β-氨基丁酸誘導(dǎo)馬鈴薯Y病毒抗性及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究

摘要：馬鈴薯Y病毒（PVY）是目前馬鈴薯、煙草等作物生產(chǎn)過(guò)程中危害最嚴(yán)重的病毒病之一，嚴(yán)重影響作物產(chǎn)量和品質(zhì)。為探究β-氨基丁酸（BABA）對(duì)植物PVY抗性的誘導(dǎo)作用，以煙草品種Samsun為試驗(yàn)材料，通過(guò)對(duì)葉面噴施BABA，探究BABA對(duì)煙草PVY抗性的誘導(dǎo)作用及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。結(jié)果表明，葉面噴施BABA可有效誘導(dǎo)煙草對(duì)PVY的抗性，其中5 mmol/L BABA對(duì)煙草PVY抗性誘導(dǎo)效果最明顯。與對(duì)照相比，對(duì)感染PVY的植株噴施 5 mmol/L BABA可以使葉片明脈推遲3～4 d出現(xiàn)，同時(shí)抑制由PVY引起的莖部壞死程度，經(jīng)qRT-PCR測(cè)定發(fā)現(xiàn)，在接種病毒第5、7、10、14天的植株中，BABA處理組對(duì)PVY表達(dá)量的抑制率相較于對(duì)照組分別達(dá)到98.70%、96.62%、98.40%、66.89%，病理癥狀觀察結(jié)果與分子檢測(cè)結(jié)果相符合。通過(guò)高效液相色譜外標(biāo)法對(duì)樣品提取液進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，5 mmol/L BABA處理可誘導(dǎo)煙草內(nèi)源水楊酸（SA）含量的峰值出現(xiàn)時(shí)間早于PVY病毒表達(dá)量峰值的出現(xiàn)時(shí)間，并有效調(diào)節(jié)煙草植株內(nèi)活性氧動(dòng)態(tài)平衡。通過(guò)qRT-PCR和H₂O₂原位表征測(cè)定得出，BABA處理在激活防御體系時(shí)，通過(guò)抑制相關(guān)抗氧化酶CAT的基因表達(dá)量，使H₂O₂在植株內(nèi)適量積累，可在誘導(dǎo)抗性的同時(shí)降低H₂O₂對(duì)植株的毒害作用。結(jié)果表明，BABA對(duì)PVY的抗性誘導(dǎo)與SA作為信號(hào)分子參與誘導(dǎo)植株防衛(wèi)基因表達(dá)過(guò)程存在緊密相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：β-氨基丁酸；馬鈴薯Y病毒；內(nèi)源水楊酸；抗性誘導(dǎo)；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑

中圖分類號(hào)：S435.32" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2024）19-0151-07

收稿日期：2023-10-06

基金項(xiàng)目：國(guó)家馬鈴薯產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（編號(hào)：CARS-09-ES16）。

作者簡(jiǎn)介：高琪昕（1990—），女，河北滄州人，碩士，講師，主要從事蔬菜學(xué)、食品保鮮貯藏技術(shù)研究。E-mail：455385116@qq.com。

通信作者：張 維，碩士，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事作物遺傳育種研究。E-mail：195282415@qq.com。

馬鈴薯Y病毒（PVY）因毒源廣泛、傳播速度快等特點(diǎn)，成為馬鈴薯、煙草等作物生產(chǎn)過(guò)程中最具危害力的病毒之一，可直接導(dǎo)致品質(zhì)和產(chǎn)量下降，亟需尋求高效實(shí)用的PVY防治手段及生物誘抗劑^［1-2］。在已知研究中，β-氨基丁酸（BABA）作為一種非蛋白質(zhì)氨基酸，在不同作物、不同病原菌體中及不同逆境環(huán)境條件下可通過(guò)引起植株過(guò)敏反應(yīng)、提高防御酶活性，產(chǎn)生顯著誘抗效果^［3-8］。

