22種金花茶顯微結(jié)構(gòu)差異分析

摘要：采用生藥學(xué)常規(guī)的顯微鑒定方法，觀察22種金花茶［Camellia petelotii （Merr.） Sealy］根、莖、葉組織結(jié)構(gòu)及粉末顯微特征。結(jié)果表明，22種金花茶葉片粉末均可見（環(huán)紋、螺紋或孔紋）導(dǎo)管、草酸鈣簇晶及不規(guī)則石細(xì)胞（分枝狀），氣孔不定式；毛瓣金花茶有較多的非腺毛，顯脈金花茶含有大量草酸鈣簇晶，大葉金花茶具有晶鞘纖維。22種金花茶的葉柵欄組織和海綿組織分化明顯，柵欄組織內(nèi)均可見草酸鈣簇晶散在，柵欄組織在葉片內(nèi)排列成1～3層；海綿組織內(nèi)散有大型分枝狀石細(xì)胞和草酸鈣簇晶。隴瑞和大葉金花茶葉主脈有相連的2束維管束，其余金花茶均只有1束維管束。22種金花茶莖橫切面主要分為木栓層、皮層、韌皮部、木質(zhì)部和髓部5部分，根據(jù)莖橫切面的皮層及韌皮部中石細(xì)胞數(shù)量可將金花茶分成2類，防城、扶綏、大葉、顯脈及恩城金花茶莖橫切面的皮層及韌皮部有石細(xì)胞環(huán)，其他金花茶莖橫切面皮層及韌皮部的石細(xì)胞較少或極少。22種金花茶根橫切面主要分為木栓層、皮層、韌皮部和木質(zhì)部4部分，對(duì)根的解剖結(jié)構(gòu)指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn)，大葉金花茶的木質(zhì)化導(dǎo)管直徑較大，是其他金花茶的3～4倍，具有鑒別意義。

關(guān)鍵詞：金花茶［Camellia petelotii （Merr.） Sealy］； 粉末特征； 顯微結(jié)構(gòu)

中圖分類號(hào)：S567.1+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2024）09-0102-12

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2024.09.018?; 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Analysis of microstructure difference of 22 Golden Camellia species

SU Meng-xue1， YAO Han-ya1， DONG Zhi-peng1， GAO Hui1， CHEN Qing1，2， HOU Xiao-tao1，3，

DENG Jia-gang1，3， XIE Yang-jiao1，2

（1.Faculty of Yao Medicine， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530200，China；2.Guangxi Key Laboratory of Efficacy Study on Chinese Materia Medica，Nanning 530200，China；3.Guangxi Talent Highland for Zhuang and Yao Medicine and Combination of Medical Care and Elderly Care， Nanning 530200，China）

Abstract： The microstructure and powder microscopic characteristics of roots， stems and leaves of 22 kinds of Golden camellia species were observed by the conventional microscopic identification method of pharmacognosy. The results showed that the 22 kinds of Golden camellia species powder could be seen （ring， thread or pore） vessel，calcium oxalate cluster crystal， irregular and branched stone cells， and infinitive stomata； the Camellia pubipetala had more non-glandular hairs， the Camellia euphlebia contained a large number of calcium oxalate cluster crystals， and the Camellia chrysantha var. had crystal sheath fibers. The palisade tissue and sponge tissue of 22 kinds of Camellia nitidissima were obviously differentiated. Calcium oxalate cluster crystals were scattered in the palisade tissue， and the palisade tissue of Golden camellia species was arranged into 1～3 layers in the leaves. Large branched stone cells and calcium oxalate cluster crystals were scattered in the sponge tissue. There were two connected vascular bundles in the Camellia longruiensis and Camellia chrysantha var.， and there was only one vascular bundle in the other Golden camellia species. The transverse section of 22 kinds of Camellia nitidissima stems was mainly divided into five parts： Cork layer， cortex， phloem， xylem and pith. According to the number of stone cells in the cortex and phloem of the transverse section of the stem， Camellia nitidissima could be divided into two categories. There were stone cell rings in the cortex and phloem of the transverse section of the stems of Camellia nitidissima， Camellia fusuien achrysantha， Camellia chrysantha， Camellia euphlebia and Camellia enchengensis. There were few or very few stone cells in the cortex and phloem of the transverse section of other Camellia nitidissima stems. The transverse section of 22 kinds of Camellia nitidissima roots was mainly divided into four parts： Cork layer， cortex， phloem and xylem. After analyzing the anatomical structure indexes of roots， it was found that the diameter of lignified vessels of Camellia chrysantha was larger， which was 3～4 times that of other Camellia nitidissima， and had differential significance.

