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    MiR-206、TGF-β1和Smad3在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達(dá)及意義

    2024-09-22 00:00:00吳亞男郝媛媛安泓潤(rùn)
    中國婦幼健康研究 2024年9期
    關(guān)鍵詞:子癇胎盤孕婦

    [摘 要]目的 探討妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織微小RNA-206(miR-206)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、Sma和Mad相關(guān)蛋白3(Smad3)的表達(dá)情況及臨床意義。方法 選取2020年6月至2023年1月于河北中石油中心醫(yī)院就診的60例妊娠期高血壓患者(妊娠期高血壓組)、60例子癇前期患者(子癇前期組)、60例妊娠晚期健康孕婦(對(duì)照組)為研究對(duì)象。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)miR-206、TGF-β1和Smad3的mRNA水平,采用免疫組化法檢測(cè)胎盤組織中TGF-β1和Smad3蛋白表達(dá);采用Pearson相關(guān)分析妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平與臨床資料的相關(guān)性;采用受試者工作特征(ROC)曲線分析產(chǎn)后胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平對(duì)妊娠期高血壓疾病孕婦病情的評(píng)估價(jià)值。結(jié)果 對(duì)照組、妊娠期高血壓組、子癇前期組的舒張壓、收縮壓、24h尿蛋白、TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA、TGF-β1蛋白表達(dá)陽性率、Smad3蛋白表達(dá)陽性率均依次升高,清蛋白、新生兒體重、胎盤重量、miR-206均依次降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F/χ2值介于39.400~834.610之間,P<0.05);妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織miR-206與收縮壓、舒張壓、24h尿蛋白負(fù)相關(guān),與清蛋白、新生兒體重、胎盤重量正相關(guān)(r值介于-0.514~0.507之間,P<0.05);TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA與清蛋白、新生兒體重、胎盤重量負(fù)相關(guān),與收縮壓、舒張壓、24 h尿蛋白正相關(guān)(r值介于-0.512~0.519之間,P<0.05);胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平單獨(dú)及聯(lián)合評(píng)估妊娠期高血壓疾病孕婦病情的曲線下面積(AUC)分別為0.781、0.840、0.837、0.951。結(jié)論 miR-206在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中低表達(dá),TGF-β1和Smad3高表達(dá),三者可能共同參與了妊娠期高血壓疾病進(jìn)展。

    [關(guān)鍵詞]妊娠期高血壓疾??;胎盤組織;微小RNA-206;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1;Sma和Mad相關(guān)蛋白3

    Doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2024.09.003

    [中圖分類號(hào)]R173""" [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

    [文章編號(hào)]1673-5293(2024)09-0014-07

    Expression and significance of miR-206,TGF-β1 and Smad3 in placental tissue of

    patients with hypertensive disorders of pregnancy

    [Abstract] Objective To explore the expression and clinical significance of microRNA-206 (miR-206),transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and Sma-and Mad-related protein 3 (Smad3) in placental tissue of patients with hypertensive disorders of pregnancy. Methods A total of 60 patients with gestational hypertension (gestational hypertension group),60 patients with preeclampsia (preeclampsia group),and 60 healthy pregnant women in late pregnancy (control group) who were treated at Hebei Petro China Central Hospital from June 2020 to January 2023 were selected as the study subjects.Real-time fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR) was used to detect the mRNA levels of miR-206,TGF-β1 and Smad3,and immunohistochemistry was used to detect the protein expressions of TGF-β1 and Smad3 in placental tissues.Pearson correlation was applied to analysis the correlation between the levels of miR-206,TGF-β1 mRNA and Smad3 mRNA levels in placental tissues and clinical data in patients with hypertensive disorders of pregnancy.Receiver operating characteristic (ROC) curves were used to analyze the value of postpartum placental tissue miR-206,TGF-β1 mRNA and Smad3 mRNA levels in assessing the condition of pregnant women with hypertensive disorders of pregnancy. Results The diastolic blood pressure,systolic blood pressure,24-hour urine protein,TGF-β1 mRNA,Smad3 mRNA,positive expression rate of TGF-β1 protein,and positive expression rate of Smad3 protein in the control group,gestational hypertension group,and preeclampsia group increased in turn,while albumin,neonatal weight,placental weight,and miR-206 decreased sequentially,with significant differences (F/χ2=39.400-834.610,P<0.05).In patients with gestational hypertension,miR-206 in placental tissue was negatively correlated with systolic blood pressure,diastolic blood pressure,and 24 h urine protein,and positively correlated with albumin,neonatal weight,and placental weight (r=-0.514-0.507,P<0.05).TGF-β1 mRNA and Smad3 mRNA were negatively correlated with albumin,neonatal weight and placental weight,and were positively correlated with systolic blood pressure,diastolic blood pressure,and 24 h urine protein (r =-0.512-0.519,P<0.05).The AUC of miR-206,TGF-β1 mRNA and Smad3 mRNA levels in placental tissue for alone and in combination evaluating the condition of pregnant women with hypertensive disorders were 0.781,0.840,0.837 and 0.951,respectively. Conclusion MiR-206 is lowly expressed in placental tissues of patients with hypertensive disorders,while TGF-β1 and Smad3 are highly expressed.The three may be involved in the progression of hypertensive disorders.

