最為顯著,其次是甲醇相和石油醚相,白菜根長較對照分別降低62.29%、53.63%,而抑制作用最弱的是水相。對比相同分離相不同部位浸提液可以發(fā)現(xiàn),除乙醚相外,其余各相的種胚浸提液抑制作用強(qiáng)于種皮浸提液。

    2.3.2.2 各有機(jī)相對白菜苗的高影響 由表4可知,冬瓜不同部位有機(jī)相浸提液對白菜苗高生長作用效果不同。然而,各有機(jī)相浸提液較對照均有不同幅度的下降。冬瓜種子種皮的石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相、甲醇相和水相浸提液處理的白菜種子,它們的苗高較對照分別降低33.52%、4378%、100%、34.65%、27.83%,種皮浸提液各分離相的敏感性表現(xiàn)為乙酸乙酯相>乙醚相>甲醇相>石油醚相>水相。

    對于冬瓜種子種胚的浸提液來說,乙酸乙酯相和甲醇相的浸提液顯著抑制白菜苗高生長,白菜苗高較對照分別降低100%和47.34%。與種皮對白菜苗高的影響相比,種胚對白菜苗高的抑制強(qiáng)度高于種皮,說明種胚中的物質(zhì)可能對苗高具有更強(qiáng)的抑制效果。同時(shí),種皮和種胚浸提液均為乙酸乙酯相抑制作用最強(qiáng),說明可能含有更多的抑制物存在于乙酸乙酯相中。

    在冬瓜種子的種皮和種胚浸提液中,抑制白菜發(fā)芽率、根長和苗高生長排名前3的有機(jī)相主要為乙酸乙酯相、乙醚相和甲醇相,說明這3個(gè)有機(jī)相中的抑制物對植物生長有較強(qiáng)的抑制作用,而抑制物種類和含量則需要進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

    2.4 冬瓜種子各分離相浸提液的GC-MS鑒定

    2.4.1 種皮相關(guān)有機(jī)相代謝產(chǎn)物分析 表5為冬瓜種皮中各有機(jī)相提取物的檢測分析結(jié)果。冬瓜種子的種皮乙酸乙酯相抑制作用最強(qiáng),利用GC-MS技術(shù),對種皮乙酸乙酯相中的提取物進(jìn)行檢測分析,相對含量較高的有機(jī)化合物有15種。冬瓜種皮乙酸乙酯相中鑒定的有機(jī)化合物種類主要有酮類物質(zhì)1種,仲辛酮(1.15%);有機(jī)酸類物質(zhì)6種,包括棕櫚酸(12.83%)、十八烷酸(10.62%)、2-羥基丙酸(7.70%)、磷酸鹽(4.12%)、2-羥基戊酸(1.95%)、磷酸(1.29%);醇類物質(zhì)5種,包括2-羥基吡啶(13.69%)、1,3-丙二醇(6.88%)、丙三醇(4.12%)、正辛醇(1.60%)、麥芽糖醇(1.13%);脂類物質(zhì)1種,為單硬脂酸甘油酯(2.73%);烷類物質(zhì)2種,包括十三烷(1.78%)和二十二烷(121%),含量為總峰面積的72.81%。

    按照相同的方法對剩下的不同有機(jī)相的提取物進(jìn)行檢測分析。冬瓜種皮石油醚相中鑒定出的化合物以有機(jī)酸類化合物和醇類化合物為主,相對含量最高的6種物質(zhì)為2-羥基吡啶、棕櫚酸、十八烷酸、2-羥基丙酸、磷酸鹽、丙三醇。

    冬瓜種皮乙醚相中鑒定的有機(jī)化合物包含有機(jī)酸類物質(zhì)7種、烷類物質(zhì)5種、醇類物質(zhì)5種、酮類物質(zhì)1種、脂類物質(zhì)1種,其中有機(jī)酸類物質(zhì)為棕櫚酸、十八烷酸、2-羥基丙酸、磷酸鹽、2-羥基戊酸等,相對含量39.28%,而脂類物質(zhì)含量僅占2%左右。

    冬瓜種皮甲醇相鑒定出有機(jī)化合物22種,主要是有機(jī)酸類物質(zhì),包括棕櫚酸、十八烷酸、2-羥基丙酸等物質(zhì),相對含量合計(jì)20.67%。

    2.4.2 種胚相關(guān)有機(jī)相代謝產(chǎn)物分析 表6為冬瓜種胚中各有機(jī)相提取物的檢測分析結(jié)果。冬瓜種子的種胚石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相和甲醇相鑒定出相對含量較高的有機(jī)物分別為20、21、16、24種。種胚石油醚相中鑒定的有機(jī)化合物相對含量較高的主要是有機(jī)酸類物質(zhì)(36.91%)和醇類物質(zhì)(24.46%)。其中,酮類物質(zhì)2-羥基吡啶含量最高,占14.60%;其次是棕櫚酸、十八烷酸和2-羥基丙酸,分別占13.37%、11.28%、7.19%。

    冬瓜種胚乙醚相中以有機(jī)酸類物質(zhì)和醇類物質(zhì)為主,有機(jī)酸類物質(zhì)主要以棕櫚酸和十八烷酸為主,分別占12.74%、11.11%;醇類物質(zhì)主要以2-羥基吡啶、1,3-丙二醇和丙三醇為主,分別占1086%、4.80%和4.32%。冬瓜種胚乙醚相中提取的有機(jī)物數(shù)量多于種皮。與其他有機(jī)相相比,乙醚相有機(jī)化合物種類有所不同,它對白菜種子發(fā)芽起到的抑制作用僅次于乙酸乙酯相。