Key words： Camellia petelotii （Merr.） Sealy； powder identification； microstructure

金花茶［Camellia petelotii （Merr.） Sealy］指花色金黃的一類山茶花的通稱，屬于山茶科（Theaceae Mirb.）山茶屬（Camellia L.）茶亞屬（Subgen. Thea Chang）金花茶組（Sect. Chrysantha Chang）的常綠灌木或小喬木，主要分布于中國(guó)廣西南部和西南部的亞熱帶南緣和熱帶北緣地區(qū)，越南及中國(guó)云南省有少量分布［1］。金花茶葉含有茶多酚、茶多糖、皂苷、黃酮類等多種藥用活性成分［2-4］，且富含天然有機(jī)鍺、硒、錳、鉬、釩、鋅等微量元素［5］，具有抗氧化［6］、抗炎［7］、抗腫瘤［8］、降血糖［9］、降血脂［10］等藥理作用，且因其花色為茶花里少見的金黃色，是重要的園林觀賞及藥用植物。金花茶資源分布狹窄，全世界90%的野生金花茶僅分布于中國(guó)廣西防城港市十萬大山的蘭山支脈一帶［11］，為廣西特色植物，因其資源極少，目前被列為國(guó)家二等保護(hù)植物［12］。為保護(hù)其資源并加以開發(fā)利用，人工種植金花茶在廣西得到大力推廣，目前僅廣西防城港市種植金花茶達(dá)4 000多公頃。但全世界已發(fā)現(xiàn)的金花茶組植物多達(dá)42個(gè)種5個(gè)變種［13］，根據(jù)廣西中醫(yī)藥大學(xué)瑤醫(yī)藥學(xué)院課題組前期研究可知，這42個(gè)種的分類仍存在較大問題，有的種僅因?yàn)榈乩韥碓匆恢卤粴w入同一個(gè)種，因此，金花茶的分類并不完善，金花茶組植物的分類及應(yīng)用較為混亂，栽培金花茶種質(zhì)不統(tǒng)一，質(zhì)量差異明顯，對(duì)金花茶的質(zhì)量檢測(cè)和產(chǎn)業(yè)開發(fā)帶來困難。

不同金花茶種間表型性狀、顯微結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分等均存在差異［14-16］，部分金花茶可根據(jù)表形性狀進(jìn)行鑒定，但許多金花茶種間結(jié)構(gòu)相似，如四季金花茶和檸檬黃金花茶表型性狀差異小，較難根據(jù)表型性狀進(jìn)行區(qū)分。梁盛業(yè)［1］對(duì)廣西境內(nèi)28種金花茶的原植物形態(tài)及顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，但未對(duì)28種金花茶的種間差異和分類鑒定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)闡述?！稄V西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》僅對(duì)顯脈金花茶葉的橫切面和粉末薄層鑒別進(jìn)行了規(guī)定［17］；《湖北省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》［18］和《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》［19］中僅記載金花茶和顯脈金花茶的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，因此，目前各金花茶種仍未建立可靠的鑒定方法。為準(zhǔn)確鑒定金花茶組植物，有效利用金花茶資源，有必要對(duì)金花茶組植物的系統(tǒng)鑒定技術(shù)進(jìn)行研究。

本研究對(duì)來源于廣西境內(nèi)的22種金花茶根、莖和葉組織結(jié)構(gòu)及粉末顯微特征等進(jìn)行較為系統(tǒng)的探究，并分析各金花茶種間顯微結(jié)構(gòu)差異，可為建立該22種金花茶的顯微鑒定方法提供基本數(shù)據(jù)，進(jìn)而為金花茶組植物的產(chǎn)業(yè)開發(fā)和高效利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

22種金花茶樣品采集于廣西防城港市東興市江平鎮(zhèn)大壢村沖峰金花茶種植基地（108°07′43″E，21°38′40″N，海拔54.6 m），其原植物于2014—2017年引種于廣西各地。由南寧市金花茶公園基因庫主管黃連冬高級(jí)園林工程師鑒定為金花茶原植物。樣品詳細(xì)信息見表1。

1.2 儀器與設(shè)備

所用儀器與試劑的詳細(xì)信息見表2。

1.3 方法

1.3.1 試驗(yàn)方法

1）粉末鑒定法。參照生藥常規(guī)粉未顯微制片方法制片［20］，于顯微鏡下觀察。

2）組織切片法。用流水將新鮮的22種金花茶洗凈，選取正常完整的根、莖、葉，切成2～3 mm的小段于FAA固定液（福爾馬林-乙酸-乙醇）（10%甲醛5 mL+冰醋酸5 mL+70%乙醇90 mL）中24 h，按常規(guī)石蠟制片法制作金花茶根、莖、葉組織切片，最后用番紅-固綠染色，中性樹膠封片［21］。在顯微鏡下觀察其特征。