水楊酸（SA）最主要的作用之一是參與植物對(duì)病原的防御反應(yīng)。目前已普遍認(rèn)定，SA是誘發(fā)植物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性（SAR）的信號(hào)分子之一^［9-12］。在誘導(dǎo)因子作用下，SA被水楊酸受體蛋白（SABP）識(shí)別并與其結(jié)合，產(chǎn)生過(guò)氧化物及抗氧化酶活性，內(nèi)源SA的積累先于SAR的產(chǎn)生，并且SA含量與誘導(dǎo)的植物抗性呈正相關(guān)。因此，本研究以煙草為試驗(yàn)材料，探究BABA誘導(dǎo)煙草抗PVY作用的最適濃度，分析BABA的誘抗作用引起的植株內(nèi)源SA含量及相關(guān)抗氧化酶基因表達(dá)量、過(guò)氧化物含量的變化，進(jìn)而探討B(tài)ABA誘導(dǎo)PVY的抗性信號(hào)途徑與SA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2021年2月在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)馬鈴薯工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)室完成。選取長(zhǎng)勢(shì)一致的無(wú)毒無(wú)菌Samsun煙草幼苗，從煙株長(zhǎng)至5～6葉期起噴施梯度濃度BABA（美國(guó)Sigma公司）溶液，以噴施超純水為對(duì)照，對(duì)頂端葉片向下第3～4張葉片進(jìn)行等量噴施，每天噴施2次，連續(xù)噴施3 d，每個(gè)處理3株重復(fù)。處理3 d后接種HN-2馬鈴薯植株P(guān)VY毒源，取2 g新鮮含PVY的馬鈴薯葉片，加入5 mL磷酸緩沖液充分研磨后，對(duì)煙草植株頂端葉片向下第2張葉片均勻噴灑石英砂，再用研棒蘸取病毒液，沿葉脈方向均勻等量接種，待病毒汁液停留30 min后用超純水沖洗干凈。接種后將植株置于20 ℃黑暗條件下培養(yǎng)12 h，隨后放進(jìn)晝夜溫度為22 ℃/20 ℃、光—暗周期為16 h—8 h的光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天噴施2次BABA溶液及超純水，直至取樣。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，5 mmol/L BABA可以顯著誘導(dǎo)煙草PVY抗性，因此后續(xù)研究基于5 mmol/L的BABA溶液濃度開(kāi)展。噴施5 mmol/L BABA溶液及清水（CK）3 d后，對(duì)不同噴施處理的植株分別進(jìn)行PVY接種及磷酸緩沖液假接種（mock），試驗(yàn)分為4個(gè)處理：處理1（CK+mock）、處理2（5 mmol/L BABA+mock）、處理3（CK+PVY）、處理4（5 mmol/L BABA+PVY）。分別在接種第5、7、10、14天（5、7、10、14 dpi）切取4組處理植株接種葉以上3張葉，用液氮迅速冷凍后在-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)錂z，各處理均重復(fù)3次。

1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.1 BABA誘導(dǎo)煙草PVY抗性的最適濃度測(cè)定及表型觀察

分別用1、3、5、7、9 mmol/L BABA溶液及超純水（對(duì)照）處理葉片并接種PVY，在不同接種天數(shù)觀察植株葉片、莖部、整株的生理生長(zhǎng)情況、病毒癥狀表型并記錄，對(duì)采集到的樣品通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR，ABI StepOne Plus Real Time PCR，Applied Biosystems）進(jìn)行PVY表達(dá)量檢測(cè)。

用于qRT-PCR的內(nèi)參基因Actin引物以及目的基因PVY引物均采用primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)（表1），試驗(yàn)所用引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，選用TAKARA公司的RNAiso plus總RNA提取試劑并采用SYBR Green Real time-PCR進(jìn)行測(cè)定。反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃ 變性10 s，60 ℃退火30 s，40個(gè)循環(huán)；95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s條件下進(jìn)行溶解曲線分析。所有程序設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù)和3次技術(shù)重復(fù)，最終表達(dá)水平采用2^ΔΔC_T法進(jìn)行定量。試驗(yàn)用所有目的基因與內(nèi)參基因引物均在進(jìn)行定量PCR試驗(yàn)前通過(guò)普通PCR擴(kuò)增法檢測(cè)了其特異性，引物退火溫度與反應(yīng)條件適宜，可進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)步驟。