    [Key words] hypertensive disorders of pregnancy;placental tissues;micro RNA-206;transforming growth factor β1;Sma-and Mad-related protein 3

    妊娠期高血壓疾病是妊娠后期常見的一種妊娠期并發(fā)癥,其發(fā)病機(jī)制尚未明確[1]。妊娠期高血壓疾病患者可從妊娠期高血壓進(jìn)展為子癇前期,極易增加妊娠不良結(jié)局的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),甚至可導(dǎo)致母嬰死亡[2-3]。尋找妊娠期高血壓疾病進(jìn)展相關(guān)的生物因子,進(jìn)而深入探討妊娠期高血壓疾病的發(fā)生機(jī)制,是目前產(chǎn)科醫(yī)師急需解決的重要問題。Yousefzadeh等[4]研究表明,微小RNA-206(microRNA-206,miR-206)參與子癇前期的調(diào)節(jié)過程及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)分解代謝過程。而既往研究顯示,miR-206與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)/Sma和Mad相關(guān)蛋白3(Sma-and Mad-related protein 3,Smad3)信號(hào)通路間存在密切聯(lián)系,miR-206可通過調(diào)控TGF-β1/Smad3信號(hào)通路影響衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分化,進(jìn)而對(duì)抗骨骼肌萎縮[5]。然而妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中miR-206、TGF-β1和Smad3的表達(dá)情況仍待進(jìn)一步驗(yàn)證。因此,本研究通過檢測(cè)健康孕婦、妊娠期高血壓患者、子癇前期患者產(chǎn)后胎盤組織中miR-206、TGF-β1和Smad3的表達(dá)情況,探討三者與疾病進(jìn)展的相關(guān)性,旨在為進(jìn)一步研究妊娠期高血壓疾病的生物機(jī)制提供生物標(biāo)志物。

    1資料與方法

    1.1一般資料

    選取2020年6月至2023年1月于河北中石油中心醫(yī)院治療的120例妊娠期高血壓疾病患者作為研究對(duì)象,其中妊娠期高血壓患者(妊娠期高血壓組)60例和子癇前期患者(子癇前期組)60例,同期匹配60例妊娠晚期的健康孕婦作為對(duì)照組。收集患者一般資料,包括年齡、孕前體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)、孕周、孕次、產(chǎn)次、肌酐、血小板計(jì)數(shù)、舒張壓、收縮壓、清蛋白、24h尿蛋白、新生兒體重、胎盤重量。

