3種紅景天提取物對小鼠運(yùn)動性疲勞的影響

摘要為研究大花紅景天、小叢紅景天和長鞭紅景天3種提取物對小鼠運(yùn)動性疲勞的影響，將6周齡雄性健康的小鼠，隨機(jī)分為空白對照組、大花紅景、小叢紅景天和長鞭紅景天組，觀察測定其游泳時長和生化指標(biāo)，生化指標(biāo)包括全血乳酸和血清尿素氮的含量。同時利用單因素試驗(yàn)逐級優(yōu)化3種紅景天提取條件，包括超聲時間、浸提溫度和浸提時間，觀察記錄小鼠的游泳時長，以確定最佳提取條件。游泳時長和生化指標(biāo)結(jié)果表明，與空白對照相比，3種提取物均能明顯提高小鼠的游泳時長，降低全血乳酸和血清尿素氮的含量（<0.05），其中大花紅景天提取物的效果最佳。提取條件優(yōu)化結(jié)果顯示，大花紅景天最優(yōu)提取條件為超聲時間4min、浸提溫度70℃和浸提時間1.5h；小叢紅景天最優(yōu)提取條件為超聲時間4min、浸提溫度60℃和浸提時間2.0h；長鞭紅景天最優(yōu)提取條件為超聲時間2min、浸提溫度70℃和浸提時間1.5h。綜上，3種紅景天均具有抗疲勞作用，其中大花紅景天抗疲勞效果最好。

關(guān)鍵詞大花紅景天；單因素法；抗疲勞；力竭游泳時間

中圖分類號R285.5；S85 文獻(xiàn)標(biāo)識碼A 文章編號1007-7731（2024）20-0085-04

DOI號10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2024.20.018

Effects of three extracts on exercise-induced fatigue in mice

ZHANG Yiting LIU Ran YU Bo XU Li ZHAO Xiaoju

（Daqing Normal University， Daqing 163712， China）

Abstract To investigate the effects of three extracts of ， andon exercise-induced fatigue in mice， male mice aged 6 weeks were randomly divided into blank control group， ， and groups. The swimming time and biochemical indexes， including the content of whole blood lactic acid and serum urine nitrogen， were observed and measured. At the same time， the single factor experiment was used to optimize the three extraction conditions of Rhodiola， including ultrasonic tim61205bf39577cd7c32fb24b388c1d636d32365388da7d6291e8e3aab8e2fceffe， extraction temperature and extraction time， and the swimming time of mice was observed to determine the best extraction conditions. The results of swimming time and biochemical indexes showed that compared with the blank control group， the three extracts could significantly improve the swimming time of mice， reduce the content of whole blood lactic acid and serum urine nitrogen （<0.05）， and the extract of had the best effect. The results of optimization of extraction conditions showed that the optimal extraction conditions of were ultrasonic time of 4min， extraction temperature of 70℃ and extraction time of 1.5h. The optimal extraction conditions of were ultrasonic time of 4min， extraction temperature of 60℃ and extraction time of 2.0h. The optimal extraction conditions of were ultrasonic time of 2min， extraction temperature of 70℃ and extraction time of 1.5h. In summary， all 3 species had anti-fatigue effect， and had the best anti-fatigue effect.

Keywords ; single factor method; anti-fatigue; exhaustive swimming time

紅景天屬（sp.）約有73種，主要分布于西南、華中、西北、華北以及東北等地區(qū)^[1]，其種類多，量大，是一種常用藥材，多以根、莖或全草入藥；無毒，能補(bǔ)腎和理氣養(yǎng)血等^[2]。該植物中的化學(xué)成分種類豐富，主要包括黃酮類、苯乙烷類和苯丙素類等^[3]。屈珅玥^[4]和吳亞茹^[5]研究表明，其具有抗膽汁淤積和腫瘤的作用；胡櫻等^[6]和于冬建^[7]研究發(fā)現(xiàn)，其上具有保護(hù)肝臟、抗炎、抗氧化、抗疲勞、抗缺氧、抗輻射和抗病毒等作用，在保健和治療等方面應(yīng)用廣泛。

在眾多紅景天屬植物中，僅大花紅景天（）收載于《中華人民共和國藥典》。近年來，人們對大花紅景天的需求不斷增加，其野生資源數(shù)量有限，紅景天屬植物的原植物形態(tài)相似，均具有指標(biāo)性成分紅景天苷^[8]，因此有必要對紅景天屬植物藥理學(xué)作用進(jìn)行研究。本試驗(yàn)選取3種紅景天屬植物大花紅景天、小叢紅景天（）和長鞭紅景天（）提取物進(jìn)行抗疲勞試驗(yàn)，比較3種紅景天提取物對小鼠運(yùn)動性疲勞作用；以小鼠游泳時長為指標(biāo)，選取超聲時間、浸提溫度和浸提時間3個因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，探究3種提取物的最佳提取條件，為紅景天屬植物進(jìn)一步開發(fā)和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與試劑