將制作好的金花茶葉片切片、莖橫切片、根橫切片在光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照，利用 MIE3.1測(cè)量金花茶葉片切片主脈維管束高度、柵欄組織厚度、葉片厚度、葉肉厚度、海綿組織厚度、柵欄比、柵欄/葉肉（柵欄組織厚度/葉肉厚度）、主脈維管束高度/葉片厚度、組織結(jié)構(gòu)致密度和組織結(jié)構(gòu)疏松度，測(cè)量金花茶莖橫切片木栓層、皮層、韌皮部、木質(zhì)部和髓部，測(cè)量金花茶根橫切片木栓層、皮層、韌皮部和木質(zhì)部。

柵欄比=柵欄組織厚度/海綿組織厚度×100%

（1）

組織結(jié)構(gòu)緊密度=柵欄組織厚度/葉片厚度×100% （2）

組織結(jié)構(gòu)疏松度=海綿組織厚度/葉片厚度×100% （3）

1.3.2 數(shù)據(jù)分析方法 采用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)22種金花茶葉、莖、根的解剖結(jié)構(gòu)特征指標(biāo)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），基于特征指標(biāo)分析結(jié)果，采用SIMAC-P14.1 軟件進(jìn)行主成分分析（PCA）。

2 結(jié)果與分析

2.1 22種金花茶葉片粉末顯微特征及種間差異

22種金花茶葉片粉末灰綠色，均具有螺紋導(dǎo)管，直徑0.4～1.8 μm，F(xiàn)P具有孔紋導(dǎo)管和環(huán)紋導(dǎo)管；石細(xì)胞長(zhǎng)徑5～29 μm，短徑2～14 μm，間隙0～8 μm，多數(shù)單個(gè)散在，呈I形、X形、T形、卵圓形、類方形、類三角形；草酸鈣簇晶多見，方晶少見，直徑1～8 μm，棱角明顯，其中XM的簇晶極多，F(xiàn)P、DY、BH、EC中有極少量草酸鈣方晶；纖維單個(gè)散在或多個(gè)成束，微木化或木化，多較直，少有彎曲或扭曲，長(zhǎng)達(dá)35 μm以上，直徑0.5～1.0 μm，纖維類型多數(shù)為間隔纖維，F(xiàn)P、DX、FS、LA、LR、NM、SJ、WM可見單個(gè)木纖維細(xì)胞，DY具有晶鞘纖維；下表皮細(xì)胞多呈多角形，細(xì)胞壁較薄，直徑14～32 μm；氣孔較多，不定式，多數(shù)氣孔打開，少見閉合；MB具有較多的非腺毛，長(zhǎng)20 μm，呈線形，表面可見交叉紋路。22種金花茶葉片粉末顯微特征示意見圖1。

2.2 22種金花茶葉片橫切面顯微結(jié)構(gòu)及種間差異

2.2.1 顯微結(jié)構(gòu) 22種金花茶葉片橫切面結(jié)構(gòu)如圖2所示。葉片橫切面上下表皮細(xì)胞較大，呈近長(zhǎng)方形或橢圓形，排列呈乳突狀。柵欄組織和海綿組織分化明顯；柵欄組織在葉片內(nèi)排列成1、2、3層，其中排列成1層的金花茶只有BY，排列成3層的金花茶只有EC，其余均排列成2層，可見草酸鈣簇晶散在；海綿組織細(xì)胞形狀不規(guī)則，排列疏松，細(xì)胞間隙較大，散有大型分枝狀石細(xì)胞和草酸鈣簇晶。葉主脈有1束或相連的2束維管束，其中有2束維管束的金花茶分別為L(zhǎng)R和DY，其余金花茶為1束維管束；主脈維管束為無限外韌型，呈U形，上下2側(cè)均被厚壁組織包圍；韌皮部和木質(zhì)部分層明顯，木質(zhì)部細(xì)胞排列緊密，導(dǎo)管分布較多。MB葉片橫切面上下表皮被有非腺毛，其余均無非腺毛。