    納入標(biāo)準(zhǔn):①妊娠期高血壓疾病的診斷均依據(jù)2019年專家共識(shí)[6];②患者資料完整,患者本人知情同意并簽署知情同意書;③均為單胎妊娠;④健康孕婦無妊娠期并發(fā)癥,且最終分娩健康胎兒。排除標(biāo)準(zhǔn):①出現(xiàn)宮內(nèi)死胎或胎兒染色體檢測(cè)異常;②妊娠期間存在飲酒、吸煙等不良生活習(xí)慣,或依從性較差者;③患者妊娠期間合并其他妊娠內(nèi)科合并癥或有營養(yǎng)不良、產(chǎn)前感染等病理狀況者;④有甲狀腺功能亢進(jìn)、肺結(jié)核等急慢性病史或心、肝、腎等嚴(yán)重臟器功能障礙;⑤合并傳染性疾病孕婦。

    1.2儀器與試劑

    RNA提取試劑盒購自上海瓦蘭生物科技有限公司(貨號(hào):K1101)。紫外分光光度計(jì)購自美國賽默飛世爾科技(型號(hào):NanoDrop 2000)。反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自北京康瑞納生物科技有限公司(貨號(hào):R3564)。

    1.3研究方法

    1.3.1樣品采集及保存

    胎兒娩出后采集新鮮胎盤,無菌操作取胎盤組織各200mg左右分別用于免疫組織化學(xué)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)檢測(cè),避開鈣化、出血及梗死區(qū),放入冷凍管(經(jīng)焦炭酸二乙酯處理)中,-80℃保存待測(cè)。

    1.3.2 miR-206、TGF-β1和Smad3半定量檢測(cè)

    采用RNA提取試劑盒提取胎盤組織總RNA,總RNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)后取吸光度(A260/280)比值在1.8~2.1間的標(biāo)本用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄得模板cDNA。采用qRT-PCR法檢測(cè)miR-206、TGF-β1和Smad3的mRNA水平。反應(yīng)條件:95℃,5min;95℃,30s,58℃,30s,72℃,30s,循環(huán)40次。反應(yīng)體系:上下游引物(10μmol/L)各0.4μL,模板cDNA(50ng/μL)1μL,qPCR SYBR Green Master Mix 5μL,ddH2O 3.2μL。各樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)孔,采用2-ΔΔCT法計(jì)算胎盤組織miR-206、TGF-β1和Smad3相對(duì)表達(dá)量,軟件設(shè)計(jì)引物后交由上海生工生物工程有限公司合成,序列見表1。

    1.3.3 TGF-β1和Smad3蛋白表達(dá)檢測(cè)

    采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)胎盤組織中TGF-β1和Smad3蛋白表達(dá),依照試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化染色,其中PBS緩沖液替代一抗作為陰性對(duì)照。每張切片取10個(gè)視野,每個(gè)視野觀察200個(gè)細(xì)胞。免疫組化結(jié)果判定:結(jié)果由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病例醫(yī)師共同閱片判定,最終結(jié)果評(píng)估采用Adams等于1999年制定的半定量評(píng)分,依據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行綜合判定,陽性細(xì)胞比例:<1%為0分、1%~10%為1分、11%~50%記為2分、51%~80%記為3分、>80%為4分。染色強(qiáng)度:無著色記為0分、淺黃色記為1分、棕黃色記為2分、棕褐色記為3分。兩項(xiàng)乘積<2分則為陰性表達(dá),兩項(xiàng)乘積≥2分則為陽性表達(dá)。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 25.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)(n)和百分比(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示,三組間比較行單因素方差分析檢驗(yàn),進(jìn)一步組間兩兩比較行SNK-q檢驗(yàn);采用Pearson相關(guān)性分析檢驗(yàn)妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平與臨床資料的相關(guān)性;采用受試者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲線分析產(chǎn)后胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平對(duì)妊娠期高血壓疾病孕婦病情的評(píng)估價(jià)值,采用Z檢驗(yàn)進(jìn)行曲線下面積(area under the curve,AUC)比較。P<0.05表示為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1各組一般資料比較

    各組年齡、孕前BMI、孕周、孕次、產(chǎn)次、肌酐、血小板計(jì)數(shù)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);對(duì)照組、妊娠期高血壓組、子癇前期組的舒張壓、收縮壓、24h尿蛋白均依次升高,清蛋白、新生兒體重、胎盤重量均依次降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值介于44.096~834.610之間,P<0.05),見表2。