大花紅景天、小叢紅景天和長鞭紅景天，購于亳州圣禾堂藥業(yè)。全血乳酸測試盒（南京建成生物工程研究所）、血尿素氮測試盒（南京建成生物工程研究所）；其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 試驗(yàn)儀器

UV752N分光光度計（上?？茖W(xué)精密儀器廠）、BSA-CW電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、CS501恒溫水浴鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）、PL-S100超聲波清洗機(jī)（東莞康士潔超聲波科技有限公司）和SIGMA3-30K離心機(jī)（德國Sigma公司）。

1.3 試驗(yàn)動物

6周齡健康SPF級C57雄性小鼠240只，體重18～22 g，分3批次引進(jìn)，每批次80只，試驗(yàn)動物許可證號：SCXK（黑）2024-002。群籠飼養(yǎng)，5只/籠。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 紅景天提取液制備 3種紅景天分別于60℃恒溫箱烘干，粉碎后過60目篩，準(zhǔn)確稱重后按1∶30料液比（g/mL）加入40%乙醇，室溫浸泡24h，超聲破碎2min，70℃水浴浸提2h，4 000 r/min離心5min取上清液，蒸發(fā)濃縮至一定體積，制備相當(dāng)于10mg/mL生藥材的紅景天提取液，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 試驗(yàn)分組將小鼠隨機(jī)分為4個組，即空白對照組、大花紅景天組、小叢紅景天組和長鞭紅景天組。各組小鼠自由攝食和飲水，3個紅景天組按0.05mL/20 g灌胃給予提取物，每日1次，持續(xù)15 d，空白對照組給予等體積蒸餾水。參考謝磊^[9]研究方法，小鼠于末次灌胃1h后將其置于水溫（25±1）℃、水深約30cm的游泳箱中游泳。

1.4.3 提取條件優(yōu)化 以小鼠游泳時長為指標(biāo)，選取超聲時間、浸提溫度和浸提時間3個因素進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。3種紅景天分別采用不同的超聲時間（2、4、6、8和10min）、浸提溫度（60、70、80、90和100℃）和浸提時間（1.0、1.5、2.0、2.5和3.0h）進(jìn)行提取條件優(yōu)化。

1.5 測定指標(biāo)和方法

1.5.1 游泳時長記錄 每只小鼠從游泳開始到水下動作失去協(xié)調(diào)，頭部無力浮出水面10s時立即撈出，記為該鼠力竭游泳時長。

1.5.2 生化指標(biāo)測定 擦干小鼠體表水后斷頭取血，分為3份，1份按照全血乳酸試劑盒說明書操作繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），測定樣品530 nm處吸光度值，按全血乳酸含量計算公式計算其血清中的乳酸含量；1份按血尿素氮試劑盒說明書操作測定樣品640 nm處吸光度值，按血尿素氮含量計算公式計算血清中的尿素氮含量；1份盛裝于無菌離心管內(nèi)，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。計算公式如式?）～（2）。

（1）

其中，為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，3mmol/L；為樣品測試前稀釋倍數(shù)，7倍。

（2）

其中，為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，10mmol/L；為樣品測試前稀釋倍數(shù)，10倍。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

所有數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理，以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取物對小鼠游泳時長的影響

如表1所示，與空白對照組相比，3種紅景天組的小鼠游泳時長均明顯增加（<0.05），分別是空白對照組的3.68、2.51和2.37倍，其中大花紅景天組小鼠游泳時間最長（98.3min），小叢紅景天組和長鞭紅景天組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（0.05）。表明紅景天可以明顯提高小鼠的運(yùn)動耐力，以大花紅景天的提高效果較好。

2.2 不同提取物對小鼠生化指標(biāo)的影響

由表2可知，與空白對照組相比，大花紅景天組、小叢紅景天組和長鞭紅景天組的全血乳酸含量明顯降低（<0.05），分別降低32.4%、11.3%和19.6%，大花紅景天組、小叢紅景天組和長鞭紅景天組的血清尿素氮含量明顯低于空白對照組，分別降低22.0%、6.5%和12.8%。小叢紅景天組和長鞭紅景天組全血乳酸和血清尿素氮差異無統(tǒng)計學(xué)意義（0.05）。以上結(jié)果表明，大花紅景天組降低全血乳酸和血清尿素氮含量效果最好。