2.2.2 22種金花茶葉片組織結(jié)構(gòu)差異分析 采用SPSS軟件對(duì)22種金花茶葉片解剖結(jié)構(gòu)各特征指標(biāo)進(jìn)行單因素差異顯著性分析（表3），發(fā)現(xiàn)22種金花茶葉片解剖結(jié)構(gòu)特征指標(biāo)存在顯著性差異。除DS與NG、DLY，LA與FP、TE，WM與EC，NMH與AM，AM與DY之間葉片主脈維管束高度無顯著差異外，其余11種金花茶之間均具有顯著差異。除EC與DS，ZD與FS、SJ，DY與WM、AM、DH，F(xiàn)P與NG、LA、XM、TE、MB、DLY、XY、DX、NMH，NG與LR、FP、NMH、XY、DX、DLY、MB、LZ，NMH與LR、FP、XY、TE、DX、DLY、XM之間葉片柵欄組織厚度差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，BY與其他21種金花茶之間均具有顯著差異。除ZD與SJ，F(xiàn)S與DS，F(xiàn)P與EC、DX，DLY與LZ、LA、BY、XY、DY、WM、NG、DH，MB與DY、XM、LA、TE、LR，DY與NG、XY、BY、LA之間葉片厚度差異不顯著外，其余各種間具有顯著差異，AM和NMH與除自身外的其余21種金花茶之間具有顯著差異。除FS與DS，F(xiàn)P 與DX、EC， LR與NMH、MB、TE、XM，DH與XY、BY、NG、LA、DY、DLY、WM、LZ之間葉肉厚度差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，其中ZD、SJ、AM 與其余21種金花茶之間均具有顯著差異。除FS與DS、SJ，EC與DX、FP，NMH與TE、XM、LR，DY與XY、NG、LA、DLY、BY、DH、WM、LZ，NG與XY、MB、DH之間海綿組織厚度差異不顯著外，其余各金花茶種之間均具有顯著差異，其中ZD和AM與除自身外的其余21種金花茶之間均具有顯著差異。除FS與ZD、SJ、FP、DX、DY，F(xiàn)P與SJ、FS、LR、DH、NMH、WM、DY、DX，LR與DH、NMH、WM、TE、BY、MB、XM，EC與NG、XY、LZ、DS、AM、DLY，DH與FP、SJ、NMH、WM、DY、DX、MB，NG與DS、XY、TE、BY、MB、XM、LZ，TE與DS、NG、XM、MB、WM、NMH、DH、XY、BY，AM與DLY、LA、LZ之間柵欄比差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異。除LZ與NG、EC、XY、AM、DS、DLY，DY與ZD、DX、FS、DH，SJ與FS、FP、LR、DH、NMH、WM、DY、DX，LR與FP、NMH、WM、MB、BY，EC與DLY、LA，NG與XY、MB、XM、AM、TE、DLY，AM與DS、NG、XY、TE、DLY、XM、LZ，TE與XY、AM、NG、MB、XM、BY，MB與NMH、TE、BY、LR、NG、XY、XM之間柵欄/葉肉差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異。除BY與AM，LR與DLY、NG、LZ、DY，F(xiàn)P與FS、DH、NMH，MB與ZD、DS，XM與DX、XY，LA與DX、EC，EC與TE之間主脈維管束高度/葉片厚度差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，其中SJ和WM分別與其余21種金花茶之間均具有顯著差異。除DLY 與DS、NG、AM、TE、XY、XM、LZ、LA，LA與EC、DS，ZD與SJ、DY、FP、DH、DX，F(xiàn)S與SJ、FP、BY、LR、DH、DX、NMH、WM，F(xiàn)P與WM、DX、DH、SJ、NMH，MB與NG、LZ、XM、LR、TE、XY、BY、AM，NG與AM、XY、TE、DLY、MB、XM、LZ，LR與FS、NMH、MB、BY之間組織結(jié)構(gòu)致密度差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異。除ZD與FS，F(xiàn)S與DS、SJ、EC，DS與SJ、FP、LR、EC、NMH、TE、DX、XM，LR與SJ、FP、DS、EC、DH、NMH、NG、XY、TE、DX、MB、XM，NMH與LR、EC、DH、FP、NG、WM、XY、TE、BY、DX、MB、XM，NG與FP、DH、WM、DY、XY、TE、BY、DX、DLY、MB、XM，WM與DH、DY、XY、BY、DLY、MB、LA、LZ，DLY與NG、WM、AM、DY、XY、BY、DH、LA、LZ，XY與DH、DY、TE、BY、MB、XM、LZ之間組織結(jié)構(gòu)疏松度差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異。