    冬瓜種胚乙酸乙酯相含量較高的為2-羥基吡啶(12.89%)、棕櫚酸(12.52%)、十八烷酸(1050%)、2-羥基丙酸(7.49%)、1,3-丙二醇(5.63%)、丙三醇(4.50%)、磷酸鹽(4.48%)等。冬瓜種胚乙酸乙酯相含有的有機(jī)化合物種類不多,但對種子萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng),說明影響種子發(fā)芽和植物幼苗生長的抑制物可能多存在于乙酸乙酯相中。

    冬瓜種胚甲醇相測定出的抑制物種類略高于其他有機(jī)相,其有機(jī)化合物主要為有機(jī)酸類物質(zhì)(24.98%),還包含糖類物質(zhì)、醇類物質(zhì)和酮類物質(zhì)等。

    3 討論與結(jié)論

    根據(jù)筆者所在課題組前期研究發(fā)現(xiàn),冬瓜種子屬于綜合性休眠,種皮機(jī)械束縛和內(nèi)源抑制物是造成休眠的重要原因。本研究發(fā)現(xiàn),分別用55 ℃和65 ℃熱水浸泡冬瓜種子30 min,可提高種子發(fā)芽率,這與昌正興等的研究結(jié)果[16]相似。施加GA3會(huì)改變種子內(nèi)部物質(zhì)平衡,從而促進(jìn)種子萌發(fā)。本研究用250、500、1 000 mg/L GA3對冬瓜種子進(jìn)行不同時(shí)間的處理后,種子發(fā)芽率顯著提高,其中 1 000 mg/L GA3浸種120 min后種子發(fā)芽率最高。

    系統(tǒng)溶劑分離法是常用于內(nèi)源抑制物研究的方法。鄒雨婷等采用該方法分離出綠山楂種子5個(gè)有機(jī)相并對其生物活性進(jìn)行測定,發(fā)現(xiàn)乙醚相和甲醇相的抑制效果大于其他各有機(jī)相[20]。朱銘瑋等對丹鳳牡丹種皮和種胚的浸提液進(jìn)行分離,發(fā)現(xiàn)種皮和種胚的乙醚相、甲醇相及種皮的乙酸乙酯相對白菜抑制效果最強(qiáng)[12]。楊治華等研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)源抑制物是導(dǎo)致池杉種子休眠的主要原因,種皮的抑制物主要存在于石油醚相中[21]。本研究對冬瓜種子各部位甲醇粗提液進(jìn)一步分離后得到石油醚相、乙醚相、乙酸乙酯相、甲醇相和水相5個(gè)分離相,發(fā)現(xiàn)各有機(jī)相浸提液對白菜種子萌發(fā)和幼苗生長存在不同程度的抑制作用。綜合白菜發(fā)芽率和幼苗生長結(jié)果,認(rèn)為種皮和種胚的乙酸乙酯相、甲醇相和乙醚相的浸提液存在顯著的抑制作用,種胚甲醇相和乙醚相浸提液的抑制效果強(qiáng)于種皮,且3種浸提液對白菜幼苗根長的抑制效應(yīng)大于苗高,這與李櫻花等的研究結(jié)果[22-23]相似。

    13世紀(jì)初,Albertus Magus發(fā)現(xiàn)種子延遲發(fā)芽與內(nèi)源抑制物有關(guān)。此后,國內(nèi)外學(xué)者對植物萌發(fā)抑制物展開了多方面的研究。Hoffmamn第1次從歐洲花楸果實(shí)中分離出有較強(qiáng)萌發(fā)抑制作用的花楸酸。王艷華在大山櫻的研究中發(fā)現(xiàn),棕櫚酸、苯甲酸等是抑制種子休眠的重要物質(zhì)[24]。王浩宇等在關(guān)于加拿大紫荊種子內(nèi)源抑制物的研究中發(fā)現(xiàn),鄰苯三酚可能是引起種子休眠的主要抑制物[25]。本研究在冬瓜種子的種皮、種胚分離出的不同有機(jī)相中分別發(fā)現(xiàn)34、39種有機(jī)化合物,包含有機(jī)酸類、醇類等較多種類的物質(zhì)。在抑制作用較強(qiáng)的乙酸乙酯相、甲醇相和乙醚相中,有機(jī)酸類物質(zhì)相對含量較高,而有機(jī)酸類也是已知的內(nèi)源抑制物質(zhì)。如韓寶瑞等對西洋參果肉中發(fā)芽抑制物的研究發(fā)現(xiàn),乙酸等6種物質(zhì)對白菜發(fā)芽具有抑制作用[26]。張艷杰在南方紅豆杉種子休眠機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn),十八烷酸、庚酸等物質(zhì)的抑制作用隨著濃度增大而增強(qiáng)[27]。

    本研究表明,冬瓜種子具有內(nèi)源抑制物,各部位的分離相對白菜種子萌發(fā)和幼苗生長均產(chǎn)生了抑制作用,其中乙酸乙酯相、甲醇相和乙醚相3個(gè)有機(jī)相的抑制作用較強(qiáng)。經(jīng)GC-MS分析發(fā)現(xiàn),冬瓜種子的種皮和種胚中存在不同種類的有機(jī)化合物,主要為有機(jī)酸類、醇類等物質(zhì)。

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