2.3 不同提取條件對小鼠游泳時長的影響

2.3.1 超聲時間 由圖2可知，大花紅景天組和小叢紅景天組小鼠平均游泳時長隨著超聲時間增加變化趨勢基本相同，呈先上升后下降趨勢；在超聲處理4min時，平均游泳時長達(dá)到峰值，分別為88.7和63.5min。長鞭紅景天組小鼠平均游泳時長隨著超聲時間增加呈平穩(wěn)下降趨勢；在超聲處理2min時，平均游泳時長最長，為54.4min?？偟目磥?，超聲時長對大花紅景天組和小叢紅景天組小鼠的平均游泳時長影響較大，對長鞭紅景天組影響較小。

2.3.2 浸提溫度 由圖3可知，大花紅景天組小鼠平均游泳時長隨著浸提溫度升高呈先增加后下降趨勢，在浸提溫度70℃時達(dá)到峰值，為93.1min。小叢紅景天組和長鞭紅景天組小鼠平均游泳時長低于大花紅景天組，小叢紅景天組在60℃時達(dá)到峰值，為66.4min；長鞭紅景天組在70℃時達(dá)到峰值，為53.8min。由此可知，浸提溫度對小鼠的平均游泳時長有較大影響。

2.3.3 浸提時間 由圖4可知，大花紅景天組在浸提1.5h時，小鼠平均游泳時長達(dá)到峰值，為98.3min；隨著浸提時間增加，小鼠平均游泳時長出現(xiàn)下降。小叢紅景天組和長鞭紅景天組游泳時間相差不大，均低于大花紅景天組；隨著浸提時間增加，小叢紅景天組小鼠平均游泳時長先上升后下降，在浸提2.0h時，平均時間最長，為67min；長鞭紅景天組在浸提1.5h時，小鼠平均游泳時長達(dá)到峰值，為63.2min。由此可知，浸提時間對小鼠游泳時長的影響較大。

3 結(jié)論與討論

力竭游泳時間是反映機(jī)體運(yùn)動耐力的重要指標(biāo)之一，全血乳酸含量可以反映機(jī)體有氧代謝能力、疲勞產(chǎn)生和消除的速度；血清尿素氮的含量與機(jī)體機(jī)能、疲勞程度密切相關(guān)，這兩個指標(biāo)是反映機(jī)體疲勞的代表性生化指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，大花紅景天、小叢紅景天和長鞭紅景天提取物均可以明顯延長小鼠游泳力竭時間，降低小鼠的全血乳酸和血清尿素氮含量，生化指標(biāo)的測定結(jié)果與小鼠游泳時長測定結(jié)果相吻合。結(jié)果表明，大花紅景天、小叢紅景天和長鞭紅景天具有相似作用，可提升小鼠運(yùn)動水平，降低其全血乳酸和血尿素氮含量，以起到抗疲勞的作用。王藝博等^[10]研究發(fā)現(xiàn)，大株紅景天可明顯降低小鼠體內(nèi)的血清尿素氮和乳酸的含量。本研究結(jié)果與此研究結(jié)果一致。

綜bwT+RE2+xYdE9x+oaGwSu4HWS7HJcSO/VJUgyX5Zis0=上，本研究通過研究大花紅景天、小叢紅景天和長鞭紅景天3種提取物對小鼠游泳時長和抗疲勞的影響，發(fā)現(xiàn)3種提取物均能有效延長小鼠游泳力竭時間，降低其體內(nèi)的全血乳酸和血清尿素氮含量，具有一定的抗疲勞作用，其中大花紅景天提取物的抗疲勞效果較好。通過優(yōu)化提取條件發(fā)現(xiàn)，大花紅景天最優(yōu)提取條件為超聲時間4min、浸提溫度70℃和浸提時間1.5h；小叢紅景天最優(yōu)提取條件為超聲時間4min、浸提溫度60℃和浸提時間2.0h；長鞭紅景天最優(yōu)提取條件為超聲時間2min、浸提溫度為70℃和浸提時間1.5h。本研究結(jié)果為紅景天屬植物的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供參考。

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（責(zé)任編輯：胡立萍）

基金項(xiàng)目大慶市指導(dǎo)性科技計劃項(xiàng)目（zd-2021-18）。

作者簡介張奕婷（1983—），女，黑龍江大慶人，碩士，副教授，從事發(fā)酵工藝及活性物質(zhì)分離純化研究。