根據(jù)表4各特征指標(biāo)相關(guān)性分析可知，各參數(shù)間存在一定的相關(guān)性。主脈維管束高度僅與主脈維管束高度/葉片厚度呈極顯著正相關(guān)，與其余參數(shù)均無顯著相關(guān)。柵欄組織厚度與葉片厚度、葉肉厚度、海綿組織厚度、柵欄比、柵欄/葉肉、組織結(jié)構(gòu)致密度呈極顯著正相關(guān)，與組織結(jié)構(gòu)疏松度呈顯著正相關(guān)，與主脈高度/葉片厚度呈極顯著負(fù)相關(guān)；葉片厚度除與主脈維管束高度無顯著相關(guān)外，與其余參數(shù)均呈極顯著相關(guān)，其中，與葉肉厚度、海綿組織厚度和組織結(jié)構(gòu)疏松度呈極顯著正相關(guān)，與柵欄比、柵欄/葉肉、主脈高度/葉片厚度、葉片結(jié)構(gòu)致密度呈極顯著負(fù)相關(guān)；葉肉厚度與海綿組織厚度、組織結(jié)構(gòu)疏松度呈極顯著正相關(guān)，與柵欄比、柵欄/葉肉、主脈維管束高度/葉片厚度、葉片組織結(jié)構(gòu)致密度呈極顯著負(fù)相關(guān)；海綿組織厚度與葉片組織結(jié)構(gòu)疏松度呈極顯著正相關(guān)，與柵欄比、柵欄/葉肉、主脈維管束高度/葉片厚度、組織結(jié)構(gòu)致密度呈極顯著負(fù)相關(guān)；柵欄比與柵欄/葉肉、組織結(jié)構(gòu)致密度呈極顯著正相關(guān)，與主脈高度/葉片厚度無顯著相關(guān)，與葉片結(jié)構(gòu)疏松度呈極顯著負(fù)相關(guān)；柵欄/葉肉與葉片結(jié)構(gòu)致密度呈極顯著正相關(guān)，與主脈維管束高度/葉片厚度呈顯著正相關(guān)，與葉片結(jié)構(gòu)疏松度呈極顯著負(fù)相關(guān)；葉片結(jié)構(gòu)致密度與主脈維管束高度/葉片厚度呈正相關(guān)，與葉片結(jié)構(gòu)疏松度呈負(fù)相關(guān)；葉片結(jié)構(gòu)疏松度與主脈維管束高度/ 葉片厚度呈負(fù)相關(guān)。

2.2.3 各指標(biāo)主成分分析結(jié)果 對(duì)葉片解剖特征顯微參數(shù)（10個(gè)指標(biāo)的轉(zhuǎn)化值）進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析。由分析結(jié)果（圖3）可知，不同的葉片解剖特征對(duì)金花茶分類結(jié)果貢獻(xiàn)率存在差異。采用SIMAC-P14.1軟件進(jìn)行主成分分析（PCA），可擬合出3個(gè)主成分，各主成分貢獻(xiàn)率：PC1=47.30%，PC2=29.40%，PC3=15.50%，總貢獻(xiàn)率為 92.20%，能夠解釋樣品中大多數(shù)的差異信息。圖3c中間虛線表示每種成分均值，靠近均值的虛線表示警戒線，最外側(cè)虛線表示臨界線，除四季金花茶和中東金花茶在3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差（s）范圍內(nèi)外，其他金花茶均在2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍內(nèi)，表明該方法具有很好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，表明本試驗(yàn)所獲取的數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠。主成分載荷如圖3d所示，葉片厚度、葉肉厚度、海綿組織厚度、柵欄比、組織結(jié)構(gòu)致密度、柵欄/葉肉在22種金花茶種質(zhì)鑒定上發(fā)揮重要貢獻(xiàn)。對(duì)22種金花茶樣品分層凝聚聚類（Hierarchical agglomerative clustering，HAC），自下而上聚為一類。

2.3 22種金花茶莖橫切面顯微結(jié)構(gòu)及種間差異

2.3.1 顯微結(jié)構(gòu) 如圖4所示，莖橫切面周皮較厚，皮層和韌皮部均有石細(xì)胞散在。FP、FS、DY、XM和EC金花茶莖皮層和韌皮部可見2～3層石細(xì)胞散在，形狀不同，大小不一，圍繞成1圈，成為石細(xì)胞環(huán)；LR、WM、NG、LZ、LA、MB、DLY、DX、BY、TE、XY、AM、NMH、DH、ZD、SJ和DS金花茶莖皮層和韌皮部只有少量石細(xì)胞；韌皮部均較窄，射線單列，形成層不明顯；髓部薄壁細(xì)胞多大型近圓形，細(xì)胞間隙不大，胞內(nèi)有簇晶，可見石細(xì)胞（圖5）。

2.3.2 22種金花茶莖顯微結(jié)構(gòu)差異分析 采用奧林巴斯顯微鏡結(jié)合其特有的 OLYMPUS-CX21型成像系統(tǒng)在20倍鏡下對(duì)莖和根的橫切結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察與測(cè)量。莖橫切片測(cè)量木栓層、皮層、韌皮部和木質(zhì)部厚度；根橫切片測(cè)量木栓層、韌皮部和木質(zhì)部厚度，每個(gè)指標(biāo)測(cè)量25次，取平均值。