    2.2各組胎盤組織miR-206、TGF-β1和Smad3半定量檢測(cè)結(jié)果比較

    對(duì)照組、妊娠期高血壓組、子癇前期組胎盤組織TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA均依次升高,miR-206依次降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值介于80.929~111.880之間,P<0.05),見表3。

    2.3各組胎盤組織TGF-β1、Smad3免疫組化檢測(cè)結(jié)果比較

    對(duì)照組、妊娠期高血壓組、子癇前期組胎盤組織TGF-β1蛋白表達(dá)陽性率、Smad3蛋白表達(dá)陽性率均依次升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為39.400、54.180,P<0.05),見表4和圖1。

    2.4妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平與臨床資料的相關(guān)性

    Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織miR-206與收縮壓、舒張壓、24 h尿蛋白負(fù)相關(guān),與清蛋白、新生兒體重、胎盤重量正相關(guān)(r值介于-0.514~0.507之間,P<0.05);TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA與清蛋白、新生兒體重、胎盤重量負(fù)相關(guān),與收縮壓、舒張壓、24 h尿蛋白正相關(guān)(r值介于-0.512~0.519之間,P<0.05),見表5。

    2.5產(chǎn)后胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平對(duì)妊娠期高血壓疾病孕婦病情的評(píng)估價(jià)值

    以產(chǎn)后胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平單獨(dú)檢測(cè)值及聯(lián)合預(yù)測(cè)概率值為檢驗(yàn)變量,以是否發(fā)生妊娠期高血壓疾病為狀態(tài)變量繪制ROC曲線,結(jié)果顯示,胎盤組織miR-206、TGF-β1 mRNA和Smad3 mRNA水平單獨(dú)及聯(lián)合評(píng)估妊娠期高血壓疾病孕婦病情的AUC分別為0.781、0.840、0.837、0.951,三者聯(lián)合評(píng)估AUC高于單獨(dú)評(píng)估AUC,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z值分別為3.830、2.788、2.863,P<0.05),見表6、圖2。

    3討論

    3.1妊娠期高血壓疾病發(fā)病特點(diǎn)及機(jī)制

    妊娠期高血壓疾病作為臨床一種常見妊娠期疾病,主要分為四類:妊娠期高血壓、子癇前期、慢性高血壓和慢性高血壓并發(fā)子癇前期[7-8]。妊娠期高血壓疾病通常在妊娠20周之后發(fā)病,主要特征為內(nèi)皮細(xì)胞損傷、全身小血管痙攣、局部缺血[9-10]。子癇前期癥狀與母體高血壓、腎功能不全伴蛋白尿、內(nèi)皮功能障礙、滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)不良和胎兒結(jié)局異常等均存在密切聯(lián)系[11]。目前研究顯示,胎盤淺著床導(dǎo)致的胎盤組織局部缺血缺氧是子癇前期疾病進(jìn)展的公認(rèn)機(jī)制[12-14]。

    3.2妊娠期高血壓疾病患者miR-206、TGF-β1和Smad3表達(dá)趨勢(shì)及生物機(jī)制

    臨床若能通過相關(guān)指標(biāo)及時(shí)診斷妊娠期高血壓疾病并評(píng)估其疾病進(jìn)展,則有利于在孕婦妊娠早期進(jìn)行有效預(yù)防和逆轉(zhuǎn)。張麗等[15]研究結(jié)果顯示,TGF-β1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、糖基化終末產(chǎn)物與妊娠期高血壓疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。Qi等[16]發(fā)現(xiàn),miR-146a、Smad3在嚴(yán)重子癇前期中分別低表達(dá)和高表達(dá),其表達(dá)異常可通過影響滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、凋亡等參與疾病進(jìn)展。以上研究均可通過相關(guān)指標(biāo)評(píng)估患者疾病進(jìn)展,然而妊娠期高血壓疾病是一種受多因素影響的復(fù)雜疾病,其指標(biāo)變化可能不具有特異性,需在臨床中探索更多有效指標(biāo)對(duì)其預(yù)防和治療進(jìn)行指導(dǎo)。