1.2.2 BABA誘導(dǎo)煙草抗PVY過(guò)程中內(nèi)源SA含量測(cè)定

采用SA標(biāo)準(zhǔn)品（美國(guó)Sigma公司）制作SA標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次進(jìn)行高通量液相色譜（HPLC）分析，并以水楊酸峰面積（y）與對(duì)應(yīng)濃度（x）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程與相關(guān)系數(shù)。

采用“1.1”節(jié)中的接種方法處理2個(gè)對(duì)照組材料，處理1（CK+PVY）、處理2（5 mmol/L BABA+PVY），分別在5、7、10、14 dpi取樣。稱取1 g樣品，加入5 mL 50 mg/mL的三氯乙酸溶液，在室溫下超聲振蕩10 min，隨后在4 ℃、12 000 r/min條件下離心5 min，將連續(xù)提取3次的上清液合并后倒入 50 mL 分液漏斗。然后分別用15、15、10 mL三氯甲烷萃取，合并有機(jī)相至濃縮瓶中，50 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸干，加入體積比為1 ∶1的甲醇-三氯乙酸溶液，超聲溶解8 min后定容至1 mL，過(guò)程中盡量確保濃縮瓶?jī)?nèi)壁所有SA均溶解到溶液中。最后用一次性注射器吸取提取液，過(guò)0.45 μm濾膜，所得濾液采用高效液相色譜外標(biāo)法進(jìn)行分析。

使用Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），選取Agilent ZORBAX SA-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇（A）、100 mmol/L 磷酸（B），流速為0.8 mL/min，用20% A+80% B、50% A+50% B（20 min）、60% A+40% B （25 min）進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)樣量為 20 μL，柱溫為40 ℃，紫外波長(zhǎng)為210 nm。

1.2.3 BABA誘導(dǎo)煙草抗PVY過(guò)程中抗氧化酶基因表達(dá)量及H₂O₂的測(cè)定

采用“1.1”節(jié)中的接種方法處理4個(gè)對(duì)照組材料，在接種后24 h時(shí)取4組處理植株相同部位葉片，采用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）染色法進(jìn)行H₂O₂原位表征檢測(cè)。

分別在5、7、10、14 dpi取樣，用qRT-PCR對(duì)樣品過(guò)氧化氫酶（CAT）基因表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定。用于qRT-PCR的內(nèi)參基因Actin引物以及目的基因CAT引物均用primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)（表2），反應(yīng)程序同“1.2.1”節(jié)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

各項(xiàng)指標(biāo)均重復(fù)測(cè)定3次，所得數(shù)據(jù)利用Microsoft Excel 2007軟件進(jìn)行處理并作圖，GraphPad Prism軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 BABA誘導(dǎo)煙草PVY抗性的最適濃度

噴施BABA后，植株葉片表面會(huì)形成許多微小的壞死斑應(yīng)激反應(yīng)，促使植物進(jìn)入防衛(wèi)狀態(tài)。當(dāng)BABA濃度超過(guò)5 mmol/L后，葉片開(kāi)始出現(xiàn)大量較為嚴(yán)重的壞死斑點(diǎn)（圖1），由此可知，高濃度的BABA溶液反而對(duì)煙草葉片產(chǎn)生毒害作用。

PVY侵染煙草后最明顯的癥狀是莖部壞死且壞死程度與體內(nèi)病毒含量緊密相關(guān)。本試驗(yàn)中，在20 dpi時(shí)不同處理組植株的莖部壞死程度與BABA溶液濃度呈反比。清水處理的植株莖部褐色壞死現(xiàn)象十分明顯，當(dāng)BABA濃度達(dá)到5 mmol/L時(shí)莖部只有零星壞死斑出現(xiàn)，BABA濃度高于7 mmol/L后莖部很少甚至幾乎沒(méi)有出現(xiàn)壞死斑，這說(shuō)明 5 mmol/L BABA溶液即可對(duì)煙草內(nèi)PVY的表達(dá)產(chǎn)生較強(qiáng)的抑制作用（圖2）。