采用SPSS軟件對(duì)22種金花茶莖解剖結(jié)構(gòu)各特征指標(biāo)進(jìn)行單因素差異顯著性分析。由表5可知，除NMH 與LR、XY、ZD，F(xiàn)P與LZ、XM、DLY、SJ，WM與FS、LZ、XY、ZD、DS，LA與DY、MB、TE、DH，LZ與XM、DLY、DS，NG與AM、EC，XY與FS、ZD、DS，EC與DH，AM與NG、SJ，EC與DH、NG，SJ與AM、DLY、XM、FP之間木栓層差異不顯著外，其余各種金花茶木栓層之間均具有顯著差異，其中DX和BY分別與除自身外的其余21種金花茶之間均具有顯著差異。除LR與FP、DH、SJ、DY、DX，DY與XM、DX、EC，WM與XY，DX與FP、DY、XM、SJ，MB與LZ、LA、NG、DLY、BY、TE、NMH之間皮層差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著性差異，其中FS、AM、ZD和DS分別與除自身外的其余21種金花茶之間均具有顯著差異。除FP與XM、BY、TE，F(xiàn)S與LZ、MB、DLY、XY、ZD，DY與NG、LA、AM、NMH、DH、EC、SJ，WM與DX、XY，XY與MB、FS、WM、ZD之間韌皮部差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，其中LR和DS與除自身外的其余21種金花茶之間均具有顯著差異。除FSZD與LR，DLY與DY、DH，WM與NG，XY與MB、LZ、LA、XM、DS，XM與LA、SJ、DS、BY、TE、AM、NMH、EC之間木質(zhì)部差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著性差異，其中DX、FS和FP分別與除自身外的其余21種金花茶之間均具有顯著差異。除MB與LR、LA、BY、TE，F(xiàn)P與LZ、XY，F(xiàn)S與DLY、AM，EC與WM、DS、XY，LZ與DH，LA與NMH，NMH與DH之間髓部差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，其中DX、ZD、NG、DY、XM和SJ這6種金花茶分別與除自身外的其余21種金花茶之間均具有顯著差異。

由表6可知，木栓層與皮層和木質(zhì)部無顯著相關(guān)，與韌皮部呈極顯著負(fù)相關(guān)，與髓部呈顯著負(fù)相關(guān)；皮層與韌皮部和木質(zhì)部呈極顯著正相關(guān)，與髓部相關(guān)不顯著；韌皮部與木質(zhì)部呈極顯著正相關(guān)，與髓部呈極顯著負(fù)相關(guān)；木質(zhì)部與髓部呈極顯著負(fù)相關(guān)。

22種金花茶莖橫切片比例如圖6所示，NG、MB、BY和TE的木栓層占比最高，為5%，LY的木栓層占比最低，為1%；LY和MB的韌皮部占比最高，為8%，DS的韌皮部占比最低，為2%；DX的木質(zhì)部占比最高，為61%，其次是ZD，為59%，F(xiàn)P的木質(zhì)部占比最低，為17%；FP的髓部占比最高，為75%，其次是SJ，為69%，DX的髓部占比最低，為29%。

2.3.3 各指標(biāo)主成分分析結(jié)果 對(duì)樣品的莖解剖特征顯微參數(shù)（10個(gè)指標(biāo)的轉(zhuǎn)化值）進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析。由分析結(jié)果（圖7）可知，不同的莖解剖特征對(duì)金花茶分類結(jié)果貢獻(xiàn)率存在差異。主成分分析（PCA）可擬合出2個(gè)主成分，各主成分貢獻(xiàn)率分別為PC1=36.2%，PC2=22.2%，總貢獻(xiàn)率為58.5%，能夠解釋樣品中大多數(shù)的差異信息。圖7c中除頂生金花茶、隆瑞金花茶和東興金花茶在3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍內(nèi)，其他種金花茶均在2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍內(nèi)，表明該方法具有很好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，本試驗(yàn)所獲取的數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠。聚類結(jié)果如圖7d所示，自下而上各聚為一類。

2.4 22種金花茶根橫切面顯微結(jié)構(gòu)及種間差異

2.4.1 顯微結(jié)構(gòu) 根橫切面呈近圓形，木栓層較厚，由4～8列細(xì)胞組成，細(xì)胞類長(zhǎng)方形，排列緊密，規(guī)則；皮層細(xì)胞排列疏松，具有明顯的細(xì)胞間隙（圖8）。在皮層和韌皮部可見少量石細(xì)胞散在，直徑2～10 μm，排列斷續(xù)、不規(guī)則；皮層和髓部有石細(xì)胞和草酸鈣簇晶散在；木質(zhì)部均較發(fā)達(dá)，木纖維和導(dǎo)管較多，射線明顯。扶綏金花茶木質(zhì)部中央存在木質(zhì)化細(xì)胞；大葉金花茶木質(zhì)部細(xì)胞巨大，直徑1～15 μm。