    既往研究中,miR-142-3p可通過調(diào)控TGF-β1/Smad3信號(hào)通路抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲和遷移,從而在人類胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用,而滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)不足可造成子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄僅限于蛻膜段,從而導(dǎo)致胎盤缺血缺氧和淺著床,引發(fā)子癇前期的一系列病理生理改變[17]。本研究結(jié)果顯示,子癇前期患者胎盤組織中TGF-β1和Smad3表達(dá)水平顯著高于妊娠期高血壓患者和健康孕婦,miR-206顯著低于妊娠期高血壓患者和健康孕婦,與龔寶蘭等[18]和陳亞玲等[19]研究結(jié)果基本一致?;诩韧芯客茰y(cè)本研究結(jié)果中TGF-β1和Smad3在妊娠期高血壓疾病進(jìn)展中可能發(fā)揮促進(jìn)作用,miR-206可能發(fā)揮抑制作用,分析認(rèn)為miR-206病理性降低可能影響TGF-β1/Smad3信號(hào)通路相關(guān)因子及TGF-β1和Smad3蛋白表達(dá)水平,進(jìn)而造成滋養(yǎng)層細(xì)胞分化及侵襲能力下降,侵入子宮螺旋動(dòng)脈和子宮蛻膜的能力減弱,造成胎盤淺著床,母體對(duì)胎盤供血量出現(xiàn)下降,造成內(nèi)皮細(xì)胞損傷和胎盤血管功能異常,推動(dòng)子癇前期疾病進(jìn)展。此外,Awobajo等[20]研究顯示,TGF-β1的異常表達(dá),可促發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激,導(dǎo)致組織損傷?;谏鲜鲅芯客茰y(cè)本研究中miR-206、TGF-β1和Smad3亦可能通過相關(guān)作用增加血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷和氧化應(yīng)激,而胎盤血管抵抗炎癥作用減弱,進(jìn)一步加劇血管內(nèi)皮損傷,引發(fā)子癇前期等妊娠期高血壓疾病。但上述結(jié)論均為本研究依據(jù)miR-206、TGF-β1、Smad3在既往研究中的生理作用而做出的推測(cè),其具體生物機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

    3.3 miR-206、TGF-β1和Smad3在妊娠期高血壓疾病中的臨床評(píng)估價(jià)值

    本研究中miR-206、TGF-β1、Smad3與收縮壓、舒張壓、尿蛋白等指標(biāo)呈顯著相關(guān)性,提示miR-206、TGF-β1和Smad3表達(dá)異??赡苓M(jìn)一步影響患者血壓水平,使其血壓控制不佳,推測(cè)miR-206表達(dá)越低,TGF-β1和Smad3表達(dá)越高,動(dòng)脈血管的壓力越大,使得胎盤組織缺血缺氧更加嚴(yán)重。本研究ROC曲線結(jié)果進(jìn)一步顯示,產(chǎn)后胎盤組織中miR-206、TGF-β1和Smad3三者聯(lián)合后可有效評(píng)估妊娠期高血壓疾病進(jìn)展,聯(lián)合評(píng)估的AUC可達(dá)0.951。進(jìn)一步反映miR-206、TGF-β1和Smad3可能與妊娠期高血壓疾病進(jìn)展有關(guān),當(dāng)miR-206低于0.87、TGF-β1高于1.31、Smad3高于1.23時(shí),患者病情進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)較高,可為今后妊娠期高血壓疾病的臨床診治提供參考。

    綜上,miR-206在妊娠期高血壓疾病患者的胎盤組織中呈低表達(dá),TGF-β1和Smad3高表達(dá),推測(cè)三者可能通過相互作用參與妊娠期高血壓疾病進(jìn)展,均有望作為妊娠期高血壓疾病進(jìn)展的生物指標(biāo),具有重要的臨床價(jià)值。然而本研究并未對(duì)生物機(jī)制進(jìn)行探究,其涉及的相關(guān)信號(hào)通路將在今后進(jìn)一步深入探討。

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