結(jié)合有效性和安全性，本試驗(yàn)得出結(jié)論，5 mmol/L可作為BABA溶液誘導(dǎo)煙草PVY抗性的最適濃度。

PVY侵染煙草后，植株表現(xiàn)出的最初癥狀是葉片明脈 隨著病毒含量的升高 感染葉片最終出現(xiàn)花葉、輕微扭曲變形癥狀，直至葉片枯萎死亡。根據(jù)接種天數(shù)觀察發(fā)現(xiàn)，噴施清水（CK+mock）和5 mmol/L BABA但未接種PVY（BABA+mock）的煙草植株頂端葉片健康生長(zhǎng)無(wú)異樣，而噴施清水后接種PVY（CK+PVY）的植株頂端葉片在7 dpi便開(kāi)始出現(xiàn)明脈，10 dpi明脈非常清晰，14 dpi明脈發(fā)展成星狀壞死且葉柄與莖部的結(jié)節(jié)處也開(kāi)始?jí)乃溃?0 dpi 葉柄和莖部均出現(xiàn)較為嚴(yán)重的褐色壞死。相比之下，噴施BABA后接種PVY（BABA+PVY）處理的植株頂端葉片直到10 dpi才開(kāi)始出現(xiàn)輕微明脈，14 dpi明脈仍未發(fā)展成壞死斑點(diǎn)，30 dpi莖部輕微壞死，由此可知，BABA對(duì)煙草PVY抗性有明顯的誘導(dǎo)作用（圖3）。

用5 mmol/L BABA和清水分別處理接種PVY的煙草，經(jīng)qRT-PCR測(cè)定發(fā)現(xiàn)，不同接種時(shí)間2個(gè)處理組植株體內(nèi)PVY表達(dá)量有明顯差異（圖4）。與清水處理相比，在4個(gè)不同接種時(shí)間，BABA處理組對(duì)PVY表達(dá)量的抑制率分別達(dá)到98.70%、96.62%、98.40%、66.89%。說(shuō)明5 mmol/L BABA對(duì)煙草PVY抗性誘導(dǎo)效果明顯，可有效抑制病毒積累，生理癥狀觀察與分子檢測(cè)結(jié)果相符合。

2.2 BABA對(duì)煙草抗PVY過(guò)程中內(nèi)源SA含量的影響

對(duì)濃度為100.0、50.0、30.0、10.0、7.5、5.0 μg/mL 的SA標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)行HPLC分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖5），曲線的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 88，適合定量。通過(guò)對(duì)水楊酸峰面積（y）與對(duì)應(yīng)濃度（x）進(jìn)行線性回歸并結(jié)合液相色譜儀器分析得到，回歸方程為y=302.985 72x-69.465 38。根據(jù)SA標(biāo)準(zhǔn)品和煙草樣品的HPLC分離效果（圖6、圖7）可知，本試驗(yàn)采用的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品純度高，標(biāo)準(zhǔn)曲線可信；樣品采用的提取、分離方法效果良好。

由圖8可知，CK+PVY處理植株內(nèi)源SA含量隨著病程發(fā)展時(shí)間的積累而逐漸增加，10 dpi之前并無(wú)明顯升高，5、7、10 dpi的SA含量分別為28.66、31.84、35.82 μg/g，10 dpi之后SA含量迅速增加，14 dpi時(shí)達(dá)到峰值，含量為50.90 μg/g，說(shuō)明PVY可誘導(dǎo)煙草內(nèi)源SA含量升高，結(jié)合不同接種時(shí)間PVY的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)產(chǎn)生的SA含量與植株體內(nèi)的PVY含量呈正相關(guān)。而B(niǎo)ABA+PVY處理在5 dpi時(shí)便誘導(dǎo)植株產(chǎn)生大量SA，高于同期對(duì)照60.51%，7 dpi時(shí)高于同期對(duì)照47.61%。BABA誘導(dǎo)的感病煙草中SA含量的峰值出現(xiàn)時(shí)間在5～7 dpi 之間，先于對(duì)照組SA含量峰值出現(xiàn)時(shí)間，也先于處理后病毒表達(dá)量峰值出現(xiàn)時(shí)間。