[1][2][3][4][5][7][6][8][9]

1.木栓層；2.皮層；3.石細(xì)胞；4.韌皮部；5.射線；6.木質(zhì)部；7.木質(zhì)化導(dǎo)管；8.髓部；9.草酸鈣簇晶

2.4.2 22種金花茶根顯微結(jié)構(gòu)差異分析 采用SPSS軟件對(duì)22種金花茶根解剖結(jié)構(gòu)各特征指標(biāo)進(jìn)行單因素差異顯著性分析。由表7可知，除FP與LA、XY、NMH、EC、SJ、DS，F(xiàn)S與FP、LA、DLY、NMH、DS，WM與XM、MB、DX、BY，NG與TE、AM、DH，BY與XM、DX、XY、EC、SJ，DLY與LR、LZ、ZD、DS，XY與LA、NMH、EC、SJ之間根木栓層差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，DY與其余21種金花茶均具有顯著差異；除LR與FP、FS、BY、AM、EC，WM與LZ、XM、MB、DH、ZD，NG與DX、TE、XY、SJ、DS，LZ與XM、DH、AM、ZD，DLY與NMH、SJ，AM與BY，SJ與TE、DS之間根皮層差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，其中DY和LA均分別與除自身外的其余21種金花茶之間具有顯著差異；除 FS與NG，XM與WM、DX，DX與TE，TE與BY、DLY、XY、AM、NMH、DS，DH與EC、ZD、SJ、LZ、LA、DLY、BY、AM，AM與LZ、DLY、BY、TE、XY、NMH、EC、ZD、SJ、DS之間韌皮部差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異，其中LR、FP、DY和MB均分別與除自身外的其余21種金花茶之間具有顯著差異；除LR與FP、FS、LA、DX、BY、XY、AM、DH、EC、SJ、DS，WM與NG、XM，LZ與MB，DH與FP、FS、LA、AM、EC、ZD，XM與DY、DLY、TE、NMH之間木質(zhì)部差異不顯著外，其余各種金花茶之間均具有顯著差異。

由表8可知，木栓層與皮層、韌皮部呈極顯著正相關(guān)，與木質(zhì)部相關(guān)性不顯著；皮層與韌皮部、木質(zhì)部呈極顯著正相關(guān)；韌皮部與木質(zhì)部呈極顯著正相關(guān)。

22種金花茶根橫切片木栓層、韌皮部和木質(zhì)部占比如圖9所示，LZ的木栓層占比最高，為21%，WM的木栓層占比最低，為3%；DY的韌皮部占比最高，為15%，DX的韌皮部占比最低，為5%；XM和DX的木質(zhì)部占比最高，為90%，LZ的木質(zhì)部占比最低，為70%。

2.4.3 各指標(biāo)主成分分析結(jié)果 由圖10可以看出，主成分分析（PCA）可擬合出2個(gè)主成分，各主成分貢獻(xiàn)率：PC1=35.30%，PC2=23.70%，總貢獻(xiàn)率為 59.00%，能夠解釋樣品中大多數(shù)的差異信息。聚類結(jié)果如圖10d所示，自下而上聚為2類，第1類包括FS、NG，其余20種金花茶歸于第2類。

3 討論

植物鑒定技術(shù)是鑒定植物基原的重要技術(shù)，其中顯微鑒定法是傳統(tǒng)鑒別技術(shù)里重要的組成部分。雖化學(xué)指紋圖譜、生物鑒定等新技術(shù)已漸漸普及，但傳統(tǒng)的鑒定技術(shù)仍是植物來源鑒定不可或缺的部分。目前，許多常用中藥均建立了成熟的鑒定方法，但金花茶組植物系統(tǒng)的鑒定技術(shù)尚未建立。金花茶1984年被列為國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物（由于人工大面積的種植，2021年降為國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物），其野生資源已瀕臨滅絕，目前所能采集到的金花茶均來自近30年來的人工保育和種植。金花茶組植物種類繁多，但根據(jù)金花茶品質(zhì)分類鑒定標(biāo)準(zhǔn)及基于DNA條形碼的遺傳多樣性基礎(chǔ)研究課題組前期研究和調(diào)研發(fā)現(xiàn)，金花茶組植物的分類存在一定的問題，如所采集到的龍州金花茶，同一條件下其化學(xué)指紋圖譜可分為3類，表型性狀也具有較大差異，表明目前的金花茶組植物物種分類并不準(zhǔn)確。因此，目前種植的金花茶種質(zhì)不一，質(zhì)量差異顯著，為金花茶質(zhì)量檢測(cè)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展帶來阻礙。由于科技工作者對(duì)新興技術(shù)的盲目追求，許多簡(jiǎn)單卻必要的基礎(chǔ)研究被漠視，現(xiàn)階段植物傳統(tǒng)的鑒定技術(shù)鮮有研究，使許多仍未被研究的植物缺少基本的鑒定技術(shù)。鑒于金花茶資源的珍稀及人工種植金花茶種質(zhì)的混雜，為發(fā)掘新的金花茶資源和提高金花茶種植產(chǎn)品的純度、促進(jìn)金花茶質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制定，本研究對(duì)金花茶顯微鑒定技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，以期為金花茶鑒定技術(shù)及質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)的建立提供依據(jù)。

從本研究對(duì)22種金花茶根、莖、葉組織結(jié)構(gòu)和葉片粉末特征的研究結(jié)果可以看出，金花茶組植物為同屬植物，其顯微結(jié)構(gòu)基本一致，多數(shù)顯微特征可在所測(cè)試的金花茶種中體現(xiàn)。但由于物種間存在差異，部分物種存在獨(dú)有的特征，如毛瓣金花茶無論粉末還是葉片，均可見非腺毛，可用于區(qū)別其他金花茶種。

22種金花茶葉片粉末均可見（環(huán)紋、螺紋或孔紋）導(dǎo)管、草酸鈣簇晶及不規(guī)則石細(xì)胞，石細(xì)胞呈分枝狀，氣孔不定式；其中，毛瓣金花茶具有較多的非腺毛，顯脈金花茶含有大量草酸鈣簇晶，大葉金花茶具有晶鞘纖維。

22種金花茶葉片橫切面主要分為上/下表皮、柵欄組織、木質(zhì)部、韌皮部、海綿組織和厚壁組織，有大型石細(xì)胞散在。根據(jù)葉橫切面的柵欄組織在葉片內(nèi)排列層數(shù)可將金花茶分成3類，其中，薄葉金花茶的柵欄組織在葉片內(nèi)排列成1層，恩城金花茶的柵欄組織在葉片內(nèi)排列成3層，其他金花茶柵欄組織在葉片內(nèi)排列成2層。

22種金花茶莖橫切面主要分為木栓層、皮層、韌皮部、木質(zhì)部和髓部5部分，根據(jù)莖橫切面的皮層及韌皮部中石細(xì)胞數(shù)量可將金花茶分成2類，其中，防城金花茶、扶綏金花茶、大葉金花茶、顯脈金花茶及恩城金花茶莖橫切面的皮層及韌皮部有2～3層石細(xì)胞散在，圍繞1圈，成為石細(xì)胞環(huán)，其他金花茶莖橫切面皮層及韌皮部的石細(xì)胞較少或極少。

22種金花茶根橫切面主要分為木栓層、皮層、韌皮部和木質(zhì)部4部分，對(duì)根的解剖結(jié)構(gòu)指標(biāo)分析后發(fā)現(xiàn)，大葉金花茶的木質(zhì)化導(dǎo)管直徑較大，是其他金花茶的3～4倍，具有鑒別意義。扶綏金花茶根橫切面中木質(zhì)部中央存在木質(zhì)化細(xì)胞。

4 小結(jié)

22種金花茶組織結(jié)構(gòu)和葉片粉末具有極相似的特征，這些相似的特征可用于區(qū)分金花茶組植物與其他同科屬植物。部分金花茶種具有不同于其他金花茶的獨(dú)有特征，該類特征可用于金花茶組植物的種間鑒別。本研究結(jié)果可為建立金花茶組植物系統(tǒng)的鑒定技術(shù)及金花茶組植物種間鑒別提供技術(shù)支持，為金花茶組植物分類鑒定標(biāo)準(zhǔn)的制定及對(duì)其高效應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)開發(fā)提供重要的依據(jù)，對(duì)更科學(xué)合理的開發(fā)利用金花茶種質(zhì)資源具有重要的研究意義。

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收稿日期：2023-08-17

基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（2020GXNSFDA297029）；廣西中醫(yī)藥大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目（2022BS016）；2020年廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行補(bǔ)助項(xiàng)目（20-065-38）；中藥學(xué)廣西一流學(xué)科項(xiàng)目（桂教科研［2018］12號(hào)）

作者簡(jiǎn)介：蘇夢(mèng)雪（1999-），女，河南新鄉(xiāng)人，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴庂Y源開發(fā)與利用，（電話）13087903026（電子信箱）2634322352@qq.com；通信作者，謝陽姣，研究員，主要從事中藥、民族藥資源開發(fā)與利用研究，（電子信箱）xieyangjiao@163.com。