2.3 BABA對(duì)煙草抗PVY過(guò)程中抗氧化酶基因表達(dá)量及H₂O₂原位表征的影響

由圖9可知，隨著接種后天數(shù)的延長(zhǎng)，除CK+PVY處理植株中CAT基因表達(dá)量持續(xù)下降以外，其他3組處理煙草植株中的CAT基因表達(dá)量均呈先上升后下降趨勢(shì)。BABA+PVY處理植株內(nèi)CAT基因表達(dá)量在5～14 dpi均低于其他處理組，說(shuō)明BABA處理后，煙草植株CAT活性受到抑制，且變化趨勢(shì)與圖8中BABA處理組的SA含量變化趨勢(shì)也基本一致，推測(cè)原因是CAT作為一種SA結(jié)合蛋白，通過(guò)與SA結(jié)合抑制自身活性，從而導(dǎo)致H₂O₂適量積累，引起植株過(guò)敏反應(yīng)，提高抗性。

煙草植株感染PVY后，活性氧在短時(shí)間內(nèi)猝發(fā)是不良生理反應(yīng)之一。H₂O₂原位表征是指植物組織經(jīng)DAB染色后，產(chǎn)生H₂O₂的部位會(huì)出現(xiàn)紅褐色斑點(diǎn)。在接種24 h后4種處理的H₂O₂原位表征結(jié)果如圖10所示，處理1（CK+mock）葉片中幾乎沒(méi)有產(chǎn)生H₂O₂，處理2（BABA+mock）葉片上有輕微紅褐色斑點(diǎn)出現(xiàn)，處理3（CK+PVY）葉片中的H₂O₂含量明顯升高，紅褐色斑塊幾乎布滿整個(gè)葉片，說(shuō)明病毒侵染會(huì)快速誘導(dǎo)植物產(chǎn)生過(guò)氧化物，從而誘導(dǎo)植物啟動(dòng)逆境響應(yīng)信號(hào)系統(tǒng)，但過(guò)量的過(guò)氧化物會(huì)直接造成植物DNA損傷和細(xì)胞死亡^［13-14］。處理4（BABA+PVY）葉片上的斑點(diǎn)多于處理2卻少于處理3，說(shuō)明采用BABA噴施健康煙草植株可在短時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)其產(chǎn)生H₂O₂，從而激活一系列轉(zhuǎn)錄因子和防衛(wèi)基因的表達(dá)，提高植物抗病性；但與病毒侵染相比，BABA在誘導(dǎo)植物抗性的同時(shí)也可以有效抑制H₂O₂在植株內(nèi)過(guò)量積累，降低H₂O₂對(duì)植株的毒害作用，在激活防御體系的同時(shí)緩解活性氧對(duì)植物的氧化損傷。

3 討論與結(jié)論

現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，大量植物能夠通過(guò)一些生物試劑處理，誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)各類病毒病害的抗性。產(chǎn)生誘導(dǎo)抗性的植株被致病因素感染后，通過(guò)激發(fā)侵染局部小面積過(guò)敏反應(yīng)（HR），控制整株感病情況。HR會(huì)促進(jìn)信號(hào)分子產(chǎn)生，信號(hào)分子沿著韌皮部不斷傳輸，使整株產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性（SAR），SAR具有持續(xù)性、系統(tǒng)性和廣譜性，是植物體的一種主動(dòng)防御機(jī)制^［15-16］。

目前已普遍認(rèn)定，SA可作為信號(hào)分子誘導(dǎo)植株產(chǎn)生SAR。在誘抗過(guò)程中，內(nèi)源SA的大量積累出現(xiàn)在植株產(chǎn)生抗性之前，且SA含量與誘抗效果呈緊密的正相關(guān)性，其原理是SA與具有CAT活性的水楊酸受體蛋白（SABP）結(jié)合后，向SABP提供電子，從而抑制CAT活性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)開(kāi)始積累H₂O₂；同時(shí)，失去電子的SA以自由基形式游離在細(xì)胞中，促使部分大分子的脂質(zhì)過(guò)氧化，從而激活抗性基因表達(dá)^［16-18］。

CAT因與H₂O₂親和力極強(qiáng)，可以有效清除細(xì)胞內(nèi)線粒體電子傳遞、光呼吸、脂肪酸氧化等過(guò)程中產(chǎn)生的H₂O₂，從而調(diào)控細(xì)胞內(nèi)部氧化還原動(dòng)態(tài)平衡。一般情況下，當(dāng)植物受到脅迫后，H₂O₂迸發(fā)，CAT活性會(huì)有所升高，以維持活性氧動(dòng)態(tài)平衡，提高植物抗性。但有些植株在脅迫條件下會(huì)引起體內(nèi)SA含量上升，而SA對(duì)CAT活性有抑制作用，主要通過(guò)產(chǎn)生大量活性氧誘導(dǎo)植株產(chǎn)生SAR，CAT通過(guò)分解H₂O₂產(chǎn)生的氧分子也會(huì)促進(jìn)苯甲酸生成SA，進(jìn)一步誘導(dǎo)SAR^［19］。本試驗(yàn)中，隨著接種時(shí)間的推移，除了接種PVY（CK+PVY處理）的植株中CAT基因表達(dá)量持續(xù)下降以外，其他3組處理煙草植株中的CAT基因表達(dá)量均呈先上升后下降趨勢(shì)。噴施BABA后接種PVY（BABA+PVY）的植株CAT基因表達(dá)量低于其他處理組，且表達(dá)量與相同處理組的SA含量變化趨勢(shì)較為一致，說(shuō)明BABA處理后感病煙草中CAT通過(guò)與SA結(jié)合活性受到抑制，使得H₂O₂可以在植株內(nèi)適量積累，進(jìn)而提高植株抗性。同時(shí)，由于BABA處理感病植株后，內(nèi)源SA峰值提早出現(xiàn)，向H₂O₂提供電子后轉(zhuǎn)變?yōu)樗畻钏嶙杂苫T導(dǎo)大分子脂質(zhì)過(guò)氧化，所以在H₂O₂原位表征時(shí)，BABA+PVY處理組表現(xiàn)出H₂O₂并未過(guò)量積累現(xiàn)象。

后續(xù)試驗(yàn)將進(jìn)一步驗(yàn)證BABA在誘導(dǎo)煙草抗PVY過(guò)程中對(duì)植株內(nèi)抗氧化酶以及病程相關(guān)蛋白基因表達(dá)量的影響，進(jìn)一步探究BABA對(duì)煙草PVY抗性的誘導(dǎo)機(jī)制。

本試驗(yàn)中，5 mmol/L BABA對(duì)煙草PVY抗性的誘導(dǎo)效果明顯，可以使葉片明脈推遲3～4 d出現(xiàn)，同時(shí)降低由PVY引起的莖部壞死程度，對(duì)病毒積累也有抑制作用，病理癥狀觀察與分子檢測(cè)結(jié)果相符合。

BABA可誘導(dǎo)煙草內(nèi)SA含量峰值在提前在 5～7 dpi之間出現(xiàn)，內(nèi)源SA的積累能夠抑制感染植株內(nèi)CAT活性，從而影響H₂O₂含量變化，導(dǎo)致抗性基因被快速激活表達(dá)，SA峰值提前出現(xiàn)誘導(dǎo)的抗性基因表達(dá)先于試驗(yàn)中其他防御酶基因表達(dá)量峰值出現(xiàn)的時(shí)間，說(shuō)明在BABA誘導(dǎo)煙草PVY抗性過(guò)程中，SA作為信號(hào)分子參與誘導(dǎo)植株防御酶基因的表達(dá)，誘導(dǎo)植株抗性產(chǎn)生。

參考文獻(xiàn)：

［1］張諾妮，曹 洋，梅運(yùn)鵬，等. 煙草馬鈴薯Y病毒病發(fā)生規(guī)律及生物防治研究進(jìn)展［J］. 北方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2022，50（2）：110-116.

［2］董環(huán)宇，楊超群，郭笑維，等. 不同抗性煙草品種（系）苗期接種PVY后生理生化指標(biāo)變化［J］. 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2022，44（3）：29-37.

［3］馬曉寒，龔治翔，王 林，等. β-氨基丁酸誘導(dǎo)煙草抵御脅迫的研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2018，20（5）：47-53.

［4］Wang J，Cao S F，Wang L，et al. Effect of β-aminobutyric acid on disease resistance against Rhizopus rot in harvested peaches［J］. Frontiers in Microbiology，2018，9：1505.

［5］雷長(zhǎng)毅，汪開(kāi)拓，黎春紅，等. β-氨基丁酸誘導(dǎo)采后葡萄果實(shí)敏化抗性及促進(jìn)可溶性糖積累［J］. 食品與發(fā)酵工業(yè)，2023，49（12）：23-32.

［6］Jafarbeigi F，Samih M A，Alaei H，et al. Induced tomato resistance against Bemisia tabaci triggered by salicylic acid，β-aminobutyric acid，and Trichoderma［J］. Neotropical Entomology，2020，49（3）：456-467.

［7］金義蘭. β-氨基丁酸誘導(dǎo)藍(lán)莓對(duì)葉斑病的誘導(dǎo)抗病性及其基因表達(dá)研究［D］. 貴陽(yáng)：貴州大學(xué)，2019.

［8］廖云霞，費(fèi)良航，夏明星，等. 不同濃度β-氨基丁酸處理對(duì)葡萄果實(shí)抗病性的誘導(dǎo)模式［J］. 食品科學(xué)，2018，39（17）：221-228.

［9］王維領(lǐng)，趙 燦，李國(guó)輝，等. 水楊酸在植物抵御低溫脅迫中的作用［J］. 植物生理學(xué)報(bào)，2020，56（12）：2585-2594.

［10］Ali A，Shah L，Rahman S，et al. Plant defense mechanism and current understanding of salicylic acid and NPRs in activating SAR［J］. Physiological and Molecular Plant Pathology，2018，104：15-22.

［11］Belkadhi A，de Haro A，Soengas P，et al. Salicylic acid increases tolerance to oxidative stress induced by hydrogen peroxide accumulation in leaves of cadmium-exposed flax （Linum usitatissimum L.）［J］. Journal of Plant Interactions，2014，9（1）：647-654.

［12］Lovelock D A，Sˇola I，Marschollek S，et al. Analysis of salicylic acid-dependent pathways in Arabidopsis thaliana following infection with Plasmodiophora brassicae and the influence of salicylic acid on disease［J］. Molecular Plant Pathology，2016，17（8）：1237-1251.

［13］Apel K，Hirt H. Reactive oxygen species：metabolism，oxidative stress，and signal transduction［J］. Annual Review of Plant Biology，2004，55：373-399.

［14］任錫躍，劉 濤，朱發(fā)亮，等. β-氨基丁酸對(duì)煙草黑脛病的抗性誘導(dǎo)［J］. 煙草科技，2023，56（1）：47-51，65.

［15］黃子凌，李大勇，宋鳳鳴. 植物系統(tǒng)獲得抗性中的系統(tǒng)信號(hào)及其作用機(jī)制［J］. 植物生理學(xué)報(bào)，2020，56（7）：1346-1360.

［16］高琪昕，胡新喜，王歡妍，等. 水楊酸誘導(dǎo)植物抗病性機(jī)制的研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)馬鈴薯，2014，28（4）：238-242.

［17］Peng D L，Liu A R，Wang W J，et al. Mechanism of growth amelioration of triclosan-stressed tobacco （Nicotiana tabacum） by endogenous salicylic acid［J］. Environmental Pollution，2021，282：117032.

［18］Pokotylo I，Kravets V，Ruelland E. Salicylic acid binding proteins （SABPs）：the hidden forefront of salicylic acid signalling［J］. International Journal of Molecular Sciences，2019，20（18）：4377.

［19］Yüzba ogˇlu E，Dalyan E.Salicylic acid alleviates thiram toxicity by modulating antioxidant enzyme capacity and pesticide detoxification systems in the tomato （Solanum lycopersicum Mill.）［J］. Plant Physiology and Biochemistry，2019，135：322-330.